Стационарный пост дпс это: ПОЛОЖЕНИЕ О СТАЦИОНАРНЫХ ПОСТАХ ДОРОЖНО

Содержание

ПОЛОЖЕНИЕ О СТАЦИОНАРНЫХ ПОСТАХ ДОРОЖНО

Приложение 8

к Приказу МВД России

от 25 февраля 1999 г. N 146

1. Стационарный пост — место несения службы нарядами дорожно — патрульной службы Государственной инспекции безопасности дорожного движения Министерства внутренних дел Российской Федерации, оборудованное специальными служебными помещениями, оснащенное оперативно — техническими и специальными средствами, инженерными и иными сооружениями, а также закрепленная за ним зона ответственности.

Зона ответственности — территория поста с прилегающим к ней участком дороги, в пределах которого наряд дорожно — патрульной службы выполняет свои функциональные обязанности.

2. Дислокация стационарных постов на федеральных автомобильных дорогах утверждается Министерством внутренних дел Российской Федерации, на территориальных дорогах — МВД, ГУВД, УВД субъектов Российской Федерации.

3. Основные функции нарядов стационарных постов:

— оказание в пределах своей компетенции помощи участникам дорожного движения и защита их законных прав и интересов;

— контроль за соблюдением правил дорожного движения, а также нормативных правовых актов в области дорожного движения;

— регулирование дорожного движения, в том числе с использованием технических средств и автоматизированных систем, обеспечение организации движения транспортных средств и пешеходов в местах проведения аварийно — спасательных работ и массовых мероприятий;

— осуществление неотложных действий на месте дорожно — транспортного происшествия, в том числе принятие мер по эвакуации людей, оказание им первой медицинской помощи, а также содействие в транспортировке поврежденных транспортных средств и охране имущества, оставшегося без присмотра;

— участие в реализации мероприятий по обеспечению безопасного и бесперебойного движения и надзор за ним, предупреждение, выявление и пресечение нарушений Правил дорожного движения Российской Федерации, иных нормативных правовых актов, действующих в этой области, привлечение в установленном порядке и в пределах своей компетенции к административной ответственности лиц, совершивших такие правонарушения;

— участие в мероприятиях по охране общественного порядка и обеспечению общественной безопасности, борьбе с преступностью;

— участие совместно с заинтересованными ведомствами, организациями, учреждениями, предприятиями независимо от форм собственности, общественными объединениями, должностными лицами, а также гражданами в реализации мероприятий, направленных на создание условий для безопасного движения транспорта и пешеходов;

— участие в осуществлении контроля за соблюдением иностранными гражданами и лицами без гражданства установленных для них правил въезда, выезда, пребывания и транзитного проезда на транспортных средствах через территорию Российской Федерации.

4. В состав наряда стационарного поста назначается не менее двух сотрудников дорожно — патрульной службы. Один сотрудник должен быть экипирован в бронежилет и вооружен автоматическим оружием с целью осуществления страховочных функций при проверке нарядом транспортных средств.

5. Наряды стационарных постов находятся в прямом подчинении руководства строевых подразделений дорожно — патрульной службы или органа внутренних дел (в соответствии со штатной структурой), оперативном — дежурных частей строевых подразделений, органов внутренних дел, а также вышестоящих подразделений ГИБДД.

6. Во исполнение решений Правительства Российской Федерации в порядке, определяемом МВД России, на стационарные посты могут дополнительно выставляться наряды других министерств и ведомств для осуществления контроля за передвижением транспорта и перевозкой грузов.

7. При проведении специальных мероприятий наряды стационарных постов могут усиливаться за счет сотрудников других служб.

8. При несении службы на постах могут использоваться служебные собаки, которые ставятся на довольствие в органе внутренних дел по месту дислокации поста.

9. Инструктаж и контроль за несением службы нарядами стационарных постов возлагаются на командование соответствующих строевых подразделений дорожно — патрульной службы или руководство органов внутренних дел по территориальности.

