Разное

Ттх 124 мерседес: OM602 — двигатель Мерседес ОМ 602 2.5 — 2.9 литра

alexxlab alexxlab

Содержание

Двигатель M104 E32 | Проблемы, ремонт, масло, тюнинг и др.


Характеристики двигателя М104

Производство Stuttgart-Bad Cannstatt Plant
Марка двигателя M104
Годы выпуска 1991-1998
Материал блока цилиндров чугун
Система питания инжектор
Тип рядный
Количество цилиндров 6
Клапанов на цилиндр 4
Ход поршня, мм 84
Диаметр цилиндра, мм 89.9
Степень сжатия 9.2
10
(см. модификации)
Объем двигателя, куб.см 3199
Мощность двигателя, л.с./об.мин 220-231/5500-5800
(см. модификации)
Крутящий момент, Нм/об.мин 310-315/3750-4100
(см. модификации)
Топливо 95
Экологические нормы —
Вес двигателя, кг		 —
Расход  топлива, л/100 км (для E320 W124)
— город
— трасса
— смешан.
14.0
8.5
11.0
Расход масла, гр./1000 км до 1000
Масло в двигатель 0W-30
0W-40
5W-30
5W-40
5W-50
10W-40
10W-50
15W-40
15W-50
Сколько масла в двигателе, л 7.5
При замене лить, л ~7.0
Замена масла проводится, км  7000-10000
Рабочая температура двигателя, град. ~90
Ресурс двигателя, тыс. км
— по данным завода
 — на практике
—
400+
Тюнинг, л.с.
— потенциал
— без потери ресурса
600+
—
Двигатель устанавливался Mercedes-Benz 320 E / E 320 W124
Mercedes-Benz E 320 W210
Mercedes-Benz 300 SE W140
Mercedes-Benz S 320 W140
Mercedes-Benz SL 320 R129
SsangYong Chairman W

Надежность, проблемы и ремонт двигателя Мерседес М104 Е32 3.2 л.

Последний самый крупный гражданский рядный шестицилиндровый двигатель Мерседес М104 Е32 (не считая спортивных M104 E34 AMG и M104 E36 AMG) появился в 1991 году и был разработан на базе трехлитрового М104 Е30. Главным отличием М104 Е30 от М104 Е32, является блок цилиндров, в который поместили коленвал с увеличенным до 84 мм ходом поршня, а диаметр цилиндров увеличен с 88.5 мм до 89.9 мм. ГБЦ от М104 Е30, с 4 клапанами на цилиндр. Система впрыска топлива — распределенный впрыск. Начиная с 1992 года на М104 Е32 начали устанавливать впускной коллектор с переменной геометрией.
Вместо однорядной ненадежной цепи ГРМ на 103-ем движке, в новом М104 используется двухрядная, со значительно большим сроком службы.
Вместе с 3.2-литровом двигателем выпускались еще М104 Е30 и М104 Е28.

Очередная версия шестицилиндрового двигателя, уже в V-образном исполнении, под обозначением М112 Е32, появилась в 1997 году и за год заняла место старого рядного М104 Е32.

Модификации двигателей М 104 Е 32

1. M104.990 (1991 — 1993 г.в.) — первая версия мощностью 231 л.с. при 5800 об/мин, крутящий момент 310 Нм при 4100 об/мин. Степень сжатия 10. Устанавливался движок на Mercedes-Benz 300 SE/SEL W140.
2. M104.991 (1993 — 1998 г.в.) — аналог рестайлингового М 104.990 для Mercedes-Benz SL320 R129.
3. M104.992 (1992 — 1997 г.в.) — аналог М 104.991, степень сжатия снижена до 9.2, мощность 220 л.с. при 5500 об/мин, крутящий момент 310 Нм при 3750 об/мин. Устанавливался на Mercedes-Benz 320 E W124, E320 W124. 
4. M104.994 (1993 — 1998 г.в.) — аналог М 104.990 с другим впускным коллектором, мощность 231 л.с. при 5600 об/мин, крутящий момент 315 Нм при 3750 об/мин.  Устанавливался на Mercedes-Benz S 320 W140.
5. M104.995 (1995 — 1997 г.в.) — мощность 220 л.с. при 5500 об/мин, крутящий момент 315 Нм при 3850 об/мин. Устанавливался на Mercedes-Benz E 320 W210.

Проблемы и недостатки двигателей Мерседес М104 3.2 л.

1. Течи масла. В двигателе М104 существует проблема периодических течей прокладок ГБЦ, П-образной прокладки и маслянного фильтра. Устраняется неисправность заменой соответствующей прокладки.

2. Перегрев мотора. Довольно неприятная проблема 104-го двигателя это склонность к перегреву. В случае проявлений симптомов на вашем моторе, необходимо проверить состояние радиатора и вискомуфты, которая живет около 100 тыс. км. Перегрев ведет к короблению ГБЦ, первыми шагами к данной неисправности это вышеописанные течи из под прокладок.
Кроме того, дешевое низкокачественное моторное масло ведет к засорению маслофорсунок, как следствие задиры и шум. При использовании качественного масла, бензина и регулярном техническом обслуживании, двигатель М104 практически неубиваем, один из самых надежных силовых агрегатов от Mercedes-Benz и имеет ресурс 400-500 и больше тыс. км.

Тюнинг двигателя Мерседес М104

Компрессор. Турбо

Переделка 3.2 л в 3.6 л. AMG одна из самых первых мыслей у владельца М104 Е32, однако для реализации подобных проектов потребуется заменить коленвал, шатуны, поршни, доработать ГБЦ, заменить распредвалы и форсунки, насос и прочее прочее. Проще либо сразу купить двигатель Mercedes-Benz M104 E36 AMG, либо установить наддув на стандартный двигатель и получить еще больше мощности. Для этих целей подойдет какой-нибудь скромный компрессор кит (например на Eaton M62), надуть 0.5 бар в стандартную поршневую на толстой прокладкой ГБЦ, с форсунками на 350 сс и более производительным топливным насосом, выхолопом 3», настроить на MegaSquirt/VEMS получим ~300 л.с. Вместо компрессора можно найти турбокит от Mossellman и на схожем давлении получим такую же мощность.

В случае если подобная отдача покажется невысокой, нужно либо купить более мощный и современный двигатель Мерседес, либо обратить внимание на киты от Turbo Bandit, после установки которых автомобиль станет мало похож на городской.

РЕЙТИНГ ДВИГАТЕЛЯ: 5-

<<НАЗАД

Двигатель Mercedes OM601, описание и характеристики

Двигатель OM601 — это 4-цилиндровый дизельный мотор от компании Mercedes-Benz. Широкое применение двигатели Mercedes OM 601 нашли среди таксистов. Они ценятся во многом благодаря своей долговечности. В связи с этим становится возможным экономить значительные средства на обслуживании данных двигателей, так как периоды между очередными сервисными работами достаточно длительны.

Главные особенности двигателя OM601 —
гидравлические толкатели в приводе клапанов, алюминиевая головка блока цилиндров и насос высокого давления с автоматической прокачкой для удаления воздуха.

Эти моторы более высокооборотные, отличаются шумностью, большей литровой мощностью и экономичностью. В то же время они требуют существенно более квалифицированного обслуживания. На двигателях нередки отказы гидротолкателей из-за ухудшения условий смазки, сопровождающиеся характерным стуком клапанов.

Технические характеристики

Вид двигателя Дизельный
Начало выпуска 10/1988
Мощность, кВт при Об/мин 58-60 при 4000
Мощность, л.с. при Об/мин 72-89 при 4000
Объем, куб.см. 2299
Количество цилиндров 4
Количество клапанов 8
Момент вращения, Нм при Об/мин 150 при 2800
Компрессия 22.0:1
Диаметр цилиндра, мм 89
Ход поршня, мм 92
Подшипники коленвала 4
Форма двигателя ряд
Вид горючего дизельное топливо
Подача горючей смеси рядный насос впрыска
Турбина всасывающее устройство
Головка циллиндра SOHC/OHC
ГРМ цепь
Охдаждение водяное охлаждение

Моторы Mercedes OM 601 имеют 4 цилиндра (по 2 клапана), установленные в один ряд. Эти двигатели выпускаются в двух версиях – с объемом рабочей области равном 2 л. и 2,3 л. Вторая версия изначально выпускалась для рынка Северной Америки, однако эту модификацию можно встретить и на других континентах.

Основной материал, используемый при изготовлении двигателей OM601 это легкий алюминий. Это позволило существенно снизить вес и, соответственно, увеличить динамику движения транспортного средства.

Распределительные валы и насос впрыска топлива приводятся в движение дуплексной цепью от коленчатого вала. Отдельная однорядная цепь приводит в движение масляный насос от коленчатого вала. Подача топлива — это непрямой впрыск через форкамеру. Топливный насос представляет собой механический блок впрыска топлива с механическим регулятором скорости, автоматической компенсацией высоты и регулированием холостого хода с учетом нагрузки. Смазка рядных многосекционных ТНВД дизелей OM601 осуществляется подачей в них масла из общего контура системы смазки двигателя. Поэтому экономия на качестве моторного масла и сроках его замены приводит к износу не только двигателя, но и распределительного вала насоса, толкателей и поворотных втулок плунжеров, а также зубчатой рейки и регулятора насоса.

Механический топливный впрыск осуществляется при помощи насоса, работающего под высоким давлением. Двигатели Mercedes OM601 завоевали уважение не только благодаря экономичности, но и надежности, выносливости и безопасности. Они без проблем преодолевают крутые подъемы и спуски и безотказно работают на дорогах со сложными участками.

Типичные неисправности

Из-за усложнённой конструкции большое количество узлов и элементов попадает в группу риска. Это не касается ЦПГ, отличающейся высокой прочностью. Отменным качеством обладают также турбина и двухмассовый маховик. Частым дефектом является появление течи масла из-под крышки вакуумного насоса усилителя тормозов и управления двигателем. Самые характерные неполадки, которые возможны на двигателе OM601:

  • затруднённый пуск, что связано часто с износом ТНВД или реже — неполадками в системе впрыска;
  • заметное снижение мощности и оборотов, что объясняется неисправностью механизма заслонок, установленных во впускном коллекторе;
  • чрезмерно медленное нагревание моторной установки, вызванное порчей термостата;
  • неожиданный переход двигателя в аварийный режим — остановка, что связано с неисправностями форсунок;
  • шум и стуки, вызванные проблемами с цепью ГРМ.

Несвоевременная замена цепи и успокоителей может привести к ее обрыву, что часто полностью выводит из строя головку блока. Поэтому механизм газораспределения надо периодически проверять.

Расшифровка маркировки

OM ДВС, работающий на тяжелом моторном топливе (дизельный двигатель)
601 Тип двигателя: рядный

За время своего существования модели претерпели множество изменений, в результате которых они получили современную систему топлива, не допускающую попадания в окружающую среду токсичных выбросов. Таким образом, эти моторы соответствуют европейским экологическим стандартам. Изменения коснулись и самой конструкции: в последних версиях для производства моторов Мерседес OM 601 используется легкий алюминий, что позволило снизить массу двигателей и улучшить динамику движения машины.

лучшее масло, какой ресурс, количество клапанов, мощность, объем, вес

Серия дизельных двигателей Мерседес ОМ 602 на 2.5 и 2.9 литра собиралась с 1985 по 2001 год и устанавливалась на многие популярные модели концерна, типа W124, W201, W210 или W463. Кроме предкамерных версий мотора, предлагалась модификация с прямым впрыском топлива.

С 1987 года автомобили G-класса стали комплектоваться дизелями следующего поколения, к 1989 году полностью вытеснившие предыдущую серию. Это предкамерные 5-цилиндровые атмосферные дизели ОМ602.931 (2,5л, 90л.с.), ОМ602.942 (2,9л, 100 л.с.), б-цилиндровый дизель ОМ603.931 (3,0 л, 113 л.с.) и 6-цилиндровый турбодизель ОМб03.972 (3,5л, 150 л.с.). Их главные особенности: гидравлические толкатели в приводе клапанов, алюминиевая головка блока цилиндров, насос высокого давления с автоматической прокачкой для удаления воздуха.

Технические характеристики

Объем двигателя, куб.см 2497
Максимальная мощность, л.с. 122 — 126
Максимальный крутящий момент, Нм (кг*м) при об/мин 225 (23) / 2400
231 (24) / 2400
231 (24) / 2800
Используемое топливо Дизельное топливо
Расход топлива, л/100 км 7.9 — 8.4
Тип двигателя Рядный, 5-цилиндровый
Диаметр цилиндра, мм 87
Ход поршня, мм 84
Количество клапанов на цилиндр 2-4
Максимальная мощность, л.с. (кВт) при об./мин. 122 (90) / 4600
125 (92) / 4600
126 (93) / 4600
Степень сжатия 22:1
Нагнетатель Турбина
Выброс CO2, г/км 199 — 204
Доп. информация о двигателе SOHC

Моторы этой серии более высокооборотистые, отличаются меньшей шумностью, большей литровой мощностью и экономичностью. На них нередки отказы гидротолкателей из-за ухудшения условий смазки, сопровождающиеся характерным стуком клапанов. Двигатель OM602.942 устанавливался на Mercedes G290 и Ssang Yong Musso.

Несвоевременная замена цепи и успокоителей, а также дефект гидронатяжителя могут привести к ее обрыву, что очень часто полностью выводит из строя головку блока (на двигателях предыдущей серии обычно ломало распредвал, но головка оставалась целой). Поэтому механизм газораспределения надо периодически проверять и после пробега 200 тыс. км обязательно менять цепь, успокоители и натяжитель.

У моторов объемом 3,5 л нередки случаи прогара прокладки головки блока между цилиндрами, причем иногда даже при отсутствии сколько-нибудь существенного нарушения температурного режима. По-видимому, это связано с меньшим расстоянием между цилиндрами, ведь двигатель объемом 3,5 л выполнен на базе 3-литрового турбодизеля ОМ603.962 и увеличение рабочего объема достигнуто за счет увеличения диаметра цилиндра с 87 до 89 мм и хода поршня с 84 до 92,4 мм.

Интересно отметить, что 5-цилиндровому двигателю объемом 2,9 л ОМ602.942, имеющему такие же диаметр цилиндра и ход поршня, этот дефект совершенно несвойственен, по-видимому, по причине меньшей мощности и отсутствия турбонаддува. Частым дефектом является появление течи масла из-под крышки вакуумного насоса усилителя тормозов (на моторах старого типа эта неисправность встречалась реже).

Модификации OM602

Самые известные модификации:

  • 912 — силовой агрегат с рабочим объёмом 2497 куб. см. Он развивает мощность в 94 л.с. На каждый цилиндр приходится по 2 клапана.
  • 911 — тот же рабочий объём, но мощность выше — 90 л.с. На каждый цилиндр приходится по 4 клапана.
  • 962 — версия двигателя с турбиной, с тем же объёмом, но развивающая уже 126 л.с. Клапанов на цилиндр 2.

Характеристики остальных модификаций:

602.911 2497 куб. см, мощность 90 л.с. (66 кВт) Австралия, США, Япония
602.911
602.912
602.930		 2497 куб. см, мощность 94 л.с. (69 кВт)
602.931 2497 куб. см, мощность 84 л.с. (62 кВт)
602.938
602.939		 2497 куб. см, мощность 94 л.с. (69 кВт) Для Gelaendewagen, бортовая сеть 24В.
602.940 2874 куб. см, мощность 95 л.с. (70 кВт)
602.941 2874 куб. см, мощность 88 л.с. (65 кВт)
602.942 2874 куб. см, мощность 98 л.с. (72 кВт)
602.946 2874 куб. см, мощность 95 л.с. (70 кВт)
602.947 2874 куб. см, мощность 98 л.с. (72 кВт) Для Gelaendewagen, бортовая сеть 24В.
602.948 2874 куб. см, мощность 97 л.с. (71 кВт) Для Gelaendewagen, бортовая сеть 24В. OM 602 D29
602.961 2497 куб. см, мощность 122 л.с. (90 кВт) с турбонаддувом. OM 602 A. США, Япония
602.961
602.962		 2497 куб. см, мощность 126 л.с. (93 кВт) с турбонаддувом. OM 602 A
602.962 2497 куб. см, мощность 122 л.с. (90 кВт) с турбонаддувом. OM 602 A. США, Япония
602.980 2874 куб. см, мощность 122 л.с. (90 кВт) с турбонаддувом. OM 602 DE LA
602.981 2874 куб. см, мощность 122 л.с. (90 кВт) с турбонаддувом. OM 602A DE 29 LA
602.982 2874 куб. см, мощность 129 л.с. (95 кВт) с турбонаддувом. OM 602 DE LA
602.983
602.984
602.985
602.986		 2874 куб. см, мощность 122 л.с. (90 кВт) с турбонаддувом. OM 602A DE LA
602.990 63 кВт (86 л.с.)
602.994 72 кВт (98 л.с.)