10. Проектирование стационарных постов, их оборудование и обустройство прилегающей территории осуществляются в соответствии с примерным перечнем (приложение 1).

11. Результаты работы каждой смены стационарных постов оформляются по установленной форме старшими нарядов и передаются для обобщения в дежурную часть соответствующего строевого подразделения или органа внутренних дел по месту дислокации поста.

12. Служебная документация стационарного поста ведется по формам, установленным в органах внутренних дел Российской Федерации.

зачем он нужен, какие обязанности несет

Постройки с надписью ДПС на российских дорогах часто пугают водителей. Сотрудники ГИБДД в этих пунктах останавливают для проверки автомобили без каких-либо причин. Поэтому важно знать какими правами и обязанностями обладают сотрудники поста ДПС, и какие права в данной ситуации имеет водитель.

Что является стационарным постом ДПС

Стационарный пост ДПС значит непередвигаемый пункт пропуска и контроля, который оборудован специальными оперативно-техническими средствами и служебными помещениями.

Сотрудники ГИБДД несут ответственность за участок местности, на котором расположен их пост. Но к понятию стационарного пункта не относятся автомобили, придорожные насаждения и временные некапитальные постройки.

Ключевое слово, в данном случае, стационарный. Поэтому не стоит считать таковым автомобиль ГИБДД, который припаркован на обочине дороге. Это будет выездной пункт.

Стационарные посты, к тому же, устанавливают не везде, а в тех точках дороги, которые образуют важные узлы с большими грузовыми потоками. Например, на перекрёстках, крупных трасс, пограничных переходах. Работают они круглосуточно, а недалеко от таких постов расположены постоянные посты ГАИ.


По каким причинам могут остановить автомобиль

Проверка документов на стационарных постах ДПС может происходить по строгому перечню причин, указанных в приказе МВД №185:

  • Водитель нарушил ПДД, и сотрудник это увидел или определили с помощью специального оборудования;
  • У сотрудника есть информация о причастности данного водителя к преступлению или административному нарушению;
  • Машина в розыске;
  • Водитель – свидетель аварии, и его остановили для дачи показаний;
  • В рейдах по проверке перевозки запрещённых грузов;
  • Сотрудник выполняет действия по регулировке движения;
  • Необходимо помочь пострадавшим от аварии;
  • Автомобиль нужен медработникам или ГИБДД;
  • Водителя просят быть понятым.

Как видно из этого списка, для остановки на стационарном посту ДПС по определению нужны причины. Просто так остановить нельзя. Другое дело, что сотрудник может остановить для банальной проверки документов.

Проверка документов на стационарных постах ДПС

Остановка для проверки связана с задачей сотрудника поста обеспечить беспрепятственное, безопасное и постоянное движение.

При этом в 2017 году отменили предписание останавливать для проверки документов только на стационарных постах. Теперь разрешена остановка автомобиля сотрудником ДПС вне стационарного поста.

Выездные посты теперь могут также останавливать для проверки. И это положение закреплено в новом Административном регламенте.

Существует документ под названием «Наставление по работе ДПС ГИБДД МВД», в котором сказано, что:

  • Проверить документы сотрудник может у всех лиц, которых он заподозрил в совершении преступления;
  • При наличии информации о том, что водитель имеет при себе оружие и иные запрещённые вещи, сотрудник вправе досмотреть автомобиль. Если найден запрещённый груз и на него у водителя нет разрешения, сотрудник ДПС должен такой груз изъять.

Что должен делать сотрудник ДПС при остановке автомобиля

Весь перечень действий, которые обязан совершить сотрудник при проверке документов ДПС вне стационарного поста или на нём, указан в приказе МВД №297. Основные обязанности:

  • Представиться с указанием звания и фамилии;
  • Сказать, по какой причине остановлен автомобиль;
  • Быть вежливым и спокойным;
  • В зависимости от причины остановки и поведения водителя, дальнейшие обязанности существенно разняться. Это может быть проверка документов, досмотр машины и даже задержание водителя, в случае нарушения им закона.