Недостатки и проблемы ОМ 602

  • сильные вибрации данного дизельного двигателя негативно влияют на ресурс его опор;
  • цепь ГРМ служит около 200-250 тысяч км, а при ее обрыве трескается головка блока;
  • при использовании дешевого либо старого антифриза часто пробивает прокладку ГБЦ;
  • от некачественного масла гидрокомпенсаторы могут застучать на пробеге в 90 000 км;
  • также немало проблем владельцам подкидывает вакуумная система управления ТНВД.

Технические характеристики Mercedes-Benz 609 (Мерседес-Бенц 609)

Для просмотра технических характеристик выберите марку и модель автомобиля

Марка *:

МаркаACAcuraAixamAlfa RomeoAlpinaAlpineAMCArgoArielAroAsiaAston MartinAudiAustinAustin HealeyAutobianchiAutosanAviaBarkasBartolettiBAWBedfordBeijingBentleyBlonellBMWBOVABrillianceBristolBugattiBuickBYDCadillacCallawayCarbodiesCaterhamChanaChanganChangFengChangheCheryChevroletChryslerCitroenCizetaCoggiolaColeman MilneDaciaDadiDaewooDAFDaihatsuDaimlerDallasDatsunDe TomasoDeLoreanDerbiDerwaysDFSKDodgeDongFengDoninvestEagleEfiniExcaliburFAWFerrariFiatFiskerFordFotonFreightliner FSOFuqiGac GonowGeelyGeoGMCGonowGreat WallGrozHafeiHaimaHarley-DavidsonHavalHawtaiHindustanHINOHoldenHondaHowoHuangHaiHummerHurtanHyosungHyundaiInfinitiInnocentiInternationalInvictaIran KhodroIrbisIsderaIsuzuIVECOJACJaguarJCBJeepJiangnanJinbeiJMCKawasakiKiaKoenigseggKomatsuKTMLamborghiniLanciaLand RoverLandwindLDVLeaderFoxLexusLifanLincolnLoncinLotusLTILuxgenM1NSKMahindraMANMarcosMarlinMarussiaMarutiMaseratiMaxusMaybachMazdaMcLarenMegaMercedes-BenzMercuryMetrocabMGMinelliMiniMitsubishiMitsuokaMonte CarloMorganNAVECONeoplanNissanNobleNysaOldsmobileOpelOscaPaganiPanozPaykanPeroduaPeugeotPlymouthPontiacPorschePremierProtonPumaQorosQvaleRAFRavonReliantRenaissance CarsRenaultRolls-RoyceRonartRoverSaabSaleenSamandSamsungSantanaSaturnScaniaScionSEATSetraShifengShuangHuanSkodaSMASmartSokonSoueastSpectreSpykerSsangYongStelsSubaruSuzukiSymTalbotTataTatraTeslaTianmaTianyeTofasToyotaTrabantTriumphTVRVauxhallVectorVenturiVolkswagenVolvoVortexWartburgWestfieldWiesmannWulingXin KaiYamahaYuejinZastavaZXБАЗБелАЗБогданВАЗ (Lada)ВИСВТЗГАЗГуранЗАЗЗИЛИЖКАМАЗКрАЗЛиАЗЛуАЗМАЗМосквичМТЗПАЗСеАЗСМЗТагАЗУАЗУралХТЗЧТЗЯВА

Модель *:

Модель 100 1117123124126 13171517162716351838190200207208210220230240260280307308310410608609611612711809811814914A-КлассActrosAMG GTAtegoAxorB-КлассC-КлассCitanCL-КлассCLA-КлассCLC-КлассCLK-КлассCLS-КлассE-КлассG-КлассGL-КлассGLA-КлассGLA-КлассCGLC-КлассGLE-КлассGLK-КлассM-КлассO303R-КлассS-КлассSL-КлассSLK-КлассSLR-КлассSLS AMGSprinterT1V-КлассVaneoVarioVianoVito

Технические характеристики Mercedes-Benz 609 (Мерседес-Бенц 609). На этой странице вы найдете характеристики различных модификаций Mercedes-Benz 609: типы кузова, год выпуска, клиренс и прочие особенности.

Mercedes-Benz 410 D — 1994 — « Мерседес-бенц 410. Самый удачный автомобиль от Mersedes.»

Решила написать отзыв на наш автомобиль единственный в семье Мерседес-бенц 410, на котором работает муж, а также в нерабочее время мы на нем ездим по свои делам.

Когда муж работал наемным водителем у ИП на автомобиле мерседес-бенц 410

ему не очень нравилось работать на кого то, и мы решили приобрести такой же автомобиль. Хозяин автомобиля предложил нам его выкупить за небольшую стоимость.

Пробег у этого автомобиля переваливал за 600 000 км. С таким пробегом автомобили я не рекомендую покупать. Муж работал на нем в пределах нашего города.

Город небольшой, пробег был небольшой и поэтому автомобиль редко ломался за исключением постоянно гниющего кузова.

Чтобы автомобиль хорошо выглядел, муж его красил 2 раза в год. Но при этом, рама была живая и ни разу не варена. Гниль в основном была по низам.

Из поломок было в первую очередь задние тормозные цилиндры. Они текли через каждые полгода. Скорее всего из-за большой выработки барабана. Они были родные и их уже надо было давно менять.

Работал муж на ней, зарабатывать получалось, потому что не приходилось ездить на далекие расстояния.

Но из-за неосторожности мужа машина поломалась: он ее перегрел и двигатель начал газить. Подняли голову и оказалось что она треснута. И мало того, она была уже неоднократно варена.

Вообщем ее заварили и муж продолжал работать, но через месяца 2-3 опять газы пошли и опять все повторно. Намучились с этим.

Через год после покупки наездил муж всего 15 000 км, двигатель резко начал жрать масло. Загнали на сервис, пришлось делать капиталку двигателя. Капиталка выскочила около 1900 долларов, благо денег заработал. Следующие 40 000 км, ездили с удовольствием. Меняли расходники, крестовины, тормозные колодки. В принципе ничего особо ничего не ломалось.

Когда на адометре было 666 000 км., блок двигателя пробил шатун. Двигатель капиталить уже нельзя было и поэтому пришлось купить б. у., Купили на разборке из Франции за 2300 долларов и это было очень хорошим решением. Двигатель оказался очень хороший. В первом случае надо было сделать тоже самое, а не капиталить, экономится много времени.

Вывод можно сделать один: машина хорошая, если она до 300 000 км. Это муж понял потом, когда купил такую же другую машину с пробегом 288 000 км. На старой не стал ездить из-за принципа. Машина подвела в очень ответственный момент.

После того, как купил эту машину разница между машинами была существенная. Кузов у этой машины ни разу не был варен, выработка на многих деталях была несущественная, ее даже ремонтировать было в удовольствие, не то чтобы ездить и работать. Говорят, что у этой машины слабое место это рама, но мы этого не заметили. Муж грузил 3 тонны, иногда и 3200 -3300. Расстояния были неблизкие.

Я считаю, что рамы ломает из-за того, что они сгнивают.

Муж начал ездить на дальние расстояния и почувствовал, что у этой машины малая крейсерная скорость — 70 км в час, но если встречный или даже боковой ветер, то скорость уже другая, в отличии от цельнометаллического. Одним словом, лошадиных сил тут явно не хватает, их всего тут 95.

На этом авто уже проехал 70 000 км, менял только расходники и один раз реле поворота. Машина очень нравится.

Расход топлива у цельнометаллического 9 литров на 100 км при скорости 65 км в час, у фургона 11-13 л на 100 км в зависимости от направления ветра.

За 9 лет эксплуатации 2 машин мерседес 410 Д можно выделить следующие выводы:

— чтобы хорошо работать, нужно покупать автомобиль с пробегом до 300 000 км.

из плюсов:

— легко ремонтируемый;

— дешевый в эксплуатации (запчасти недорогие, доступные)

из минусов:

— малая крейсерная скорость;

— очень слабая коррозийная стойкость.

Более подробно смотрите в видео

видео обзор

\

Дополнения:

Прошло 2 года после написания отзыва. Автомобиль проехал 80 000 км.

За это время менялась крестовина в кардане, уплотнительные колечки в насосе ТНВД

ремонтировал старцер, менял колодки.

По кабине пошла ржавчина (жучки) и рама тоже начала ржаветь. Были произведены работы по кузову по удалению ржавчины и покраске

Мы считаем, что за 2 года эксплуатации и пробег 80 000 км. у 24-летнего автомобиля очень мало поломок.

замена рессорных втулок

шины

Lexus RX330

Двигатель мерседес ом 366 технические характеристики

Главная » Разное » Двигатель мерседес ом 366 технические характеристики

лучшее масло, какой ресурс, количество клапанов, мощность, объем, вес

ОМ 366 – дизельный двигатель производства фирмы Mercedes Benz. Двигатель является четырехтактным, имеет объем 5958 кубических сантиметров, что соответствует 360 кубическим дюймам. Он представляет серию двигателей 300, которые начали выпускаться сразу после Второй мировой войны. Конкретно ОМ366LA увидел свет в 1984 году и заменил своего предшественника — ОМ362A, что выдавал на 6 цилиндрах 120 л.с.

Технические характеристики двигателя

Производитель Mercedes-Benz
Заводская маркировка OM 366
Объем двигателя, куб. см. 5958
Мощность двигателя, л.с. 136-270
Крутящий момент, Нм/об.мин ~402/1400
Количество цилиндров 6
Количество клапанов 12
Диаметр цилиндра, мм 97.5
Ход поршня, мм 133
Компрессия Turbo 10.5:1
N/Aspirated 12:1
Порядок работы цилиндров 1-5-3-6-2-4
Вес 515 кг
Коренные опоры 7

Характеристики двигателя Mercedes OM366, моменты затяжки болтов, руководства

Характеристики дизельного двигателя OM366

Двигатель Mercedes OM366, рабочий объем, диаметр цилиндра, ход поршня, степень сжатия, вес

Рабочий объем
5,958 литра, 346 CID

9000
97,5 мм, 3,839 дюйма

Ход поршня
133,0 мм, 5,236 дюйма

Степень сжатия
17,25: 1 Без наддува
17,1: 1 с компенсацией
16,5: 1 с турбонаддувом
16.5: 1 с турбонаддувом

Вес
приблизительно
OM366 — 981 фунт, 445 кг
OM366A — 1014 фунтов, 460 кг
OM366LA — 1036 фунтов, 470 кг

OM366 MercedesArrangement 19
19
двигатель line 6,
, 4-тактный цикл
, без наддува

OM366C ,
, рядный двигатель 6,
, 4-тактный цикл,
, с компенсацией высоты

OM366A, ,
, рядный двигатель, 6,
, четырехтактный цикл,
, с турбонаддувом,
OM366LA
рядный 6-цилиндровый двигатель,
4-тактный цикл
с турбонаддувом
с промежуточным охлаждением

OM366 Mercedes Мощность и крутящий момент


Мощность
OM366
100 кВт, 134 л.с. при 2800 104C кВт, 139 л.с. при 2800 об / мин

OM366A
125 кВт, 168 л.с. при 2600 об / мин

OM366LA
150 кВт, 201 л.с. при 2600 об / мин

900 09 Крутящий момент
OM366
408 Нм, 301 фунт.фут при 1400 об / мин

OM366C
425 Нм, 313 фунт-фут при 1450 об / мин

OM366A
560 Нм, 479 фунт-фут при 1450 об / мин

OM366LA 9002 640 Нм при 47011640 Нм 1400 об / мин

размеры OM364 и OM366

.

Характеристики двигателя Mercedes OM364, моменты затяжки болтов, руководство

Характеристики дизельного двигателя OM364

Двигатель Mercedes OM364, рабочий объем, диаметр цилиндра, ход поршня, степень сжатия, вес

Рабочий объем
3,972 литра, 231 CID


97,5 мм, 3,839 дюйма

Ход поршня
133,0 мм, 5,236 дюйма

Степень сжатия
17,25: 1 Без наддува
17,1: 1 с компенсацией
16,5: 1 С турбонаддувом
16.5: 1 с турбонаддувом

Масса
приблизительно
OM364 — 739 фунтов, 335 кг
OM364A — 756 фунтов, 343 кг
OM364LA — 756 фунтов, 343 кг

OM366 — 981 фунтов, 445 кг
OM366A — 10 фунтов, 460 кг
OM366LA — 1036 фунтов, 470 кг

OM364 MercedesArrangement

OM364
рядный двигатель 4,
4-тактный цикл
без наддува

OM364C рядный двигатель 40006
4-тактный цикл
с компенсацией высоты

OM364A
рядный двигатель 4,
4-тактный цикл
с турбонаддувом

OM364LA
рядный двигатель 4,
4-тактный цикл
с турбонаддувом
с промежуточным охлаждением

и крутящий момент


Мощность
OM364
61 кВт, 82 л.с. при 2800

OM364C
70 кВт, 94 л.с. при 2800 об / мин

OM364A
85 к Вт, 114 л.с. при 2600 об / мин

OM364LA
100 кВт, 134 л.с. при 2600 об / мин

Крутящий момент
OM364N
266 Нм, 196 фунтов.фут при 1500 об / мин

OM364C
300 Нм, 221 фунт-фут при 1400 об / мин

OM364A
380 Нм, 280 фунт-фут при 1400 об / мин

OM364LA
408 Нм при 301 фунт-фут 1400 об / мин

размеры OM364 и OM366

.

Mercedes OM400 руководства и технические характеристики

двигатели OM400 Технические характеристики дизельного двигателя

Двигатели OM400 Mercedes Рабочий объем, диаметр цилиндра и ход поршня

Рабочий объем
OM401 — 9,57 литра, 584 CID
OM402 — 12,76 литра, 779 CID — 9000 CID литр, 973 CID
OM404 — 19,12 литра, 1168 CID

Диаметр цилиндра
125 мм, 4,92 дюйма

Ход
130 мм, 5,12 дюйма

Двигатели OM400 MercedesArrangement

OM407 Natural OM401LA — 6 В с турбонаддувом

OM402 — 8 В с естественным охлаждением
OM402LA — с дополнительным охлаждением с турбонаддувом 8 В

OM403 — Естественная аспирация 10 В

OM404 — 12 В с естественным аспирацией
OM404LA — 12 В с турбонаддувом с последующим охлаждением

5 Двигатели Mercedes

5 с турбонаддувом, мощность

5 крутящий момент

Масса
приблизительно
OM401 — 700 кг
OM401LA — 760 кг

OM402 — 815 кг
OM402LA — 875 кг

OM403 — 965 кг

OM404 — 1115 кг
OM404LA — 1200 кг

Степень сжатия 17
Естественная аспирация2: 1

Мощность
OM401 — 189 л.с., 141 кВт при 2500 об / мин
OM401LA — 296 л.с., 221 кВт при 2500 об / мин
OM402 — 252 л.с., 188 кВт при 2500 об / мин
OM402LA — 295 л.с., 220 кВт при 2500 об / мин
OM403 — 315 л.с., 235 кВт при 2500 об / мин
OM404 — 378 л.с., 282 кВт при 2500 об / мин
OM404LA — 443 л.с., 330 кВт при 2500 об / мин

Крутящий момент
OM401 — 462 фунт-фут, 627 Нм При 1300 об / мин
OM401LA — 540 фунт-фут, 734 Нм при 1300 об / мин
OM402 — 616 фунт-фут, 836 Нм при 1300 об / мин
OM402LA — 721 фунт.фут, 978 Нм при 1300 об / мин
OM403 — 760 фунт-фут, 1030 Нм при 1500 об / мин
OM404 — 912 фунт-фут, 1236 Нм при 1300 об / мин
OM404LA — 1247 фунт-фут, 1690 Нм при 1300 об / мин


.Характеристики двигателя

Mercedes OM352, моменты затяжки болтов, руководство пользователя

OM352 Diesel Engine Технические характеристики

двигатель Mercedes OM352, Смещение, Диаметр цилиндра, Ход, Степень сжатия, масса

Рабочий объем
OM352
5,675 литра, 346 CID

Диаметр цилиндра
97,0 мм, 3,819 дюйма

Ход поршня
128,0 мм 9,04 ,0

Степень сжатия : 1 Безнаддувный
16.0: 1 с турбонаддувом

Масса
приблизительно
OM352 — 980 фунтов, 445 кг
OM352A — 1013 фунтов, 460 кг

OM352 Мерседес Компоновка

OM352
Рядный 6-цилиндровый двигатель,
4-тактный цикл
Безнаддувный

OM352A
Рядный 6-цилиндровый двигатель,
4-тактный цикл
С турбонаддувом

OM352 Мерседес Мощность и крутящий момент

Мощность
OM352
94 кВт, 126 л.с. при 2800 об / мин

OM352A
124 кВт, 166 л.с. при 2800 об / мин

Крутящий момент
9009 OM11352 900 277 фунтов.фут при 1500 об / мин

OM352A
520 Нм, 384 фунт-фут при 1600 об / мин

OM352 Мерседес Размеры

приблизительно
OM352
длина = 1075 мм, 42 дюйма,
ширина = 630 мм, 25 дюймов,
высота = 875 мм, 34 дюйма

OM352A
длина = 1075 мм, 42 дюйма
ширина = 680 мм, 27 дюймов,
высота = 875 мм, 34 дюйма

.