Сейчас много говорят об отмене стационарных постов ДПС ГИБДД, но это никак не подтверждено официально. Таких постов небольшое количество, что можно увидеть на карте стационарных постов ДПС. И они выполняют свои функции только на определённых участках дорог.

Facebook

Twitter

Вконтакте

Google+

Стационарный пост ДПС — что является стационарным постом, а что нет

Стационарный пост определяется как контрольно-пропускная точка, которая не передвигается. Она располагается на постоянном месте и оборудована служебным помещением, в котором есть все средства оперативно-технического назначения, необходимые сотрудникам ГИБДД при выполнении ими мероприятий по контролю и надзору дорожной ситуации в рамках возложенных на них правовыми актами и должностной инструкцией обязательств. Пост ДПС работает круглосуточно. Обычно он располагается на автотрассах у перекрестков, а также в районе грузопоглощающих пунктов и пограничных переходов.

Где располагается и для чего используется?

Стационарный пост ДПС расположен на определенной территории. За точкой контроля обычно закреплена зона ответственности, в пределах которой сотрудники ГИБДД могут пользоваться расширенными полномочиями. Непостоянные сооружения или транспортные средства, не подходят под идентификацию постоянных точек контроля. Они относятся к категории выездных, в которой полномочия ответственных сотрудников несколько отличаются.

Каждый пост имеет зону ответственности. Она определяет территорию с прилегающим участком дороги или местности, в пределах которой наряд ДПС уполномочен действовать с целью выполнения своих функциональных обязанностей. Зона ответственности идентифицируется утвержденной руководством схемой, которая должна находиться у сотрудников при несении службы.

Стационарный пункт должен обязательно прилегать к участку дорожного полотна. Расположение постоянных точек контроля на автомобильных дорогах Федерального значения утверждается МВД РФ, а на дорогах территориального значения — МВД субъектов РФ. На сегодняшний день стационарный пост ДПС не является единственной точкой, где могут остановить автомобиль для осуществления контроля. Действующие нормативные акты предоставляют аналогичные полномочия выездным постам.

Законодательное регулирование

Точное определение стационарного поста ДПС было отмечено в Положении, действующем до 1999 года, и в наставлении по работе ДПС, отмененном в 2009 году. В нормативных актах пост был идентифицирован как место несения службы, размещенное в служебном помещении, оснащенном необходимыми для осуществления деятельности сооружениями, в том числе техническими и специальными средствами. За каждым сотрудником наряда ДПС была закреплена определенная зона, в пределах которой он мог осуществлять деятельность.

На сегодняшний день актуально Наставление, регламентирующее организационный порядок комплексного использования сил и средств ОВД РФ, являющееся приложением к Приказу МВД № 81 от 29.01.2008 года. В нем понятие размыто и определяется точкой контроля, сформированной нарядом сотрудников, каждый из которых выполняет обязанности в оснащенном необходимыми сооружениями служебном помещении. В Административном регламенте под стационарным постом подразумевается контрольно-пропускной пункт, на котором осуществляют службу сотрудники ГИБДД.

Признаки поста

За нарядом дорожно-патрульной службы закреплены определенные обязательства, за невыполнение или некачественное выполнение которых предусмотрена ответственность. Должностные обязанности сотрудниками выполняются в служебном помещении. К его параметрам также предъявляется ряд требований, заключающихся в необходимости оснащения оборудованием, средствами и сооружениями, необходимыми для обеспечения выполнения поставленной перед работникам задачи в полном объеме. К стационарному посту может быть отнесен контрольный пункт ГИБДД, являющийся составляющим элементом системы по розыску транспортных средств. Основными признаками стационарного поста являются:

  • Помещение;
  • Оснащенность средствами, необходимыми для осуществления надзора;
  • Зона ответственности, утвержденная начальством;
  • Наряд сотрудников, уполномоченных по документам осуществлять контроль.