Ohlins TTX от Rennsport Factory с двухсторонним демпфированием и регулируемым по высоте койловером или комплектом внутренней подвески

Описание

  • Амортизаторы мирового класса Ohlins TTX
  • Цельнопоршневой 46 мм
  • Стержень сквозной 30 мм
  • Двойная трубка X-over
  • Облегченная конструкция
  • Регулировка длины стойки и предварительного натяга пружины
  • Регулируемое в двух направлениях демпфирование
  • Справочная программа клапана

Всемирно известная линейка Ohlins TTX широко используется в различных спортивных, GT, туристических и гоночных прототипах в стиле Ле-Ман, а также является предпочтительным демпфером для многих высокопроизводительных автомобилей OEM.

TTX расшифровывается как Twin Tube X-over. Вместо жидкости, протекающей через поршень с портами и прокладками, как в однотрубных амортизаторах, жидкость протекает через клапаны.

При сжатии жидкость выталкивается через верх внутреннего цилиндра в клапан регулятора сжатия, через обратный клапан отбоя во внешний цилиндр и обратно к нижней стороне поршня. Как и в однотрубной системе, когда вал входит в цилиндр, такой же объем жидкости, поступающей в резервуар, выходит наружу, и это толкает поршень в резервуар.При отскоке жидкость выходит из внутреннего цилиндра во внешнюю трубу, через клапан регулировки отбоя, попадает в обратный клапан сжатия и обратно в верхнюю часть поршня.

По мере того, как через клапаны проходит гораздо большее количество жидкости, давление нарастает быстрее, что позволяет регуляторам существенно влиять на управление небольшими перемещениями. Благодаря отсутствию перекрестных помех между регуляторами и очень небольшому риску кавитации даже в самых экстремальных условиях этот демпфер подходит для всех типов условий автоспорта.

Поскольку давление азота применяется к жидкости с обеих сторон поршня, риск перехода жидкости в отрицательное давление снижается, что позволяет использовать более низкое давление азота, увеличивая чувствительность и уменьшая трение.

Этот набор предлагает индивидуальную регулировку отскока и сжатия.

Передняя часть основана на TTX 46MT со стойкой MacPherson и оснащена 46-миллиметровым твердым поршнем со сквозным стержнем 30 мм, внешняя труба сделана из алюминиевого сплава, который создает сверхжесткую, но легкую стойку.Задняя часть основана на TTX36, который имеет внутренний резервуар с улучшенным потоком масла и имеет конструкцию без сквозного стержня.

Справочная программа по клапанам позволяет отображать различные наборы прокладок для этого демпфера на стороне гонки на портативном компьютере, что упрощает замену клапанов на гоночной трассе без необходимости использования демпфера.

Также с серией TTX доступен комплект для продувки, который состоит из новой головки блока цилиндров, подготовленной для нового комплекта, блока клапанов и регулятора продувки.Этот комплект для продувки снижает пиковые нагрузки, что делает движение по бордюрам более плавным и, в конечном итоге, продлевает срок службы шин и снижает риск спуска.

Ohlins R8 V8 (1-е поколение) TTX-PRO Производительность профессионального уровня | Подвеска

TTX-PRO Производительность профессионального уровня для вашего спортивного автомобиля.

Жизнь предназначена для быстрой и красивой жизни. Вы устанавливаете свои собственные правила и следите за тем, чтобы все это знали. Ваше внимание к деталям проявляется во всем, что вы делаете, и, что более важно, в вашей манере вождения.Вместе с амортизаторами Öhlins TTX 36 Club Sport для Audi R8 каждая поездка будет соответствовать требованиям Grand Touring Racing. Наши амортизаторы разработаны прямо на основе гоночных амортизаторов GT3, что дает вам действительно «необычные» ощущения от вождения. С таким автомобилем, как Audi R8, вы не соглашаетесь на меньшее, кроме совершенства.

Мы знаем, что вам нравится внешний вид, который вы получаете, путешествуя по улицам или просыпаясь по городу простым нажатием на педаль газа. Внимание порождает уверенность, а с амортизаторами Öhlins TTX 36 Club Sport вы можете ездить быстро, но при этом чувствовать себя в безопасности и комфорте, достигая при этом максимальной производительности.О чем вы еще хотите попросить? С помощью функции регулировки в двух направлениях вы сможете точно настроить характеристики управляемости, чтобы стать королем любой гоночной трассы. Будьте неудержимы, наслаждайтесь идеальным отдыхом, и мы увидим вас в дороге.

Характеристики:

  • Общие
    • TTX-техника
    • Перестраиваемый
    • Ограниченная гарантия на 2 года
    • Испытано в солевом тумане на коррозию (ISO 9227)
    • Пружины заказываются отдельно
  • Передняя
    • Амортизатор TTX
    • 2-ходовая регулировка
    • Регулятор предварительного натяга пружины
    • Регулируется по высоте (прибл.От 0 до -10 мм ниже стандартного)
    • Винтовые пружины (140 Н / мм)
  • Задний
    • Амортизатор TTX
    • 2-ходовая регулировка
    • Регулятор предварительного натяга пружины
    • Регулируется по высоте (примерно на 25 мм ниже стандартного)
    • Винтовые пружины (140 Н / мм)

КОМПЛЕКТ ДЛЯ ОТМЕНА
Для автомобилей, оборудованных OE с электронной регулируемой подвеской, также следует использовать комплект для отмены Öhlins
.

Применимость:

Audi R8 V8 (1-го поколения)) — 2006-2015 гг.

Койловеры NEOMAX

Silver — 1985-1995 Mercedes-Benz E-Class (W124)

Койловеры NEOMAX от

Silver для Mercedes-Benz E-Class (W124) 1985-1995 годов идеально подходят для уличной езды и по-прежнему превосходят их на треке. Койловеры Silver NEOMAX представляют собой однотрубные амортизаторы, регулируемые по высоте, на которые распространяется 18-месячная ограниченная гарантия производителя.

Изготовление на заказ

Срок поставки заказных сборок составляет от 7 до 20 рабочих дней.Сборки Custom включают любую комбинацию следующих опций: комплекты Super Low, Swift Springs или нестандартные пружины.

Характеристики

  • Регулируемые пластины переднего развала T6 6061 для всех применений в стиле McPherson.
  • Koyo Japan Радиальный подшипник, Япония, стандарт верхней пружины для всех применений McPherson. Это устраняет заедание пружины, шум и улучшает обратную связь с драйвером.
  • 24 уровня регулировки демпфирования в сочетании с нашим высококачественным маслом для амортизаторов.Вы чувствуете не только щелчок в пальцах, но и каждую регулировку демпфирования на водительском сиденье.
  • Высокопрочная бесшовная ударная труба из углеродистой стали диаметром 52 мм, JIS G3445-STKM13C (DIN2393-ST44-2).
  • 44-миллиметровый поршень с характеристиками клапана отклоняющегося типа обеспечивает максимальную демпфирующую реакцию на низкой скорости для максимальной производительности и одновременно комфортной езды.
  • Однотрубная конструкция амортизатора — Увеличивает емкость амортизатора, а также рабочий объем по сравнению с двухтрубной конструкцией для максимальной производительности.
  • Демпферное масло высокой вязкости IP F.A. 5W обеспечивает наилучшую эффективность амортизации и контроля демпфирования.
  • Регулировка высоты осуществляется с помощью нижнего кронштейна, который предотвращает необходимость регулировки пружины или предварительной нагрузки, обеспечивая максимально возможное перемещение.
  • Пружины, гнутые в холодном состоянии, изготовлены из высокопрочной стали SAE9254, которая сохраняет стабильный модуль упругости.
  • Стальные нижние кронштейны с порошковым покрытием, подходящие для всех заводских тормозных магистралей и проводов из АБС-пластика, для простоты установки.
  • Нижние опоры из анодированного алюминия 6061 T6 для многорычажных систем подвески для снижения неподрессоренной массы.
  • 18-месячная ограниченная гарантия производителя.

Регулируемые пластины развала

Наши пластины развала сделаны из алюминия T6 6061 и защищены анодированием. Они входят в стандартную комплектацию передней части любой стойки в стиле McPherson и предназначены для регулировки развала колес до 3 градусов при любой высоте дорожного просвета, чтобы можно было выбрать нужное выравнивание.

Крепления для подушек-подушек

Наши крепления для подушек-подушек состоят из двух основных частей: стального подшипника SUJ2 и двухкомпонентного корпуса из хромомолибденовой стали.Крепления Pillowball обеспечивают работу без привязки и точную обратную связь с водителем.

Полностью регулируемая по высоте

Наши койловеры полностью регулируются по высоте с помощью нижнего крепления без необходимости изменять предварительную нагрузку и жертвовать ходом амортизатора. Просто ослабив нижнее стопорное кольцо и повернув весь койловер, вы сможете легко настроить высоту дорожного просвета или распределение веса для балансировки углов на треке.

OEM-Fit Стальные нижние опоры

Наши стальные нижние опоры тщательно спроектированы для обеспечения прочности с усилением ключевой области.Они разработаны с учетом всех функций OEM-системы, чтобы гарантировать надежную фиксацию каждой тормозной магистрали и жгута проводов датчика ABS. Это упрощает установку.

Нижние кронштейны из алюминия

T6 6061 Нижние кронштейны из алюминия используются в многорычажных подвесках. Эти компоненты САПР разработаны для обеспечения заводской установки и легче стальных компонентов, что также помогает снизить неподрессоренную массу.

Корпус амортизатора из углеродистой стали

Наши корпуса амортизаторов изготовлены из сверхпрочной углеродистой стали JIS G3445-STKM13C (DIN2393-ST44-2) и никелированы химическим способом для обеспечения устойчивости к коррозии и усталости в суровых климатических условиях.

Линейный поршень

В наших амортизаторах мы используем поршень линейного типа диаметром 44 мм. Поршень этого типа обеспечивает как отличные преимущества гусеницы, так и качество езды. Каждый амортизатор собирается вручную и проходит динамометрические испытания, чтобы гарантировать, что демпфирование и сжатие клапанов находятся в пределах 5%; изменение из стороны в сторону. Нет никаких выборочных проверок или тестов, каждый удар проходит динамометрические испытания. В случае выхода из строя шока внутренние компоненты выбрасываются, и он возвращается в сборочную комнату.

Большие валы из закаленной стали

Для наших поршневых валов мы используем закаленную сталь самого большого диаметра с хромированным покрытием. Благодаря обширным исследованиям и разработкам мы получили идеальный материал и диаметр, необходимые для обеспечения надлежащей прочности, необходимой для сохранения поперечной жесткости, а также предотвращения изгиба и сгибания при больших нагрузках, что приводит к преждевременному износу и снижению хода поршня. Это обеспечивает идеальное сочетание прочности и экономии веса.

Уникальные стопорные кольца

Наши стопорные кольца имеют особую уникальную конструкцию по сравнению с другими брендами на рынке.Они работают так же, как и любой другой фиксирующий хомут, хотя с нижней пружиной, имеющей ямки, а не прорези, вам не нужно беспокоиться о проскальзывании верхнего гаечного ключа вверх или вниз при выполнении необходимых регулировок. Это делает регулировку предварительной нагрузки гораздо менее балансирующей, что приводит к более быстрой и простой установке.

Дополнительные радиальные подшипники

Изготовлен из алюминия T6 6061 с использованием лучших подшипников Koyo Japan, наш верхний выступ радиального подшипника (только для приложений McPherson) позволяет пружинам свободно вращаться при сжатии.При сжатии пружины она может слегка поворачиваться, что может издавать небольшой шум, как будто пружины заедают. Такой же шум возникает и в приложениях McPherson, когда колесо поворачивается и пружина заедает. Верхние выступы радиальных подшипников позволяют валу поршня и верхней крышке вращаться отдельно от пружины и корпуса амортизатора, обеспечивая более плавное и тихое вращение.

Задние расширители регулировки

На некоторых автомобилях необходимо снять некоторые внутренние панели, чтобы добраться до регуляторов демпфирования.Удлинители демпфирующего регулятора можно использовать для перемещения ручки регулировки в легкодоступное место для быстрой регулировки на лету.

Полезные ссылки

Технические характеристики продукта

Автомобиль Mercedes Benz E-Class
Номер детали SM3019
Старый номер детали NM311
Название детали NEOMAX Койловеры
Код шасси W124
Передние пружины (по умолчанию) 12 кг / мм
Задние пружины (по умолчанию) 18.5 кг / мм (отдельная пружина)
Опция быстрых пружин (настраиваемая жесткость пружины) Да
Скорость задней пружины Примечание В некоторых комплектах жесткость задней пружины не может быть изменена. Пожалуйста, запросите подтверждение.
Сверхнизкий вариант Да
Передние верхние крепления Регулируемая верхняя пластина развала
Задние верхние крепления Верхнее крепление не входит в комплект

Крепление автомобиля

1985 9000-9000-9000 E-Class (W124)
  • 1986 Mercedes-Benz E-Class (W124)
  • 1987 Mercedes-Benz E-Class (W124)
  • 1988 Mercedes-Benz E-Class (W124)
  • 1989 Mercedes-Benz E- Класс (W124)
  • 1990 Mercedes-Benz E-Class (W124)
  • 1991 Mercedes-Benz E-Class (W124)
  • 1992 Mercedes-Benz E-Class (W124)
  • 1993 Mercedes-Benz E-Class ( W124)
  • 1994 Mercedes-Benz E-Class (W124)
  • 1995 Mercedes-Benz E-Class (W124)

    • 2020 Audi RS 6 Avant U.S. Дата выпуска и технические характеристики

    Мощный Audi RS 6 Avant прибудет в США в 2020 году

    По эксперту по продукту | Опубликовано в Информация о бренде, Новый выпуск, Подержанная Audi в четверг, 22 августа 2019 г., в 19:15

    2020 Audi RS 6 Avant в США Дата выпуска и технические характеристики

    Сделайте вашу следующую семейную поездку еще более приятной с помощью высокопроизводительного универсала, сочетающего роскошь и стиль мирового класса на каждом шагу. С дебютом мощного Audi RS 6 Avant 2020 года вы можете воплотить в жизнь свои автомобильные мечты.Узнайте больше о гусеничном универсале марки Audi из этого обзора даты выпуска Audi RS 6 Avant в США 2020 года и технических характеристик, созданных Autos of Dallas.

    ПОДРОБНЕЕ: 2020 Audi A4 США Дата выпуска и характеристики дизайна

    Когда Audi RS 6 Avant 2020 прибудет в Даллас и Форт-Уэрт?

    Ожидается, что Audi RS 6 Avant 2020 года поступит в Соединенные Штаты и в район Даллас-Форт-Уэрт в 2020 году.Когда он появится, Audi RS 6 Avant 2020 года сочетает в себе семейные атрибуты универсала и практичность кроссовера с характеристиками спортивного автомобиля, настроенного на гусеницу, в стильной упаковке. В версиях Audi RS 6 Avant разместятся пять пассажиров с элитным уровнем грузового пространства.

    2020 Audi RS 6 Avant Design, функции и характеристики двигателя

    Семейная версия Audi A6 Avant, совершенно новый Audi RS 6 Avant 2020 года будет привлекать внимание благодаря 10-спицевым 21-дюймовым стандартным колесам, решетке с сотовой решеткой Gloss Black, светодиодным лазерным фарам RS Matrix и дополнительным 22-дюймовым литые диски.Для удобства вас и вашей семьи Audi RS 6 Avant на 3,1 дюйма шире и на 0,8 дюйма ниже, чем Audi A6 Avant. Внутри Audi RS 6 Avant вас ждет отделка салона кожей Black Pearl Nappa и кожей Alcantara, передние сиденья с подогревом и охлаждением, информационно-развлекательная система Audi MMI® с двумя сенсорными экранами с функциями Virtual Cockpit и дисплеем RS Monitor.

    Performance лежит в основе Audi RS 6 Avant 2020 года, и он запускается и останавливается с 4,0-литровым двигателем V-8 с двойным турбонаддувом мощностью 591 л.с., который обеспечивает крутящий момент 590 фунт-футов и использует 48-вольтовую мягкую гибридную систему. .Audi RS 6 Avant, оснащенный восьмиступенчатой ​​автоматической коробкой передач с функцией контроля запуска, разгоняется до 100 км / ч за 3,6 секунды с максимальной скоростью 190 миль / час. Audi Quattro® AWD входит в стандартную комплектацию и улучшает характеристики за счет разделения крутящего момента 40:60 и способности передавать до 85 процентов крутящего момента на задние колеса. Регулируемая по высоте пневматическая подвеска входит в стандартную комплектацию Audi RS 6 Avant.

    ПОДРОБНЕЕ: All-Electric 2019 Audi e-tron Дата выпуска и технические характеристики

    Узнайте больше о последнем пополнении модельного ряда Audi в США из этого руководства по Audi RS 6 Avant U 2020 года.Дата выпуска и характеристики производительности созданы Autos of Dallas. Посетите каталог Autos of Dallas сегодня, чтобы найти подержанный автомобиль или кроссовер Audi, который соответствует вашему образу жизни!

    • Facebook
    • Твиттер
    • Pinterest

    Больше от Autos of Dallas

    Эта запись была опубликована в четверг, 22 августа 2019 г., в 19:15, в раздел «Информация о бренде», «Новый выпуск», «Подержанная Audi».Вы можете следить за любыми ответами на эту запись через канал RSS 2.0. И комментарии и запросы в настоящий момент закрыты.

    Конъюгаты полимер-тетродотоксин для индукции длительной местной анестезии с минимальной токсичностью

    Abstract

    Разработка местных анестетиков с пролонгированным эффектом от однократных инъекций представляет клинический и научный интерес. Необходимость в этом подчеркивается нынешней эпидемией опиоидов. Блокаторы натриевых каналов сайта 1, такие как тетродотоксин (ТТХ), чрезвычайно эффективны и могут обеспечивать очень длительную блокаду нервов, но продолжительность ограничена связанной системной токсичностью.Здесь мы сообщаем о системе, в которой медленное высвобождение ТТХ, конъюгированного с биосовместимым и биоразлагаемым полимером, сополи (триолдикарбоновой кислотой) -со-поли (этиленгликоль) (TDP), достигается гидролизом сложноэфирных связей. Блокада нервов высвобожденным TTX усиливается при введении в носителе со свойствами химического усилителя проницаемости (CPE). Высвобождение ТТХ можно регулировать путем настройки гидрофильности полимерной основы TDP. In vivo 1,0–80,0 мкг ТТХ, высвобождаемого из этих полимеров, вызывал блокаду нервов различной продолжительности, от нескольких часов до 3 дней, с минимальной системной или местной токсичностью.

    Тематические термины: Фармацевтика, Медицинские исследования, Доставка лекарств

    Введение

    Опиоиды часто являются основой периоперационного и хронического обезболивания, даже при относительно локализованной боли. Опиоиды имеют множество побочных эффектов, включая тошноту, помутнение сенсориума, зуд, задержку мочи и запоры. Если серьезно, то опиоидная терапия часто приводит к толерантности, зависимости, отвлечению внимания и передозировке со смертельным исходом. Опиоиды часто поступают системно и действуют преимущественно на центральную нервную систему, являющуюся источником основных побочных эффектов.Следовательно, растет интерес к местным и региональным подходам к лечению боли.

    Обычные аминоамидные и аминоэфирные местные анестетики являются основными соединениями, используемыми для местной и регионарной анестезии 1 , 2 . Хотя эти соединения эффективны, продолжительность их действия относительно коротка, и они могут вызывать серьезные сердечно-сосудистые и неврологические системные побочные эффекты 1 , 3 . Инкапсуляция в системах с замедленным высвобождением может продлить продолжительность нервной блокады обычных местных анестетиков и может значительно снизить системный эффект.Однако он может усугубить внутреннюю мио- и нейротоксичность обычных местных анестетиков и может оставить в нервах обломки, вызывая воспаление, которое может длиться дольше, чем длительность блокады нерва 1 , 3 , 4 .

    Учитывая эти ограничения, долгое время стояла цель разработать систему замедленного высвобождения местного анестетика, которая может обеспечить длительную блокаду периферических нервов с минимальными системными и местными побочными эффектами. С этой целью были изучены природные блокаторы натриевых каналов сайта 1 (S1SCB), такие как тетродотоксин (ТТХ), поскольку они чрезвычайно эффективны и вызывают минимальную местную токсичность 5 .Следовательно, S1SCB проходят клинические исследования на предмет местной анестезии 6 , 7 . Однако дозирование S1SCB и, следовательно, максимально достижимая продолжительность блокады может быть ограничена системной токсичностью 8 . Снижение этой токсичности путем инкапсуляции является сложной задачей из-за гидрофильности S1SCB; в частности, начальное взрывное высвобождение может ограничивать дозу 9 , 10 . Мы предположили, что ковалентная конъюгация ТТХ на биоразлагаемом и биосовместимом полимерном каркасе через гидролизуемую сложноэфирную связь предотвратит начальное взрывное высвобождение ТТХ, и что медленный гидролиз сложноэфирных связей приведет к замедленному высвобождению ТТХ в его нативной, биологически активной форме. .Поскольку гидрофильность полимеров является основным определяющим фактором скорости гидролиза сложноэфирных связей и, следовательно, высвобождения ТТХ из этих полимеров, скорость высвобождения ТТХ может быть адаптирована путем изменения гидрофильности основной цепи полимера 11 .

    Мы выдвинули гипотезу, что безопасность и эффективность можно повысить за счет минимизации количества высвобождаемого S1SCB — даже до субанестетических уровней — но чтобы дополнительно обеспечить средства повышения эффективности высвобождаемого лекарственного средства до анестезиологического уровня (рис.). Выбранный нами подход был основан на том факте, что только очень небольшая часть (возможно, 0,05%) S1SCBs, нанесенных за пределы нервного пучка, проникает на поверхность аксона 4 . Проникновение S1SCB в нерв может быть усилено химическими усилителями проницаемости (CPE) 12 , 13 , гетерогенной группой (обычно) небольших молекул, которые могут помочь лекарствам преодолевать биологические барьеры 14 .

    Дизайн системы замедленного высвобождения для длительной местной анестезии. a A полимер-ТТХ конъюгат, предназначенный для того, чтобы иметь большое содержание ТТХ с медленным высвобождением, помещают рядом с нервом. Приток ТТХ в нерв усиливается системой доставки, которая действует как химический усилитель проницаемости. Конъюгат полимер-ТТХ, схематически обозначенный здесь как гиперразветвленная структура, имеет гораздо более высокую нагрузку ТТХ, чем те, которые фактически производятся здесь (которые имеют 0,008 или 0,03 молекулы ТТХ на каждой полимерной цепи). b Этерификация по Стеглиху для синтеза TDP и TDP – TTX. Первый этап является необязательным, в зависимости от того, нужно ли включать фрагмент PEG в полимер.

    Здесь мы выбрали TTX в качестве модели S1SCB, поскольку он коммерчески доступен.Для компонента с замедленным высвобождением этой системы мы разработали семейство биоразлагаемых полимеров поли (триолдикарбоновая кислота) -поли (этиленгликоль) (TDP), с которыми TTX будет ковалентно конъюгирован сложноэфирными связями. Мы исследовали высвобождение ТТХ в его естественном состоянии из полимеров в зависимости от состава мономера и гидрофильности полимера, а также изучили анестезирующую эффективность и токсичность в зависимости от этих свойств. Семейство полимеров, разработанных таким образом, могло вызывать блокаду нервов in vivo продолжительностью от нескольких часов до нескольких дней с минимальной местной и системной токсичностью.

    Результаты

    Полимер TDP

    Полимеры TDP были синтезированы из дикарбоновых кислот, триолов и гидроксилполи (этиленгликоля) (PEG). Дикарбоновые кислоты обеспечивают карбоксильные группы для конъюгации ТТХ. Три гидроксильные группы триолов допускают возможность образования гиперразветвленных полимеров. Сверхразветвленный TDP будет оканчиваться несколькими карбоксильными группами, с которыми TTX может быть ковалентно конъюгирован через сложноэфирные связи. Впоследствии ТТХ может высвобождаться за счет гидролиза этих связей (рис.). Гидрофильность полимеров TDP и, следовательно, скорость высвобождения TTX можно регулировать, регулируя состав мономеров.

    Полимеры TDP были образованы этерификацией по Стеглиху при комнатной температуре (рис., Дополнительная таблица 1 ). Гидрофильность полимеров была изменена путем использования гидрофильного (глицерин) или гидрофобного (поликапролактон, PCL) триола, изменения количества атомов углерода (1, 5 или 8) в алифатической цепи дикарбоновой кислоты и изменения молекулярной массы ПЭГ.Номенклатура синтезированных полимеров TDP будет T x D y P z , где x представляет тип триола (g — глицерин, c — триол PCL), y представляет собой количество атомов углерода в алифатической цепи дикарбоновой кислоты, а z представляет собой молекулярную массу PEG (200, 1000, 2000 Да) (таблица). Присутствие глицерина и ПЭГ в полимерах TDP было предназначено для увеличения гидрофильной фракции ( f phil ) полимеров, определяемой как массовое процентное содержание глицерина и PEG в полимере TDP.

    Таблица 1

    Характеристика полимеров TDP

    Глицерин 6 EG 11,234 9 D 8 P 200 0 были твердыми. В спектре ЯМР 1 H полимеров TDP пики метилена дикарбоновой кислоты были обнаружены при 1,30, 1,62 и 2,35 частей на миллион 15 , а метиленовые пики триола были обнаружены между 4,05 и 4,35 частей на миллион (рис.) 15 . В T g D 8 P 200 , T g D 8 P 1000 и T g D 8 P 2000 , дополнительный пик метилена наблюдался между 3,45 и 3,60 м.д., что указывает на сегмент ПЭГ 15 . Молекулярные массы полимеров TDP определяли методом гель-проникающей хроматографии (GPC) (таблица). Молекулярные массы (Mn) полимеров TDP составляли 4000–7000 Да.

    Характеристика полимеров TD / TDP и их конъюгатов TTX. a 1 Спектры Н-ЯМР полимеров TD и TDP. b Влияние гидрофильности полимера ( f phil ) на угол смачивания тонкой полимерной пленки. c Влияние f phil на половину времени потери массы. d Профили разложения полимеров TD и TDP. e FTIR-спектры полимера T g D 8 и конъюгатов T g D 8 –TTX H . Пик группы гуанидиния характерен для ТТХ. f Суммарные ионные хроматограммы стандарта TTX (10 мкг / мл -1 ) в цитратном буфере и среды высвобождения из T g D 8 –TTX конъюгатов. Оба показывают один пик на ~ 5,0 мин. г Масс-спектры подтверждают, что молекулярная масса пика, наблюдаемого при ~ 5,0 мин, соответствует молекулярной массе ТТХ ( m / z 320,1 равно [TTX + H] + ). ч Профили высвобождения 10 мкг свободного TTX или TTX из конъюгатов TD – TTX и TDP – TTX с разными f phil . i Время полупериода высвобождения 10 мкг конъюгированного ТТХ в зависимости от f phil полимера. На панелях ( a — d ), ( h ) и ( i ) открытая рамка обозначает T g D 8 . Данные на графиках представляют собой средние значения ± стандартное отклонение, n = 4

    Гидрофильность полимеров TDP исследовали путем оценки поверхностных и объемных характеристик. Поверхностные характеристики тонких полимерных пленок оценивали с помощью краевой гониометрии.Увеличение у полимеров f phil обратно коррелировало с краевым углом смачивания (рис.): Когда f phil увеличивалось с 0 до 83,5%, краевой угол полимерной тонкой пленки уменьшался с 73,9 ± 1,3. до 31,3 ± 2,1 ° (означает ± SD; n = 4). Увеличение f phil было связано с большей растворимостью в воде (дополнительный рисунок 1 ).

    Скорость разложения полимеров in vitro увеличивалась с увеличением f phil в фосфатно-солевом буфере (PBS, pH 7.4, 37 ° C) (рис.), Предположительно потому, что более высокое значение f phil приведет к более высокому поглощению воды и ускорению гидролиза сложноэфирной связи. Когда f phil был ниже 37,8% (T g D 8 и T g D 8 P 200 ), полимеры следовали почти линейной потере массы (рис.).

    Миотрубки из клеточной линии миобластов C2C12 использовали для оценки потенциальной миотоксичности 16 , а клеточную линию феохромоцитомы PC12 для оценки нейротоксичности 17 .Не наблюдалось снижения жизнеспособности клеток ни в одной группе ни в одной из линий клеток в течение 24-часового периода (дополнительный рисунок 2 ).

    Конъюгаты TDP – TTX

    Чтобы избежать деградации лекарственного средства, для синтеза конъюгатов TDP – TTX была выбрана этерификация по Стеглиху, которая происходит при комнатной температуре (рис.). ДМСО был выбран в качестве растворителя, потому что ТТХ имел самую высокую растворимость в ДМСО (10 мкг мл -1 ) среди испытанных органических растворителей (дополнительная таблица 2 ).В реакционную смесь добавляли 1–4 мг (0,003–0,012 ммоль) ТТХ (см. Методы, таблицу). Только небольшое количество ТТХ было первоначально растворено в ДМСО и участвовало в реакции. Однако по мере протекания реакции этерификации по Стеглиху и конъюгирования растворенного ТТХ с полимером ТДП равновесие раствора заставляло большее количество ТТХ растворяться и участвовать в реакции. Для достижения высокой доли связывания TTX с TDP, TTX реагировал с избытком полимеров TDP (таблица), реакция протекала при комнатной температуре в течение 7 дней, и конъюгаты TDP-TTX собирали в виде желтоватого твердого вещества.Долю связанного ТТХ определяли путем измерения несвязанного ТТХ в реакционной смеси с помощью ELISA. > 99,0% TTX было конъюгировано с полимером TDP (таблица, дополнительная таблица 3 ). Учитывая эффективность ТТХ, количества ТТХ в миллиграммах конъюгировали с количествами в граммах полимеров TDP. Нагрузка ТТХ синтезированных конъюгатов TDP – TTX находилась в диапазоне 0,10–1,60 мкг мг –1 (таблица).

    Таблица 2

    Характеристика конъюгатов TDP – TTX

    Название a f phil (%) b Дикарбоновая кислота CEG Триол Mw c PDI c
    T g D 8 P 2000 83,5 Себациновая кислота 1.691
    T г D 8 P 1000 72,1 Себациновая кислота Глицерин ПЭГ 1000 5578 7672 7672 37,8 Себациновая кислота Глицерин ПЭГ 200 4470 7081 1,584
    T г D D0 Малоновая кислота Глицерин — 4567 11,628 2,546
    T г D 5 28,9 Глутаровая кислота 905 16,595 2,783
    T г D 8 21,0 Себациновая кислота Глицерин — 6011 16,564 2.756
    T c D 8 0 Себациновая кислота Триол PCL d — 6126 17,073 2.787 Полимеры
    1 Конъюгация ТТХ с полимером TDP была подтверждена инфракрасной спектроскопией с преобразованием Фурье (FTIR) (рис.). Например, после конъюгации с TTX, T g D 8 показал новые пики при 1574 и 1616 см -1 , которые можно отнести к гуанидиевой группе TTX 18 .