Не относятся к стационарным пунктам автомобили, будки и придорожная растительность. Однако зона ответственности может быть расположена на некотором удалении от поста. Если участник дорожного движения усомнился в правомерности действий сотрудников ГИБДД, то в его праве требовать предъявления утвержденной схемы с расположенной на ней зоной, на которой сотрудники вправе выполнять функциональные обязанности.

Заключение

Законом определены характеристики стационарного поста ДПС, позволяющие четко идентифицировать объект контроля от аналогичной выездной точки. Существует ряд признаков, позволяющих беспроблемно идентифицировать постоянный пост. К такой категории не относятся патрульные автомобили и перемещающиеся будки, поскольку для стационарного объекта характерно размещение на одном месте.

Советуем почитать: Как определить ГИБДД по месту жительства

Рейтинг: 5/5 (1 голосов)

Стационарный пост – элемент дорог прошлого?

Комментарий

Закрытие стационарных постов – тенденция времени, считают в ГИБДД

По данным газеты «Бизнес-класс»,  за последние три года в регионе из 15 стационарных постов 8 были закрыты. Последним  стал стационарный пост ГИБДД, расположенный в деревне Ванюки, неподалеку от аэропорта Большое Савино. На сегодняшний день в городе и его окрестностях осталось 3 стационарных действующих поста — в селе Лобаново, у муниципального моста через Каму и у моста через Чусовую. Еще 4 располагаются в крае. В УГИБДД журналистам  пояснили, что к концу года вероятнее всего будет закрыт стационарный пост в селе Лобаново.

За комментариями к ситуации мы обратились к заместителю начальника отдела дорожно-патрульной службы краевого УГИБДД Виталию Драновскому.

 

Есть комфорт, но нет мобильности

Почему закрыли ванюковский пост?

— Пост в данный момент находится на консервации. Постоянную службу там сотрудники ДПС не несут, но периодически приезжают. Сейчас полностью произошло реформирование структуры МВД, в том числе и государственной инспекции безопасности дорожного движения. Как следствие — на территории Пермского края закрываем стационарные посты. Планируем еще закрыть пост в Лобаново. Я считаю, что стационарные посты своё уже отжили. Более эффективно теперь использовать непосредственно мобильные посты  дорожно-патрульной службы.

— Что из  себя на данный момент представляет стационарный пост ГИБДД?

— Это здание, расположенное вблизи дороги. Службу там несут от трех и более человек. Занимаются они тем, что выявляют нарушение правил дорожного движения, проверяют транспорт по  базам розыска, людей проверяют. В целом,  инспекторы выполняют те же самые задачи, что и мобильный наряд, но находятся постоянно на одном месте.

— Существуют ли какие-то  неоспоримые преимущества стационарного поста перед мобильным нарядом?

— Для сотрудников ГИБДД – да. Имеется строение, в котором можно не бояться ветра, холода, снега, можно  спокойно оформить административный материал.

— А есть ли объективные недостатки?

— Нет мобильности – это главная проблема. В районе стационарного поста, как правило, транспортные происшествия не совершаются. Нам непосредственно, чтобы влиять на аварийность, необходимы мобильные наряды, которые будут нести службу на всех местах, где у нас совершаются дорожно-транспортные происшествия. А людей не хватает. Приходиться выбирать.

Новое время – новые требования

— Мы один стационарный пост заменим несколькими мобильными? А где возьмем народ?

— В Ванюках, насколько я помню,  по четыре человека заступали в смену. Получается два наряда стационарный пост занимали по 12 часов. Если мы его сократим, у нас уже получается четыре мобильных наряда. Они несут службу на территории района. В Индустриальном районе работали один стационарный пост и один мобильный наряд. При сокращении данного поста у нас происходит некоторое перераспределение и  работает не один мобильный наряд, а, например, три или четыре.