    Не было очевидного увеличения молекулярной массы полимеров TDP после конъюгации TTX (дополнительная таблица 4 ), потому что загрузка TTX была очень низкой: 0,40 мкг TTX на мг полимера в T г D 8 –TTX и 1,60 мкг ТТХ на мг полимера в T г D 8 –TTX H , что соответствует 0,008 и 0,03 молекул ТТХ на полимерную цепь для T г D 8 –TTX и T г D 8 –TTX H соответственно.

    Кинетику высвобождения изучали in vitro в PBS (pH 7,4, 37 ° C). Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) выявила пик при ~ 5,0 мин в образцах высвобождения и стандарте ТТХ (рис.). Масс-спектры подтвердили, что молекулярная масса молекулы в это время удерживания соответствует молекулярной массе ТТХ ( m / z 320,1 равно [ТТХ + H] + ) (рис.), Что указывает на то, что ТТХ высвобождался в своем родная форма. Все конъюгаты TDP – TTX значительно увеличивали продолжительность высвобождения TTX по сравнению со свободным TTX (рис.). Высвобождение TTX следовало почти линейному профилю при более низких значениях f phil (T g D 8 –TTX и T g D 8 P 200 –TTX), что указывает на возможность высвобождения ТТХ с постоянной скоростью для длительной местной анестезии с минимальной системной токсичностью. Поскольку f phil уменьшился с 83,5 до 0%, время полупериода высвобождения ТТХ увеличилось с 25 ± 5 часов до 723 ± 75 часов.

    Чтобы продемонстрировать, что высвобождение ТТХ зависит от расщепления сложноэфирных связей, ТТХ конъюгировали с Т g D 8 через уретановые связи (дополнительные фиг. 3 и 4a ), которые гидролизуются гораздо медленнее, чем сложноэфирные связи 19 , 20 . In vitro, после 28 дней инкубации в PBS (pH 7,4, 37 ° C), ТТХ, определяемый методом ELISA, не высвобождается из 25 мг Т г D 8 –TTX уретановый конъюгат, содержащий 10 мкг ТТХ (дополнительный рис. . 4b ).

    Используемый здесь синтетический подход может быть расширен для ковалентного конъюгирования других лекарственных средств, содержащих гидроксильные или карбоксильные группы, с полимерами TDP через гидролизуемые сложноэфирные связи.В качестве примера мы конъюгировали дексаметазон с полимерами TD и TDP (дополнительные фигуры 5 и 6 , дополнительная таблица 5 ).

    Изготовление состава для инъекций с помощью шприца

    Инъекции — важнейшее свойство местных анестетиков. T г D 8 P 2000 , с высоким f phil 83,5% может образовывать гомогенный раствор для инъекций в PBS, но другие полимеры TDP с низким f phil не могут быть однородно суспендированный в PBS (дополнительный рис. 1 ). Чтобы сделать конъюгаты TDP-TTX инъекционными, их растворяли в DCM и PEG (200 Да, PEG200) с последующим выпариванием растворителя (дополнительный рисунок 7 ). Полученная композиция обозначается TDP-TTX / PEG 200.

    Вязкость является важным фактором для возможности шприцевания и инъекции. Комплексные модули вязкости, динамического накопления (G ‘) и потерь (G ″) составов TDP-TTX / PEG200 были охарактеризованы в диапазоне угловых частот (дополнительный рис. 8 ). При 50 мг / мл -1 все составы TDP-TTX / PEG200 имели вязкость менее 10 Па · с в диапазоне испытанных угловых частот (дополнительный рисунок 8a ). G » был выше, чем G ‘, что указывает на то, что вязкая составляющая комплексного модуля преобладала в поведении материалов, т.е. они вели себя как жидкости (дополнительный рис. 8b ). Жидкостное поведение и низкая вязкость составов TDP-TTX / PEG200 указывают на то, что они вводятся шприцем.Наиболее вязкий раствор, использованный в этой работе, T г D 8 –TTX / PEG200 (50 мг / мл -1 ), был инъекционным, как показано в Дополнительном фильме 1 .

    Блокада седалищного нерва у крыс in vivo

    Крысам (по 4 в каждой группе) инъецировали в левый седалищный нерв 0,5 мл определенных носителей, содержащих свободный ТТХ или конъюгаты ТДП-ТТХ. Затем они прошли нейроповеденческое тестирование, чтобы определить продолжительность функционального дефицита (т. Е. Блокады сенсорных и двигательных нервов) в обеих задних лапах.Продолжительность дефицита на стороне инъекции (слева) отражала продолжительность блокады нерва. Дефицит на неинъекционной (правой, контралатеральной) стороне отражал системное распределение ТТХ.

    Группы крыс, получавших инъекции свободного ТТХ в седалищный нерв, показали дозозависимое увеличение частоты успешных блокад нервов (рис. 9 ). Низкие дозы ТТХ в PBS (1 или 2 мкг; 6 или 12 мкМ соответственно) не вызывали детектируемой нервной блокады или токсичности.Блокировка 3 мкг (18 мкМ) свободного ТТХ в PBS была успешной у 25% животных и вызвала среднюю продолжительность блокады сенсорного нерва 0,25 ± 0,5 часа; блокировка 4 мкг (24 мкМ) свободного ТТХ в PBS была успешной у 100% животных и вызвала среднюю продолжительность блокады сенсорного нерва 1,9 ± 1,0 ч; это сравнимо с блокадой 0,5% бупивакаина — широко используемого анестетика 4 . Однако блоки с 4 мкг ТТХ в PBS вызвали заметную системную токсичность, о чем свидетельствует сенсорный дефицит в неинъекционной (контралатеральной) ноге (рис., Дополнительный рисунок 10 ). Инъекция 5 мкг (30 мкМ) свободного ТТХ в PBS вызывала контралатеральный дефицит у всех животных и всегда приводила к летальному исходу (рис.). Не было статистически значимой разницы между продолжительностью блокады сенсорных и двигательных нервов при любой дозе свободного ТТХ в PBS ( p = 1.000, однофакторный дисперсионный анализ) (дополнительный рисунок 9a ).

    Блокада периферического нерва свободным ТТХ и Т г D 8 –ТТХ конъюгат. Влияние дозы ТТХ на — частоту успешных блокад , продолжительность блокады сенсорных нервов b — , частоту нервных блокад — в неинъекционной (контралатеральной) конечности и d — смертность животных.На всех панелях открытая рамка обозначает T g D 8 –TTX, серая рамка обозначает T g D 8 –TTX H . Данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение, n = 4

    Часть нашего дизайна включала совместную доставку полимеров с CPE. 32 мМ октилсульфата натрия (SOS) вводили 3 мкг (18 мкМ) свободного ТТХ в 0,5 мл PBS в седалищный нерв; было показано, что концентрация SOS продлевает нервную блокаду от TTX 12 , 13 .SOS увеличил частоту успешного блока до 100% и увеличил продолжительность блока до 6,3 ± 0,9 ч ( p 0,001 по сравнению с PBS, односторонним дисперсионным анализом) (дополнительная таблица 6 ). Поскольку полимеры TDP должны были быть доставлены в PEG200, мы изучили влияние PEG200 на блокаду нервов от TTX. 3 мкг (18 мкМ) свободного ТТХ в 0,5 мл ПЭГ200 приводили к 100% блокаде с продолжительностью 5,3 ± 0,3 ч (рис.). Улучшение частоты успеха и продолжительности блокады нервов с помощью ПЭГ200 было сопоставимо с эффектами 32 мМ SOS ( p = 0.071, односторонний дисперсионный анализ). Аналогичное удлинение длительности нервной блокады под действием ПЭГ200 наблюдалось при использовании 1 и 2 мкг ТТХ (фиг.). Не было статистически значимой разницы между продолжительностью блокады сенсорных и двигательных нервов при любой дозе свободного ТТХ в PEG200 ( p = 1.000, однофакторный дисперсионный анализ ANOVA) (дополнительный рисунок 9a ).

    Тот факт, что низкие дозы TTX в PEG200 имели более высокий процент успешных блокировок, чем свободный TTX в PBS, соответствовал CPE-подобному эффекту. (В противном случае обычно можно было бы ожидать, что у бесплатного лекарства будет более высокая частота успешных блокировок, потому что начальная свободная фракция лекарства выше.) Чтобы исследовать, действует ли PEG200 как CPE, флуоресцеин натрия (возбуждение 460 нм, испускание 515 нм) был использован в качестве заместителя для TTX, поскольку оба являются очень гидрофильными. Животным вводили в седалищный нерв крысы 0,25 мг флюоресцеина натрия в 0,5 мл PEG200 или PBS. Через один или четыре часа животных умерщвляли и собирали седалищный нерв и окружающую ткань. Были изготовлены замороженные срезы нерва, ядра окрашены и получены флуоресцентные изображения (рис.). Не наблюдали флуоресценции в нерве у животных, которым вводили натрий-флуоресцеин в PBS в любой момент времени.У животных, которым вводили флуоресцеин натрия в ПЭГ200, флуоресценция наблюдалась по всему нерву через 1 час после инъекции, но не наблюдалась через 4 часа после инъекции. Эти результаты продемонстрировали, что PEG200 может действовать как CPE, помогая молекулам проникать в нерв. Поскольку PEG200 действовал как CPE, и он был необходим для солюбилизации полимеров, чтобы сделать их пригодными для инъекций, его использовали в качестве CPE в последующих экспериментах.

    Репрезентативные флуоресцентные изображения срезов седалищного нерва и окружающих тканей.Ткани собирали через 1 и 4 часа после инъекции 0,25 мг флуоресцеина натрия в 0,5 мл PEG200 или PBS. Стрелки указывают на флуоресцеин натрия (зеленый). Синий: ядра клеток, окрашенные 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI). Данные являются репрезентативными для 4 животных в каждой группе. Масштабные линейки, 100 мкм

    Чтобы повысить безопасность и продлить высвобождение ТТХ из TDP – TTX при заданной нагрузке, мы выбрали T г D 8 –TTX / PEG200 для тестирования in vivo. Животным вводили 2 инъекции в левый седалищный нерв.5–25 мг T г D 8 –TTX, содержащий 1–10 мкг TTX, или, если требовались более высокие дозы, с 12,5–50 мг T г D 8 –TTX H содержащие 20–80 мкг ТТХ (дополнительная таблица 7 ) в 0,5 мл ПЭГ200. T г D 8 –TTX H использовался для того, чтобы можно было увеличить дозу TTX без чрезмерного увеличения массы вводимого полимера. Кинетика высвобождения ТТХ из T г D 8 –TTX и T г D 8 –TTX H была аналогичной ( p > 0.05, односторонний дисперсионный анализ) (дополнительный рис. 11 ), возможно, потому, что загрузка ТТХ (1,6% от общей массы) все еще была очень низкой.

    Эффективность, безопасность и продолжительность нервной блокады были значительно увеличены за счет ковалентного включения ТТХ в T g D 8 / PEG200 (рис.). Успех и продолжительность сенсорного блока увеличивались с увеличением доз конъюгированного ТТХ. В частности, T g D 8 –TTX / PEG200 усиливал эффективность малых доз TTX, например, позволяя 2 мкг (12 мкМ) конъюгированного TTX в T g D 8 –TTX / PEG200 к произвести блок со 100% успехом и средней продолжительностью блока 5.6 ± 0,8 ч ( p «0,001 по сравнению с длительностью блока из 2 мкг свободного ТТХ, односторонний дисперсионный анализ). Кроме того, T g D 8 –TTX / PEG200 значительно повышал безопасность TTX, о чем свидетельствует отсутствие токсичности после инъекции высоких доз TTX. Например, блокада сенсорного нерва 80 мкг (480 мкМ) ТТХ, конъюгированного с Т г D 8 –TTX H / PEG200, длилась 71,5 ± 6,9 ч (приблизительно 3 дня; рис.), И ни одно животное не погибло или имел контралатеральный дефицит (рис.). Эта доза ТТХ была в 16 раз выше, чем доза свободного ТТХ, которая всегда была смертельной. Более того, в этой модели на животных невозможно из-за ограниченной токсичности достичь таких длинных нервных блокад с помощью ТТХ в отсутствие длительного высвобождения 4 , CPE 12 , 13 и / или препараты, усиливающие действие S1SCB 9 , 21 . Моторный блок не был статистически значимо дольше, чем сенсорный, при любой дозе конъюгированного ТТХ (дополнительный рис. 9б ).

    Неконъюгированная смесь Т г D 8 со свободным ТТХ в ПЭГ200 обеспечивала такой же нервный блок и токсичность, как и свободный ТТХ в ПЭГ200 (дополнительная таблица 6 ), что указывает на ковалентное связывание ТТХ с Т г D 8 оказал заметное влияние на нервную блокаду и безопасность (дополнительное примечание 1 ), и что T g D 8 не имел эффекта, подобного CPE (дополнительное примечание 2 ). Отдельные эксперименты показали, что блокада нервов зависела как от длительного высвобождения ТТХ из T g D 8 –TTX H , так и от CPE-эффекта PEG200 (дополнительное примечание 3 ).

    Ключевой гипотезой, лежащей в основе этой работы, было то, что ТТХ, связанный с полимером, будет неактивным. Чтобы проверить эту гипотезу, в седалищный нерв вводили 10 мкг ТТХ, конъюгированного с T g D 8 через уретановые связи. Ни у одного из испытуемых животных не было блокады сенсорных или двигательных нервов (дополнительный фиг. 4c ). Эти результаты показали, что ТТХ не обладает биологической активностью при ковалентном конъюгировании с основной цепью полимера.

    Чтобы учесть возможность того, что усиленная блокада нерва с T g D 8 –TTX / PEG200 была вызвана транслокацией T g D 8 –TTX в седалищный нерв, мы обозначили T g D 8 с изотиоцианатом флуоресцеина (FITC, возбуждение 488 нм и испускание 519 нм) и животным инъецировали меченный FITC T g D 8 in 0.5 мл ПЭГ200. FITC был ковалентно конъюгирован (см. Методы) с T g D 8 , так что краситель не мог диффундировать независимо от полимера: меченый полимер обозначается FITC-T g D 8 . В заранее определенные моменты времени после инъекции животных умерщвляли, а нервы и окружающие ткани обрабатывали для гистологии. Флуоресцентная конфокальная микроскопия показала FITC в соединительной ткани между мышцей и нервом через 24, 48 и 168 часов после инъекции, но не внутри самого седалищного нерва (рис.).

    Удержание в ткани флуоресцентно меченного Т г D 8 , введенного в седалищный нерв. a Типичные флуоресцентные конфокальные микрофотографии через 24, 48 и 168 часов после инъекции в седалищный нерв 25 мг FITC – T г D 8 в 0,5 мл PEG200. Зеленый: FITC – T г D 8 ; синий: ядра клеток (окрашены DAPI). Шкала 200 мкм. b Визуализация всего тела флуоресцентной инъекции 25 мг CY5.5 – T г D 8 в 0.5 мл ПЭГ200. Интенсивность флуоресценции представлена ​​как эффективность излучения. c Количественная оценка данных на панели ( b ). Данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение ( n = 4). d Репрезентативные фотографии рассечения места инъекции через 24 часа после инъекции. Данные являются репрезентативными для 4 животных в каждой группе

    Чтобы оценить динамику локального удержания TDP в ткани, мы вводили животным T g D 8 / PEG200, у которого Cy5.5 (возбуждение 684 нм, испускание 710 нм) был ковалентно конъюгирован; полимер обозначается Cy5.5 – T г D 8 . Флуоресцентные изображения были получены с помощью системы визуализации in vivo (IVIS). Флуоресцентный сигнал был замечен в седалищном нерве у всех животных, а в других местах флуоресценции не было (рис.). Сигнал флуоресценции уменьшился в течение 4 недель, что указывает на постепенную деградацию T g D 8 (фиг.). При аутопсии через 24 часа после инъекции видимые отложения были обнаружены на седалищном нерве; они были флуоресцентными, подтверждая, что они содержали T g D 8 (рис.).