Мы в  живем в век цифровых технологий. У нас у всех есть радиостанции, есть сотовые телефоны у сотрудников, есть каналы, по которым можно проверить человека, автомобиль,  это не проблема на данный момент. Когда не было  такой связи, проверять было  проблематично, потому что телефоны были лишь на стационарных постах, и чтобы уточнить данные необходимо было связаться с дежурной частью районного  подразделения. В данный момент мобильный наряд это может сделать непосредственно на месте.

— Стационарные посты отмирают постепенно по всей стране?

— Такая работа происходит на всей территории РФ, потому что  стационарные посты потеряли свою актуальность. Эффективность работы данных стационарных постов гораздо меньше, чем мобильных нарядов. Стационарные посты заменятся  видеокамерами, которые будут работать в автоматическом режиме.

— Как в таком случае должен выглядеть мобильный наряд?

— Патрульный автомобиль должен быть оборудован алкотестером, прибором для проверки  скорости движения автомобиля, видеокамерами, которые будут фиксировать происходящее перед  машиной и внутри салона. Два вооружённых сотрудника несут службу. Я считаю, что это современный наряд. И все транспортные средства должны быть оборудованы удаленным доступом к базам данных. Мы уже начинаем это внедрять. Я думаю, либо к концу этого года, либо в начале  следующего мы к этому придем.

 

От автора

Что-то определённо меняется в этом мире. Представить себе, что ванюковский пост будет законсервирован я просто физически не мог ещё хотя бы год назад. Я не знаю ни одного автомобилиста, который бы припоминал времена, когда ванюковского поста ещё не было, но факт остаётся фактом.  Это произошло. На очереди пост в Лобаново. Его очередь придёт уже до конца года. Возможно на какое-то время его просто перенесут на новую дорогу, которую достраивают, но конец стационарным точкам рано или поздно настанет повсеместно за очень редким исключением.

Хорошо или плохо – точно сказать не берусь. С одной стороны, любой стационарный пост ГИБДД – это необходимость снизить скорость, остановиться, если потребуется, предъявить документы, даже если никакой причины для их проверки нет. С другой стороны, через пост вряд ли поедет пьяная школота на папиной тачке, в районе поста всегда можно перейти дорогу, а предупреждающие знаки о наличии впереди команды гаишников на дороге появляются заблаговременно.

Противники стационарных постов скажут, что их всегда можно объехать. Сторонники припомнят, что на безлюдных трассах вы имеете право остановиться только на стационарном посту.

Реальность такова, что всё чаще, вместо того, что бы останавливать машины, сотрудники ГИБДД на стационарных постах вынуждены их подгонять. Не секрет, что приборы, позволяющие с точностью определять вашу скорость, уровень тонировки, наличие алкоголя в организме могут быть в арсенале любого экипажа дорожной полиции. И не обязательно подобные проверки осуществлять в строго отведённом для этого месте.

Численный состав гаишников сокращается, а выбирая между сменой на посту и сменой в поле, эффективнее представляется мобильная работа.

Говоря о ГИБДД в любом аспекте их работы, несомненно придётся упомянуть термин “коррупция”. Есть мнение, что стационарные посты более спокойны в этом отношении. Дескать с экипажем в поле легче договориться. Возможно для кого-то эта часть вопроса актуальна. От себя лишь замечу, что самую высокоорганизованную систему дорожных поборов в своей жизни  я наблюдал именно на стационарном посту “Шахты” в ростовской области.

Объективный плюс стационарного поста ГИБДД есть, но, прежде всего, для самих гаишников. Там тепло, сухо и есть возможность разогреть кофе с булочкой в спокойной обстановке, а то и вздремнуть по очереди, если необходимо. На трассе с этим сложнее. Однако, со всей циничностью замечу, а нам-то до этого что?

 

Роман Попов

Плашка дальнего света.

< Предыдущая   Следующая >

Стационарный пост ДПС – АПК Автоураган

СТАЦИОНАРНЫЙ ПОСТ ДПС С СИСТЕМОЙ ФОТО- ВИДЕОФИКСАЦИИ АВТОУРАГАН-ВСМ

АПК АвтоУраган-ВСМ активно применяется для стационарной установки на посту ДПС. Компьютерное оборудование при этом размещается в помещении поста ДПС, телевизионные датчики устанавливаются вблизи автотрассы  на кронштейнах на опорах освещения или иных жестких вертикальных конструкциях на расстоянии необходимом для того, чтобы у сотрудников поста было достаточное время для задержания автоматически выявленного комплексом нарушителя. Это расстояние зависит от скоростного режима трассы и обычно составляет от 300 до 800 метров. Высота подвеса телевизионных датчиков, как правило, 6 м.

Данные о проезде транспортных средств накапливаются как на жестком диске компьютера на самом посту ДПС, так и передаются в региональные центры обработки и хранения.

Комплекс обеспечивает возможности:

  • Считывания всех автомобильных передних и задних регистрационных знаков транспортных средств, проезжающих через зону контроля каждого ТВ датчика со скоростью до 150 км/ч. Ширина зоны контроля каждого ТВ датчика не менее 3 метров (одна полоса движения). К одному компьютеру допускается подключать до 4-х телевизионных датчиков (контроль до 4-х полос движения). Для увеличения количества контролируемых полос, допускается объединение нескольких систем в единый комплекс.
  • Распознавания в светлое и темное время суток с общей вероятностью не менее 92%, с вероятностью ошибки не более 4% и с достоверной вероятностью не менее 75% с вероятностью ошибки не более 0,5%.
  • Сохранения изображений автомобилей с нечитаемыми номерными знаками или без номерных знаков.
  • Проверки всех автомобильных номеров по всем подключенным базам данных розыска.
  • Визуальной и звуковой сигнализация о проезде транспорта с номерными знаками, обнаруженными в подключенных базах данных (оповещение об обнаружении выявленных нарушителей).
  • Подключения удаленных баз розыска с возможностью их обновления без остановки программы.
  • Ведение и хранение журналов: всех проехавших через зону контроля автомобилей, автомобилей обнаруженных в подключенных базах данных. Поля, сохраняемые в журнале: дата, время и место регистрации, изображение автомобиля, изображение его номерного знака, распознанный номер, указатель на достоверность распознавания.
  • Поиска и выборки по журналам регистрации:  по дате, времени проезда, по распознанному номеру или его части, по коду региона,  по типу номерного знака, по направлению движения и т.п. (по любому признаку отдельно или любой их комбинации).
  • Просмотра любого изображения из журнала или его фрагмента в увеличенном виде с наложением улучшающих  фильтров (яркость, контрастность, резкость) и сохранение результата в отдельный файл.
  • Вывода на печать протоколов с изображениями выбранных автомобилей с датой, временем и распознанным номером и др. информацией.
  • Выявления факта движения по встречной полосе.

 

Кроме служб ГИБДД данные о проезде транспортных средств могут использоваться органами внутренних дел, подразделениями ФСБ, таможенными и налоговыми структурами, органами прокуратуры и суда.

 

Подробнее о необслуживаемых стационарных рубежах контроля автотрафика

 

Стационарный пост ДПС с измерителями скорости

АПК АвтоУраган-ВСМ, оснащенный измерителями скорости используется для стационарной установки на посту ДПС. Компьютерное оборудование размещается при этом в помещении поста ДПС. Телевизионные датчики и измерители скорости устанавливаются вблизи автотрассы на кронштейн на жестких вертикальных опорах.

Данные о проезде транспортных средств с зарегистрированной для каждого из них скоростью накапливается как на жестком диске компьютера, на самом посту ДПС, так и передаются в региональные центры обработки и хранения. О фактах выявления автомобиля в розыске или превышения скоростного режима движения производится оперативное оповещение сотрудников ДПС. Данные о выявленных нарушениях также архивируются. О факте выявленного превышения скорости может быть распечатан протокол-уведомление стандартного образца.