    Поскольку полимеры TDP f phil определяли скорость высвобождения ТТХ из конъюгатов TDP-TTX in vitro, мы предположили, что он будет определять токсичность и эффективность составов in vivo. Чтобы проверить нашу гипотезу, животным вводили в левый седалищный нерв конъюгаты TD-TTX / PEG200 или TDP-TTX / PEG200 с различными f phil , содержащими 1 (6 мкМ) или 10 мкг (60 мкМ) ТТХ ( Дополнительная таблица 7 ). У животных, которым вводили 1 мкг конъюгированного ТТХ, частота успешных блоков и продолжительность блока увеличивались с увеличением f phil (рис.). У животных, которым вводили 10 мкг конъюгированного ТТХ, токсичность (сенсорный дефицит в неинъектированной [контралатеральной] ноге и смертность) увеличивалась, в то время как продолжительность блока уменьшалась с увеличением f phil (рис.). Эти результаты продемонстрировали, что полимеры TDP f phil определяют эффективность и токсичность составов. При низкой дозе ТТХ (1 мкг конъюгированного с полимерами TDP) требовалось относительно быстрое высвобождение ТТХ для достижения и поддержания тканевого уровня анестетика, необходимого для обеспечения нервной блокады.Этого легче достичь с помощью молекул с высоким значением f phil , которые имеют более быстрое высвобождение лекарственного средства. Однако при высокой дозе конъюгированного ТТХ (10 мкг), когда концентрация высвобожденного ТТХ легко достигается, что необходимо для эффективной нервной блокады, более быстрое высвобождение ТТХ может вызвать системную токсичность и более короткую продолжительность эффекта. Следовательно, при более высоких дозах ТТХ более низкие f phil позволили бы более медленную скорость высвобождения ТТХ, чтобы минимизировать системную токсичность и продлить продолжительность блока.

    Влияние f phil (%) на эффективность и токсичность блокады седалищного нерва. a Частота успешных блокад, b продолжительность блокады сенсорных нервов, c частота нервных блокад в неинъекционной (контралатеральной) конечности и d смертность животных. Животным вводили 1 или 10 мкг конъюгированного ТТХ в TD-TTX / PEG200 или TDP-TTX / PEG200. Данные представляют собой средние значения ± стандартное отклонение, n = 4

    Поскольку непреднамеренная внутрисосудистая инъекция может вызвать системную токсичность анестетика, была оценена безопасность внутривенного полимера — ТТХ / ПЭГ200.T г D 8 -TTX H / раствор PEG200 (50 мг мл -1 T г D 8 -TTX H ) разбавляли 1: 1 в PBS, содержащем 10 мас.% BSA , до конечной концентрации 25 мг / мл -1 T г D 8 –TTX H . 0,5 мл состава (12,5 мг T г D 8 –TTX H ), содержащего 20 мкг (120 мкМ) ТТХ, вводили внутривенно. Не было выявлено нейроповеденческих нарушений в области седалищного нерва (что могло бы отражать системную токсичность) или других признаков токсичности, включая гибель животных (дополнительная таблица 9 ).Примечательно, что 20 мкг ТТХ внутривенно достаточно, чтобы убить много крыс, поскольку ЛД 50 внутривенного ТТХ составляет 2–10 мкг кг -1 у млекопитающих 22 , т.е. 0,7–3,5 мкг на 350 мкг. г крысы.

    Тканевая реакция

    Животных, которым вводили свободный TTX и конъюгаты TDP-TTX с различными f phil (таблица), умерщвляли через 4 и 14 дней после инъекции седалищного нерва. Типичная реакция ткани на конъюгаты T g D 8 –TTX H показана на рис.. При диссекции не было явных остаточных материалов, хотя они были видны при конфокальной микроскопии и IVIS (рис.). Ткани не выглядели отечными или обесцвеченными и не имели других грубых признаков повреждения тканей (рис.). Седалищные нервы и окружающие ткани были вырезаны и собраны для гистологической оценки. Мышечную ткань обрабатывали для окрашивания гематоксилином-эозином (H&E). CPE, включая SOS, могут вызывать миотоксичность и воспаление в зависимости от концентрации 10 , 11 .Микроскопическое исследование не выявило значительной миотоксичности или воспаления у животных ни в одной группе через 4 или 14 дней после инъекции (соответствующие баллы 12 в таблице, изображения на фиг.). Статистически значимой разницы между оценками в любой группе, получавшей TDP – TTX и только TTX, не было.

    Таблица 3

    Миотоксичность и воспаление

    Конъюгат Исходная дикарбоновая кислота (ммоль) Исходный триол (ммоль) Исходный ПЭГ (ммоль) Исходный TTX (ммоль) загрузка a (мкг мг -1 ) Доля связанного TTX b (мас.%)
    T г D 8 P 2000 –TTX 1.25 2,5 0,003 0,16 99,2
    T г D 8 P 1000 –TTX 5 1,25 2,5 0,003 0,25
    T г D 8 P 200 –TTX 10 2,5 5 0,003 0,31 99,5
    T г D 10 5.8 — 0,003 0,40 99,4
    T g D 8 –TTX H c 10 5,8 — 99,4
    T г D 5 –TTX 10 5,8 — 0,003 0,54 99,5
    T г D T 1 5.8 — 0,003 0,64 99,4
    T c D 8 –TTX 10 5,8 — 0,003 0,27
    905 0–1,0)
    Состав Доза полимера (мг) Доза ТТХ (мкг) Оценка миотоксичности (диапазон)
    День 4     		Оценка миотоксичности
    День (диапазон) 14     		Оценка воспаления (диапазон)
    День 4     		Оценка воспаления (диапазон)
    День 14
    Свободный TTX a — 3.0 0 (0–1.0) 0 (0–1.0) 0 (0–1.0) 0 (0–1.0)
    PEG200 562 b 3.0 0 (0–1.0) 0 (0–1.0) 0 (0–1.0) 1.0 (0–1.0)
    p Значение 1.000 1.000 1.000 0,456
    T г D 8 –TTX H 50 c 80.0 1,0 (0–1,0) 1,0 (0–1,0) 1,0 (0–1,0) 1,0 (0–1,0)
    p Значение 0,456 0,456 0,456 0,456
    T г D 1 –TTX 12,5 c 31,9 1,0 (0–1,0) 1,0 (0–1,0) 1,0 (0–1,0)
    p Значение 0.456 1.000 1.000 0,456
    T g D 8 P 200 –TTX 32,5 c 10,0 0200 (0–1,0 0) 90 –1.0) 1.0 (0–1.0) 0 (0–1.0)
    p Значение 1.000 0,456 0,456 1.000
    г D 8 P 1000 –TTX 25 c 6.9 0 (0-0) 0,5 (0–1,0) 0,5 (0–1,0) 0,5 (0–1,0)
    p Значение 0,414 0,738 0,738 0,738
    T г D 8 P 2000 –TTX 25 c 3,5 0,5 (0–1,0) 0 (0–0) 0,5 (0–1,0) 0,5 (0–1,0)
    p Значение 0.738 0,182 0,738 0,738

    Реакция тканей на материалы. a , c Репрезентативные фотографии места инъекции после вскрытия через 4 и 14 дней после инъекции 25 мг T g D 8 –TTX H в 0,5 мл PEG200. b , d Типичные окрашенные гематоксилином-эозином срезы мышц и прилегающей рыхлой соединительной ткани через 4 и 14 дней после инъекции 25 мг Т г D 8 –TTX H в 0.5 мл ПЭГ200. Шкала 100 мкм. e — j Окрашенные толуидиновым синим срезы нерва после инъекции составленного Т g D 8 –TTX H . Масштабные линейки 50 мкм. e , f Минимальное периферическое повреждение (область, обведенная белыми пунктирными линиями) наблюдается в 1 из 3 нервов через 4 дня после инъекции 25 мг T г D 8 –TTX H в 0,5 мл PEG200 . г — j Типичные окрашенные толуидиновым синим срезы нерва через 4 дня ( г , h ) и 14 дней ( i , j ) после инъекции 25 мг T г D 8 –TTX H дюйм 0.Смесь 5 мл PEG200 и PPG4000 (5/95, об. / Об.) Без повреждений. Данные являются репрезентативными для 3 животных в каждой группе.

    Поскольку окрашенные H и E относительно нечувствительны для идентификации повреждения нерва, мы получили окрашенные толуидиновым синим Epon срезы седалищного нерва у животных, которым вводили TDP-TTX. Минимальное периферическое повреждение (снижение плотности аксонов) с вовлечением <5% нерва было обнаружено через 4 дня у 1 из 3 крыс, которым вводили T g D 8 –TTX H / PEG200 (рис.).

    Это минимальное повреждение нерва было связано с высокой концентрацией PEG200 (5,62 M, т.е. чистый), использованного для диспергирования T г D 8 –TTX H , о чем свидетельствует сопоставимое минимальное повреждение нерва, присутствующее на 4 дней 3 из 3 крыс, которым вводили 0,5 мл чистого ПЭГ200 (дополнительный рис. 12a, b ). Мы устранили минимальное повреждение нерва, изменив состав инъекционного раствора. Мы выбрали соединения по следующим свойствам: (а) способность диспергировать конъюгат ТТХ-полимер, (б) активность как CPE, (в) текучесть при комнатной температуре, (г) отсутствие токсичности.Было обнаружено, что поли (пропиленгликоль) (4000 Да, PPG4000) не вызывает повреждения нервов, что согласуется с сообщениями о безопасности высокомолекулярного полипропиленгликоля (2000 Да или выше) 23 . Гистология нервов была нормальной у всех крыс, которым вводили 0,5 мл чистого PPG4000 через 4 дня (дополнительный рисунок 12c ). Однако инъекция T g D 8 –TTX H в PPG4000, содержащем до 80 мкг (480 мкМ) TTX, не приводила к нервной блокаде у крыс из-за слабого CPE-эффекта PPG4000: конфокальная визуализация показали, что PPG4000 не способствует проникновению флюоресцеина натрия в седалищные нервы (дополнительный рис. 13 ). Следовательно, мы объединили PPG4000 (95 об.%), Действующий как инертный носитель, с 5 об.% PEG200 (281 мМ) в качестве активного CPE. Инъекция T г D 8 –TTX H , содержащая 40 мкг ТТХ в 5% PEG200 / 95% PPG4000, индуцированная блокада нервов продолжительностью 64,8 ± 16,6 ч, аналогичная блокаде T г D 8 –TTX H / PEG200 ( p = 0,88, однофакторный дисперсионный анализ). Гистология нервов подтвердила, что этот состав не вызывал повреждения нервов через 4 и 14 дней (рис.).

    Обсуждение

    Мы предположили, что длительная местная анестезия может быть достигнута без значительной системной или местной токсичности путем комбинирования лекарственного средства, выделяющего систему с замедленным высвобождением на субтерапевтическом уровне, с CPE для усиления эффекта выпущенного анестетика. Для замедленного высвобождения мы разработали конъюгаты биоразлагаемый полимер-ТТХ; для CPE использовали смесь, содержащую 5 об.% PEG200 и 95 об.% PPG4000. Эта комбинация материалов с особыми свойствами смогла обеспечить длительную местную анестезию без системной токсичности.

    Испытания на животных подтвердили, что TDP – TTX / PEG200 может значительно расширить терапевтический индекс TTX, то есть снизить токсичность при одновременном повышении эффективности. Все составы TDP-TTX / PEG200 значительно повышали безопасность TTX (рис., Дополнительный рис. 10 ). В частности, T g D 8 -TTX H / PEG200 позволял инъекцию до 80 мкг TTX без системной токсичности; TDP-TTX / PEG200 был способен повысить эффективность TTX, то есть увеличить продолжительность нервной блокады, которая могла быть достигнута, и повысить эффективность малых доз TTX (например,грамм. позволяя 1 мкг ТТХ вызвать блокаду нервов).

    Гидролизуемые ковалентные связи были использованы для создания конъюгатов лекарств для контролируемого высвобождения лекарств благодаря их превосходному контролю над скоростью высвобождения и предотвращению взрывного высвобождения 19 , 20 . Однако для конкретного лекарства требуется точный контроль скорости гидролиза ковалентных связей, чтобы поддерживать уровень лекарства в терапевтическом окне. ТТХ имеет очень узкое терапевтическое окно 24 (рис.), что требует контроля скорости высвобождения ТТХ, чтобы избежать системной токсичности при продлении блокады. Для достижения этой цели были разработаны полимеры TDP с регулируемой гидрофильностью основной цепи и, следовательно, регулируемой скоростью гидролиза сложноэфирной связи. Синтез библиотеки конъюгатов TDP-TTX с различной скоростью высвобождения TTX позволил идентифицировать конъюгаты TDP-TTX с желаемыми характеристиками.

    Учитывая их регулируемую гидрофильность и их множественные гидроксильные и карбоксильные концевые группы, полимеры TDP могут стать платформой для обратимого связывания широкого спектра лекарств с гидроксильными или карбоксильными группами (такими как дексаметазон, см. Выше).Для сильнодействующих лекарств, таких как ТТХ, полимеры TDP с более низким значением f phil могут быть предпочтительны для достижения медленного высвобождения лекарственного средства. Для лекарств с более низкой эффективностью могут потребоваться полимеры TDP с более высоким значением f phil для достижения более высокой скорости высвобождения лекарственного средства.

    Конъюгаты TDP-TTX были биоразлагаемыми, и тканевая реакция была доброкачественной. Все мономеры, используемые для синтеза конъюгатов TDP-TTX, включая глицерин 25 , поликапролактон 26 , дикарбоновую кислоту 25 и PEG 27 , обладают отличной биосовместимостью.Конъюгаты TDP-TTX должны постепенно разлагаться до промежуточных продуктов, например, TTX в его нативной форме или связанных с небольшим сегментом цепей TDP, которые в конечном итоге будут гидролизоваться.

    ПЭГ200, растворитель с низкой токсичностью, широко используется в различных фармацевтических составах в качестве среды для гидрофобных фармацевтических препаратов. 19 . Мы обнаружили, что PEG200 был одновременно средством передвижения и CPE. ПЭГ200 усиливал поток ТТХ в нерв и увеличивал эффективность ТТХ, вероятно, из-за его амфифильной природы 28 , 29 .Чистый PEG200 вызывал минимальное повреждение нервов. Однако минимального повреждения нерва удалось полностью избежать за счет использования низкой, но эффективной концентрации PEG200 в сочетании с PPG4000.

    Конъюгат TDP – TTX будет легко масштабировать, взвешивать и хранить для будущих клинических применений. Миллиграммы ТТХ конъюгировали с граммами Т г D 8 –TTX H (4 мг ТТХ в 2500 мг Т г D 8 –TTX H, таблица ). Такая партия позволила бы доставить 100 доз 25 мг Т г D 8 -TTX H , содержащих 40 мкг ТТХ, что привело к длительности блокады нерва до 63.2 ± 9,8 ч у крысы (рис.). Реакция может быть дополнительно увеличена без уменьшения доли связывания ТТХ с полимером Т г D 8 из-за избытка Т г D 8 в реакционной смеси. Синтезированный конъюгат T g D 8 -TTX является твердым, и его можно легко хранить при комнатной температуре в сухой среде.

    Составы, разработанные здесь, вероятно, будут даже более безопасными и обеспечат более длинные блоки у более крупных животных, таких как человек.Обоснование этой гипотезы состоит в том, что токсичность системно распределенного препарата (в данном случае ТТХ) довольно хорошо соотносится с массой животного, в то время как местный анестезирующий эффект имеет гораздо более слабую связь с размером тела 4 . Следовательно, хотя блокада седалищного нерва у человека весом 70 кг может потребовать большего количества активного материала, чем у крысы весом 350 г, это увеличение, вероятно, будет намного меньше, чем 200-кратное снижение системной токсичности у человека. В дополнение к этому потенциальному увеличению терапевтического индекса вполне вероятно, что можно будет доставить гораздо больше материала более крупным животным.Так, например, блокада седалищного нерва крысы полимерными микросферами бупивакаин-дексаметазон длилась несколько дней 30 и длилась 10 дней в межреберных блоках овец 31 .

    Состав T g D 8 –TTX / PEG200 обеспечивает большую гибкость дозирования. Загрузка ТТХ T г D 8 -TTX H (1,60 мкг мг -1 , 0,03 молекулы ТТХ на каждую полимерную цепь) все еще очень низка. Если бы потребовались конъюгаты T g D 8 -TTX с более высокой нагрузкой TTX, этого можно было бы легко достичь, просто вводя в реакцию большие количества TTX, поскольку полимерный компонент присутствует в избытке.Также должна быть возможность заменить ТТХ другими S1SCB, такими как сакситоксины 24 , поскольку они также имеют гидроксильные группы, доступные для реакции с полимерами. Продолжительность нервной блокады даже дольше, чем указанная в этой работе, может быть достигнута с использованием таких подходов, как усиление локальной ретенции (Дополнительное обсуждение 1 ) и совместное введение / совместная доставка с другими лекарствами (Дополнительное обсуждение 2 ).

    В заключение, была разработана система местной анестезии, которая обеспечивала блокаду нервов от нескольких часов до нескольких дней с минимальной местной или системной токсичностью.Конструкция включает два ключевых компонента: рационально разработанный конъюгат TDP – TTX, который обеспечивает точный контроль высвобождения TTX с безопасной скоростью, и CPE, увеличивающий поток TTX в нерв.

    Методы

    Реагенты

    Себациновая кислота (99,0%), малоновая кислота (99,0%), глутаровая кислота (99,0%), триол поликапролактона (триол PCL, 300 Да), глицерин (99,0%), ПЭГ (200, 1000). , 2000 Да), N, N’-диизопропилкарбодиимид (DIC, 99,0%), 4-диметиламинопиридин (DMAP, 99,0%), безводный N, N-диметилформамид (DMF, 99.8%), безводный диметилсульфоксид (ДМСО, 99,9%), безводный дихлорметан (DCM, 99,8%), дейтерохлороформ (99,96 ат.% D), октилсульфат натрия (SOS, 95,0%), дексаметазон (98,0%), изотиоцианат изомер флуоресцеина I (FITC, 90,0%), натриевая соль флуоресцеина, гексаметилендиизоцианат (HMDI, 99,0%), дилаурат дибутилолова (Sn (II), 95,0%) и PBS (pH 7,4) были приобретены у Sigma-Aldrich (Сент-Луис, США). Миссури, США). Карбоновая кислота Cyanine5.5 (Cy5.5, 95,0%) была приобретена у Lumiprobe Corporation (Халландейл-Бич, Флорида, США).Тетродотоксин (ТТХ) был получен от Abcam (Кембридж, Массачусетс, США). Наборы TTX ELISA были приобретены у Reagen LLC (Мурстаун, Нью-Джерси, США). Минимальная необходимая среда Дульбекко (DMEM), фетальная бычья сыворотка (FBS) и пенициллин-стрептомицин были приобретены в Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA, USA).

    Синтез полимеров TDP и TD

    Полимеры TDP были синтезированы этерификацией по Стеглиху с использованием DIC в качестве реагента сочетания и DMAP в качестве катализатора. Вкратце, сухой ПЭГ и себациновая кислота (количества корма см. В таблице и дополнительной таблице 1 ) добавляли в сухую круглодонную колбу.После добавления 8 мл безводного ДМФ, 8 мл безводного ДМСО и 4 мл безводного ДХМ и обработки смеси ультразвуком в течение нескольких минут добавляли DIC (4,336 мл, 28 ммоль) и DMAP (0,489 г, 4 ммоль). Смесь выдерживали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 24 часов. Добавляли глицерин (количества корма см. В таблице и дополнительной таблице 1 ) и смесь оставляли при комнатной температуре на 24 часа. После реакции DCM из реакционной смеси удаляли с помощью роторного испарителя (Buchi R-210, Marshall Scientific, Hampton, NH, USA).Остаток осаждали 30 мл деионизированной воды и дополнительно промывали 2 раза 30 мл деионизированной воды, содержащей 10 об.% Этанола. Твердый остаток сушили лиофилизацией (Virtis sentry 2.0, SP Scientific, Гардинер, Нью-Йорк, США) в течение ночи. Затем высушенный полимер повторно растворяли в DCM и очищали осаждением 30 мл диэтилового эфира. Затем удаляли супернатант и сушили под вакуумом в течение ночи. Полимеры TDP и TD в виде слегка желтоватого твердого вещества были получены с выходами 88–96%.Высушенные полимеры TDP и TD хранили в эксикаторе для дальнейшего использования.

    Синтез конъюгатов TDP-лекарство и TD-лекарство

    Конъюгаты TDP-лекарство были синтезированы этерификацией по Стеглиху. Вкратце, сухой ПЭГ и себациновая кислота (количества корма см. В таблице и дополнительной таблице 1 ) добавляли в круглодонную колбу. После добавления 8 мл безводного ДМФ, 8 мл безводного ДМСО и 4 мл безводного ДХМ и обработки смеси ультразвуком в течение нескольких минут, DIC (4,336 мл, 28 ммоль) и DMAP (0.489 г, 4 ммоль). Смесь выдерживали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 24 часов. Добавляли глицерин (количества корма см. В таблице и дополнительной таблице 1 ) и смесь оставляли при комнатной температуре на 24 часа. Безводная суспензия ТТХ в ДМСО (8 мл) (количество корма см. В таблице и дополнительной таблице 1 ) и / или дексаметазон (количество корма см. В таблице и дополнительной таблице 5 ) и / или FITC (1 мг, 0,003 ммоль) и / или Cy5.5 (1,6 мг, 0,003 ммоль), и смесь оставляли при комнатной температуре на 7 дней.После реакции DCM из реакционной смеси удаляли на роторном испарителе. Остаток осаждали 30 мл деионизированной воды и дополнительно промывали 2 раза 30 мл деионизированной воды, содержащей 10 об.% Этанола. Твердый остаток сушили лиофилизацией в течение ночи. Затем высушенный полимер повторно растворяли в DCM и очищали осаждением 30 мл диэтилового эфира. Затем удаляли супернатант и сушили под вакуумом в течение ночи. Конъюгаты TDP – лекарственное средство, слегка желтоватое твердое вещество, были получены с выходами 88–96%.Высушенные конъюгаты TDP – лекарство хранили в эксикаторе для дальнейшего использования.

    Синтез T

    г D 8 –изоцианат

    При обычном синтезе 2,4 г T г D 8 (Mn = 6011, 0,4 ммоль) сушили в колбе на 100 мл под вакуумом в течение ночи. . Затем в колбу добавляли 5 мл безводного ДМСО и последовательно добавляли 1,13 г HMDI (240 мкл, 1,5 ммоль) и 8 мг дилаурата дибутилолова. Реакционную смесь перемешивали при 60 ° C в атмосфере азота в течение ночи.В конце реакции полученные полимеры осаждали диэтиловым эфиром и дополнительно очищали повторным растворением в DCM с последующим осаждением в смеси метанола и диэтилового эфира (5/95, об. / Об.) Для удаления оставшегося дилаурата дибутилолова 32 . При сушке в вакууме получали Т г D 8 –изоцианат с выходами 80–95%.

    Синтез T

    г D 8 –TTX уретан

    Обычно 0,325 г изоцианата T г D 8 — сушили в колбе объемом 100 мл в высоком вакууме в течение ночи.Затем в колбу добавляли 5 мл безводного ДМСО и последовательно добавляли 4 мг дилаурата дибутилолова и 0,1 мг ТТХ, суспендированного в 0,05 мл безводного ДМСО. Реакционную смесь перемешивали при 60 ° C в атмосфере азота в течение ночи. В конце реакции полученные полимеры осаждали диэтиловым эфиром и дополнительно очищали повторным растворением в DCM с последующим осаждением в смеси метанола и диэтилового эфира (5/95, об. / Об.) Для удаления оставшегося дилаурата дибутилолова 32 .После сушки в вакууме получали уретан T г D 8 –TTX с выходом 90–95%.

    Измерение краевого угла смачивания

    Измерения краевого угла смачивания водой проводились для полимерной пленки, покрытой центрифугированием на кремниевых подложках, с помощью гониометра, оборудованного автоматическим дозатором (модель 500, Rame-Hart, Succasunna, NJ, USA). Применен метод статической лежачей капли. На поверхность образца наносили 2 мкл воды и определяли угол смачивания на основе изображений.

    1 Измерения H ЯМР

    Полимер и конъюгаты полимер-лекарственное средство были проанализированы с помощью спектроскопии ядерного магнитного резонанса ( 1 H ЯМР) (Varian 400 МГц, оснащенная 5 мм AutoX OneProbe и автосамплер Varian 7600) (Varian, Palo Alto , Калифорния, США). Полимеры растворяли в дейтерохлороформе, и спектры регистрировали при 400 МГц. Химические сдвиги (δ, в м.д.) для пиков, соответствующих атомам водорода, выделены курсивом в следующем списке полимеров. 15 .s / d / m обозначают форму пика (т. е. синглет, дублет, триплет). 1 H ЯМР (T g D 8 ) (400 МГц, CDCl3) δ / частей на миллион: 1,30 (2 H, м, -C H 2 -), 1,62 (2 H, д, -C H 2 CH 2 O (CO) -), 2,35 (2 H, м, -C H 2 O (CO) -), 3,50–3,85 (2 H, м, OHC H 2 CHO-), 3,94 (1 H, м, -OCH 2 C H OH), 4,05λ – 4,35 (2 H, м, -OC H 2 CHO- ), 5.09 (1 H, с, OHCh3C H O-), 5,26 (1 H, с, -OCH 2 C H O-). 1 H ЯМР (T g D 8 P 1000 ) (400 МГц, CDCl 3 ) δ / ppm: 1,30 (2 H, м, -C H 2 -), 1,62 (2 H, d, -C H 2 CH 2 O (CO) -), 2,35 (2 H, м, -C H 2 O (CO) -), 3,64 ( 2 H, м, -OC H 2 -), 3,94 (1 H, м, -OCH 2 C H OH), 4,05–4,35 (2 H, м, -OC H 2 СНО-), 5.09 (1 H, с, OHCH 2 C H O-), 5,26 (1 H, с, -OCH 2 C H O-). Спектр ЯМР 1 H всех полимеров TDP показан на рис. С указанием ключевых структурных элементов. Некоторые пики не могут быть назначены из-за перекрытия сигналов.

    FTIR измерения

    Инфракрасные спектры с преобразованием Фурье (FTIR) получали с использованием спектрометра Thermo Nicolet Nexus 870, работающего в режиме ослабленного полного отражения (ATR) с детектором дейтерированного триглицинсульфата KBr.Спектры, скорректированные по базовой линии, были собраны на площади 400–4000 см –1 при разрешении 4 см –1 и усреднены по 256 сканированным изображениям для улучшения отношения сигнал / шум. Спектры обрабатывали с помощью программного пакета OMNIC (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США).

    Измерение молекулярной массы

    Молекулярную массу определяли методом ГПХ с использованием тетрагидрофурана в качестве растворителя и полистирола в качестве стандартов. ГПХ выполняли с использованием системы Waters, оснащенной дифференциальным рефрактометром 2400.Насос 515 и автоматический пробоотборник 717-plus (Waters Corporation, Милфорд, Массачусетс, США). Скорость потока составляла 1,0 мл мин. -1 .

    Деградация полимеров in vitro

    Исследования потери массы проводили путем помещения полимеров в устройство для диализа Slide-A-Lyzer MINI (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) с пороговым значением 10000 МВт, диализ против 14 мл. PBS и инкубировали при 37 ° C на платформенном шейкере при 60 об / мин (New Brunswick Innova 40, Eppendorf, Гамбург, Германия). В каждый момент времени диализный раствор заменяли свежим, предварительно нагретым PBS.14 мл диализного раствора замораживали, лиофилизировали и массу остатка взвешивали для анализа потери массы. Половина потери массы рассчитывалась на основе времени, необходимого для накопления потерянной массы, равной половине первоначальной загруженной массы.

    Культура клеток

    Культура клеток миобластов мышей C2C12 (Американская коллекция типовых культур (ATCC), Манассас, Вирджиния, США) и клеток феохромоцитомы надпочечников крыс PC12 (ATCC, Манассас, штат Вирджиния, США) выполнялась, как описано 21 .Вкратце, клетки C2C12 культивировали в DMEM с 20% FBS и 1% пенициллина стрептомицина. Клетки высевали на 24-луночный планшет при 50 000 клеток мл -1 и инкубировали в течение 10–14 дней в DMEM с 2% лошадиной сывороткой и 1% пенициллина стрептомицином для дифференцировки в миотубулы. Клетки PC12 выращивали в среде DMEM с 12,5% лошадиной сыворотки, 2,5% FBS и 1% пенициллина стрептомицина. Клетки высевали на 24-луночный планшет и через 24 часа после посева добавляли 50 нг мл -1 фактора роста нервов.

    Жизнеспособность клеток

    Миобласты мыши C2C12 и клетки феохромоцитомы надпочечника крысы PC12 (1 × 10 4 на лунку) инкубировали с различными концентрациями полимера в течение 24 часов.После инкубации клетки промывали до 5 раз PBS для удаления любых оставшихся полимеров. Жизнеспособность клеток определяли с помощью МТТ. Вкратце, культуральные супернатанты из контрольных и содержащих полимер лунок собирали, и клетки инкубировали с МТТ (0,5 мг мл -1 ; 3 ч). Формазан растворяли в 200 мкл ДМСО и измеряли оптическую плотность при 550 нм. Оптическая плотность контрольных лунок была принята за 100%, и жизнеспособность клеток обработанных лунок была определена по отношению к контрольным лункам.

    Определение равновесной растворимости ТТХ

    Исследования растворимости ТТХ определяли путем уравновешивания избытка ТТХ в органических растворителях.Анализы проводили в пробирках на 2 мл. В каждую пробирку добавляли 1 мл органического растворителя и 1 мг ТТХ. Количество ТТХ было достаточным для насыщения каждого растворителя, о чем свидетельствует осаждение нерастворенного ТТХ. Шейкер-инкубатор использовали для хранения образцов при 25 ° C при перемешивании со скоростью 150 об / мин в течение 72 часов (пока образцы не достигли равновесия 33 ). Затем образцы фильтровали через одноразовый капсульный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

    Для определения растворимости ТТХ в ДМСО и ДМФ фильтраты разбавляли PBS до конечной концентрации 10% ДМСО или ДМФ.Концентрацию ТТХ в смеси измеряли с помощью набора TTX ELISA, и стандартную кривую ELISA получали растворением свободного TTX в растворе PBS, содержащем 10% ДМСО или ДМФ.

    Для определения растворимости TTX в DCM 1 мл фильтрата переносили в круглодонную колбу и DCM удаляли с помощью роторного испарителя. В круглодонную колбу добавляли 0,1 мл лимонного буфера для растворения любого ТТХ. 50 мл раствора разбавляли 450 мл PBS. Концентрацию ТТХ в смеси измеряли с помощью набора ТТХ ELISA.

    Определение доли лекарственного средства, связанного с полимером

    После завершения реакции этерификации DCM из реакционной смеси удаляли с помощью роторного испарителя. Затем реакционную смесь промывали 30 мл деионизированной воды. Конъюгаты полимер-лекарство центрифугировали при 48 384 × 90 309 g в течение 5 мин, супернатант собирали как супернатант № 1. Конъюгаты полимер-лекарство промывали 40 мл деионизированной воды и снова центрифугировали. Супернатант собирали как супернатант №2.Концентрацию ТТХ в собранных супернатантах измеряли с помощью ELISA. Концентрацию дексаметазона в собранных супернатантах определяли с помощью ВЭЖХ.

    Доля лекарственного средства, связанного с полимером, была рассчитана следующим образом:

    Доля связанного с полимером лекарственного средства = лекарственное средство-лекарственное средство не связанное с лекарственным средством Загрузка определялась количеством лекарственного средства, деленным на общую массу реагента, подаваемого в реакцию этерификации.

    Загрузка лекарства = MassdrugMassdicarboxylicacid + Masstriol + MassPEG × 100%

    2

    Загрузка лекарства на молекулу TDP была рассчитана следующим образом:

    DrugTDPmolecule = Drugloading × MnTDPMWdrug

    3

    Высвобождение лекарства in vitro

    размещение конъюгатов полимер-лекарство в диализном устройстве Slide-A-Lyzer MINI (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс) с пороговым значением 10 000 MW, дальнейший диализ с 14 мл PBS и инкубирование при 37 ° C на платформенном шейкере (New Brunswick Innova 40, 60 об / мин).В каждый момент времени диализный раствор заменяли свежим, предварительно нагретым PBS. 0,5 мл диализного раствора было сохранено для анализа лекарств. Концентрацию ТТХ в высвобождающей среде количественно определяли с помощью ELISA. Концентрацию дексаметазона определяли с помощью ВЭЖХ (Agilent 1260 Infinity, Agilent, Санта-Клара, Калифорния, США) с использованием колонки C18 (Poroshell 120 EC-C18, 4,6 × 100 мм, внутренний диаметр 2,7 мкм, Agilent, Санта-Клара, Калифорния, США). ) с подвижной фазой ацетонитрил / вода (70:30) и расходом 0,5 мл мин -1 .Дексаметазон определяли по УФ-поглощению при λ = 254 нм. Полупериод высвобождения лекарственного средства рассчитывали на основе времени, необходимого для накопления высвобожденного лекарственного средства, равного половине загруженного лекарственного средства.