 

Комплекс обеспечивает возможности:

  • Считывания всех автомобильных передних и задних регистрационных знаков транспортных средств, проезжающих через зону контроля каждого ТВ датчика со скоростью до 150 км/ч. Ширина зоны контроля каждого ТВ датчика и каждого измерителя скорости не менее 3 метров (одна полоса движения). К одному компьютеру допускается подключать до 4-х телевизионных датчиков и, соответственно, до 4-х измерителей скорости (контроль до 4-х полос движения). Для увеличения количества контролируемых полос, допускается объединение нескольких систем в единый комплекс.
  • Распознавания в светлое и темное время суток с общей вероятностью не менее 92%, с вероятностью ошибки не более 4% и с достоверной вероятностью не менее 75% с вероятностью ошибки не более 0,5%.
  • Измерения скорости всех транспортных средств, проехавших зоны контроля со скоростью от 20 до 250 км/ч. С погрешностью не более 2км/ч. Скорость измеряется сертифицированными радиолокационными измерителями скорости.
  • Создания видеоролика проезда автомобиля, как с распознающей, так и с обзорных видеокамер.
  • Автоматического заполнения и формирования протокола-уведомления о нарушениях скоростного проезда.
  • Распечатки квитанций о нарушениях в стандартной форме, в ручном и автоматическом режимах.
  • Сохранения изображений автомобилей с нечитаемыми номерными знаками или без номерных знаков.
  • Проверки всех автомобильных номеров по всем подключенным базам данных.
  • Визуальной и звуковой сигнализация о проезде транспорта с номерными знаками, обнаруженными в подключенных базах данных.
  • Подключения удаленных баз розыска с возможностью их обновления без остановки программы.
  • Ведение и хранение журналов: всех проехавших через зону контроля автомобилей, автомобилей обнаруженных в подключенных базах данных. Поля, хранимые в журнале: дата, время, изображение автомобиля, изображение его номерного знака, распознанный номер, его измеренная скорость, указатель на достоверность распознавания.
  • Поиска и выборки по журналам регистрации:  по дате, времени проезда, распознанному номеру или его части, коду региона,  типу номерного знака, скорости, направлению движения и т.п. (по любому признаку отдельно или любой их комбинации).
  • Просмотра любого изображения из журнала или его фрагмента в увеличенном виде с наложением улучшающих  фильтров (яркость, контрастность, резкость) и сохранение результата в отдельный файл.
  • Вывода на печать протоколов с изображениями выбранных автомобилей с датой, временем и распознанным номером и др. информацией.
  • Распечатки раскадровки видеороликов с выводом на кадр времени с точностью до 1/1000 секунды, для предоставления их в суд.
  • Выявления факта движения по встречной полосе.

С обеих сторон Крымского моста открыли стационарные посты ДПС

С начала работы моста здесь находились временные здания. Сотрудники полиции работали в вагончиках. В начале 2019 года был согласован проект капитальных строений. За его основу взяли уже зарекомендовавшие себя аналоги. Они были доработаны с учётом местных особенностей. В конце 2019 года всё было построено.

Полицейские работают на постах в две смены по 12 часов. Помимо инспекторов ДПС, здесь также несут службу сотрудники ППС и кинологи. Каждый из постов имеет контролируемый разворот, позволяющий выехать в обе стороны трассы.

Архитектура безопасности

Каждое здание, помимо помещения несения службы, оснащено комнатой отдыха, приёма пищи, хранения специальных средств, душевой. Имеется помещение административного задержания. Обустроено несколько туалетов, рассчитанных не только на сотрудников поста, но и обычных граждан. Ведь любой водитель может здесь остановиться, отдохнуть, попросить о помощи. У входа в здание построен пандус для инвалидов. На посту имеются аптечки первой помощи пострадавшим в ДТП. Не забыли и о полицейской собаке, для неё