    Приборы и условия для ЖХ-МС

    Анализ выполняли на приборе Agilent 6130 Single Quadrupole LC / MS. Хроматографическое разделение было достигнуто с использованием колонки Kinetex Hilic (100 × 2,1 мм, 100 Å, частицы 2,6 мкм; Phenomenex, Торранс, Калифорния, США). 0,1% (об. / Об.) Муравьиной кислоты в воде использовали в качестве подвижной фазы А и 0.1% (об. / Об.) Муравьиной кислоты в ацетонитриле использовали в качестве подвижной фазы B. Скорость потока подвижной фазы составляла 500 мкл мин -1 . Объем инъекции составлял 5 мкл. Метод градиентного элюирования был следующим: от 90% B до 10% B от 0 до 10 минут, выдержка при 10% B от 10 до 13 минут, от 10% B до 90% B от 13 до 14 минут.

    Изготовление инъекционных композиций

    Для приготовления инъекционной композиции TDP – TTX / PEG200 или TDP – TTX / PEG200 / PPG4000 100 мг конъюгатов TDP – TTX полностью растворяли в избытке DCM с последующим добавлением заранее определенное количество PEG200 или PEG200 / PPG4000 (концентрации см. в дополнительной таблице 7 ).Полученную смесь встряхивали в течение 1 мин до получения однородного раствора. DCM удаляли на роторном испарителе с последующим вакуумированием при комнатной температуре в течение 2 дней.

    Реологические испытания

    Реологические свойства составов TDP-TTX / PEG200 контролировали с помощью реометра AR2000 (TA instruments, New Castle, DE, USA), оборудованного регулятором температуры. Для всех испытаний использовалась параллельная пластина диаметром 20 мм. Расстояние между пластинами составляло 0,3 мм.Развертка по частоте от 0,1 до 100 рад / с проводилась при комнатной температуре. Использовали постоянное напряжение 0,1 Па.

    Исследования на животных

    Исследования на животных проводились в соответствии с протоколами, утвержденными Комитетом по уходу и использованию животных Бостонской детской больницы в соответствии с руководящими принципами Международной ассоциации по изучению боли. Взрослых самцов крыс Sprague – Dawley (Charles River Laboratories, Уилмингтон, Массачусетс, США) весом 350–400 г содержали группами при 12-часовом цикле свет / темнота с включенным светом в 6:00 утра.

    Инъекции седалищного нерва выполнялись иглой 23 G в левый седалищный нерв под кратковременной изофлуран-кислородной анестезией 4 , 34 . Иглу вводили задне-медиально к большому вертлугу, указывая в переднемедиальном направлении, и при контакте с костью препараты вводили в седалищный нерв. Внутривенные инъекции выполнялись иглой 23 G через хвостовую вену под кратковременной изофлуран-кислородной анестезией.

    Нейроповеденческое тестирование проводилось на обеих задних конечностях 4 , 34 .Дефицит в правой (без инъекции) конечности служил показателем системного распределения наркотиков.

    Блокада сенсорного нерва оценивалась с помощью модифицированного тестирования горячей пластиной. Вкратце, задние лапы последовательно (слева, затем справа) подвергали воздействию горячей пластины с температурой 56 ° C (Stoelting, Wood Dale, IL, USA), и время, в течение которого животное позволяло лапе оставаться на горячей пластине (тепловая задержка), составляло измеряется. Температурная латентность 2 с указала на отсутствие блокады нерва (исходный уровень), а тепловая латентность в 12 с была максимальной латентностью.Успешная блокада нерва определялась как достижение теплового латентного периода более 7 с. Задние лапы снимали с плиты через 12 с, чтобы предотвратить термическое повреждение. Измерения повторялись трижды для каждого животного в каждый момент времени, и медиана использовалась для дальнейшего анализа данных.

    Блокада двигательного нерва оценивалась с помощью теста на нагрузку для определения двигательной силы задней лапы крысы. Короче говоря, крысу помещали одной задней лапой на цифровые весы и позволяли нести ее собственный вес.Регистрировали максимальный вес, который могла выдержать крыса, не касаясь лодыжкой весов, и моторный блок считали достигнутым, когда моторная сила была меньше половины максимальной 4 , 9 . Измерения повторялись трижды в каждый момент времени, и медиана использовалась для дальнейшего анализа данных.

    Продолжительность сенсорного блока рассчитывалась как время, необходимое для возврата тепловой задержки к 7 с (на полпути между базовой линией и максимальной задержкой).Продолжительность моторного блока была определена как время, необходимое для того, чтобы нагрузка вернулась на полпути между нормальным и максимальным блоком.

    Конфокальная визуализация

    Под кратковременной изофлуран-кислородной анестезией крысам вводили 0,5 мл исследуемой композиции (25 мг конъюгатов FITC-T г D 8 конъюгатов в PEG200, 0,25 мг флуоресцеина натрия в PEG200, 0,25 мг флуоресцеина натрия в PBS), затем умерщвляли через заданные промежутки времени. Седалищные нервы вместе с окружающими тканями собирали и помещали в состав OCT (VWR, Radnor, PA, USA), затем замораживали и хранили при -20 ° C.Срезы (10 мкм) готовили с использованием микротома-криостата (Leica CM3050 S, Wetzlar, Германия) и помещали на предметные стекла. После этого предметные стекла фиксировали предварительно охлажденным 4% параформальдегидом в течение 20 мин при комнатной температуре, промывали 3 раза в PBS (pH 7,4). Наконец, на предметные стекла наносили покрытие ProLong Gold Antifade Mountant (с 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом, DAPI) и покровные стекла. Все изображения были выполнены с использованием многофотонной конфокальной микроскопии Zeiss LSM 710 (Carl Zeiss AG, Оберкохен, Германия).

    Визуализация системы визуализации in vivo (IVIS)

    Под изофлуран-кислородной анестезией крыс брили и вводили 0.5 мл тестируемого состава (25 мг конъюгатов Cy5.5-T г D 8 в ПЭГ200). Были получены изображения флуоресценции in vivo, и интенсивность флуоресценции была оценена в заранее определенные моменты времени после инъекции (под кратковременной изофлуран-кислородной анестезией) с использованием Spectrum IVIS (PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Изображения всего тела животных были записаны неинвазивным способом. Для визуализации использовались возбуждающий фильтр 675 нм и эмиссионный фильтр 700 нм. Для исследований распределения тканей ex vivo крыс умерщвляли через 1 день после инъекции и визуализировали седалищный нерв и окружающие ткани.

    Сбор ткани и гистология

    Крыс умерщвляли через 4 и 14 дней после инъекции (поскольку мы обнаружили, что эти временные точки полезны для оценки как острого, так и хронического воспаления и миотоксичности), и седалищный нерв собирали вместе с окружающими его тканями. ткани. Диссектор не знал, какой раствор вводили каждой крысе.

    Образцы мышц фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине и обрабатывали для гистологии (слайды, окрашенные гематоксилином-эозином), используя стандартные методы.Слайды анализировались наблюдателем (MM), не знающим природы отдельных образцов. Образцы оценивали на воспаление (0–4 балла) и миотоксичность (0–6 баллов) 21 , 35 . Оценка воспаления представляла собой субъективную оценку степени тяжести (0: отсутствие воспаления, 1: периферическое воспаление, 2: глубокое воспаление, 3: мышечное гемифасцикулярное воспаление, 4: мышечное голофасцикулярное воспаление). Оценка миотоксичности отражает две характерные особенности миотоксичности местного анестетика: интернализацию ядра и регенерацию.Ядерная интернализация характеризуется миоцитами нормального размера и цветности, но с ядрами, расположенными далеко от их обычного местоположения на периферии клетки 9 . Для регенерации характерны сморщенные миоциты: клетки со скудной эозинофильной цитоплазмой и гиперхроматическими ядрами. Оценка была следующей: 0. нормально; 1. перифасцикулярная интернализация; 2. глубокая интернализация (> 5 клеточных слоев), 3. перифасцикулярная регенерация, 4. глубокая регенерация (> 5 клеточных слоев), 5.гемифасцикулярная регенерация, 6. голофасцикулярная регенерация. Оценка для образца представляет собой наихудшую область (наиболее серьезные повреждения), присутствующую на слайде.

    Седалищные нервы фиксировали в растворе KII Карновского, обрабатывали и заливали Epon для окрашивания толуидиновым синим. Их оценивали с помощью оптической микроскопии в маскировке.

    Статистика

    Данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение ( n = 4 в исследованиях кинетики высвобождения, клеточной работе, нейроповеденческих и гистологических исследованиях).Статистические различия между группами проверяли с помощью одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) для множественных сравнений с использованием программного обеспечения Origin (OriginLab Corp. Northampton, MA, USA). p <0,05 считалось статистически значимым.

    Заявление об этическом соответствии

    Здоровые взрослые крысы-самцы Sprague – Dawley массой 350–400 г были приобретены в Charles River Laboratories, и за ними ухаживали в соответствии с протоколами, утвержденными в учреждениях и на национальном уровне.Эксперименты проводились в соответствии с Руководством по использованию животных Детской больницы Бостона и одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Бостонской детской больницы.

    Kenteken Check 80-TTX-8 — MERCEDES-BENZ 300 D

    Deze MERCEDES-BENZ 300 D был первым в геноме gebruik в конце 1987 года. В апреле 2012 года автомобиль был выпущен в Нидерландах, когда он был построен в Нидерландах. De MERCEDES-BENZ 300 D — это средний автомобиль.De wielen worden aangedreven door een 109 pk dieselmotor. Микроавтобус de MERCEDES-BENZ heeft een topsnelheid 190 км / ч

    Bouwjaar1987

    Brandstofdiesel

    Kleurgroen

    Cilinderinhoud2975 куб.см

    Масса 1315 кг

    APK25 сентябрь 1989 г. BENZ Модель 300 D Kleur Groen Brandstof дизель Carrosserie Carrosserie седан AE 5 Aantal wielen 4 Motorrijtuigenbelasting (kwartaal) € 341 — € 361 BPM € 0 90EGTRATIE g 25 сентября 1987 г. Datum eerste registratie Nederland 5 апреля 2012 г. Datum laatste tenaamstelling 10 июля 2013 г. APK 9019 9019 25 сентября 1989 г. Параллельный импорт и WAM verzekerd ja Aantal eigenaren 2

    MOTOR

    2975 куб.см
    Макс.Vermogen 80 кВт / 109 шт.

    MILIEU

    berereder
    CO2-uitstoot (NEDC) niet geregistreerd
    CO2-uitstoot (WLTP) niet199

    MATEN & GEWICHTEN

    11203
    Massa leeg 1,315 кг
    Максимальная масса тела 1,910 кг
    Aanhangermassa geremd .500 кг. / ч
    Ускорение 0-100 км / ч 13,7 с
    Максимальный вермоген 80 кВт / 109 пк
    Максимальный коппель 185 Нм
    Draaicirk , 2 м
    Dakbelasting 100 кг
    Inhoud bagageruimte 520 — 520 л
    Inhoud brandstoftank 70 л
    Сегмент E

    То же самое можно встретить в CarBase.Klik op een uitvoering voor meer gegevens.

    Autoverzekering

    Aankoopkeuring

    Veilig een auto kopen? Een BOVAG-monteur controleert jouw toekomstige aankoop op de belangrijkste punten. Де keuring verdient zich àltijd terug.

    Обработка TTX изменяет свойства mIPSC. A – E, Свойства …

    Контекст 1

    … Рис. 1, доступный на www.jneurosci.org в качестве дополнительного материала), предполагая, что хроническая неактивность нейронов приводит к потере функциональной гетеромерной клеточной поверхности. GABA A Rs.Кроме того, обработка TTX также значительно снижает количество GABA A R на клеточной поверхности, содержащих 3 субъединицы, в 16 нейронах гиппокампа DIV (дополнительный рис. 2, доступный на www.jneurosci.org в качестве дополнительного …

    Context 2

    . … эти условия, оставшиеся события были заблокированы пикротоксином (20 M), что указывает на то, что эти события зависели от активации GABA A R (данные не показаны). Как показано на рисунке 2 AD, нейроны, обработанные TTX, демонстрировали значительный сдвиг пиковой амплитуды и частоты по сравнению с контролем.Количественно оценивая эти наблюдения, средняя амплитуда mIPSC в нейронах, обработанных TTX, составила 41,8 3,3 пА (n 9), что значительно ниже (рис. 2 E) (p 0,05), чем значение 50,7 1,9 пА (n 8), очевидное в управляющие нейроны. …

    Контекст 3

    … эти события зависели от активации GABA A R (данные не показаны). Как показано на фиг. 2A-D, нейроны, обработанные TTX, показали значительный сдвиг пиковой амплитуды и частоты по сравнению с контрольными. Количественно оценивая эти наблюдения, средняя амплитуда mIPSCs в нейронах, обработанных TTX, составила 41.8 3,3 pA (n 9), что значительно ниже (рис. 2 E) (p 0,05), чем значение 50,7 1,9 pA (n 8), наблюдаемое в контрольных нейронах. Кроме того, средняя частота mIPSCs в нейронах, обработанных TTX, составляла 0,5 0,1 Гц (n 14), что значительно ниже (рис. 2 E) (p 0,05), чем значения, очевидные в контроле (0,9 0,1 Гц; n 14). Однако константы времени нарастания и спада 10–90% не изменились в …

    Контекст 4

    … с элементами управления. Количественно оценивая эти наблюдения, средняя амплитуда mIPSCs в нейронах, обработанных TTX, составила 41.8 3,3 pA (n 9), что значительно ниже (рис. 2 E) (p 0,05), чем значение 50,7 1,9 pA (n 8), наблюдаемое в контрольных нейронах. Кроме того, средняя частота mIPSCs в нейронах, обработанных TTX, составляла 0,5 0,1 Гц (n 14), что значительно ниже (рис. 2 E) (p 0,05), чем значения, очевидные в контроле (0,9 0,1 Гц; n 14). Однако константы времени нарастания и спада 10-90% не изменились в нейронах, обработанных ТТХ, по сравнению с контролем (рис. 2) (дополнительный рис. 3, доступный на сайте www. Jneurosci.org в качестве дополнительного материала).Хотя изменения в амплитуде mIPSC могут отражать измененные …

    Контекст 5

    … pA (n 8), очевидные в контрольных нейронах. Кроме того, средняя частота mIPSCs в нейронах, обработанных TTX, составляла 0,5 0,1 Гц (n 14), что значительно ниже (рис. 2 E) (p 0,05), чем значения, очевидные в контроле (0,9 0,1 Гц; n 14). Однако константы времени нарастания и спада 10-90% не изменились в нейронах, обработанных ТТХ, по сравнению с контролем (рис. 2) (дополнительный рис. 3, доступный на сайте www.jneurosci.org в качестве дополнительного материала). Хотя изменения амплитуды mIPSC могут отражать измененное высвобождение передатчика или измененную кинетику канала, они также указывают на измененное количество синаптических рецепторов. В соответствии со сниженной амплитудой mIPSC дефицит количества клеток …

    Контекст 6

    … отражает измененное высвобождение передатчика или измененную кинетику канала, они также указывают на измененное количество синаптических рецепторов. В соответствии со сниженной амплитудой mIPSC, дефицит количества субъединиц клеточной поверхности 3 также очевиден в нейронах кортикального гиппокампа, обработанных ТТХ, как измерено с помощью биотинилирования (рис.1) (дополнительный рис. 2, доступный на www.

    No related posts.

    Об alexxlab

    Просмотр всех записей alexxlab →

    Вам может понравиться

    Размеры уаз 3303: УАЗ-3303 (бортовой) цена и характеристики, фотографии и обзор

    Машины меньше всего теряющие в цене: Россиянам назвали автомобили, которые меньше всего теряют в цене — Motor

    Мазда 3 2018 года новая модель фото: фото, цена, комплектации, старт продаж в России

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *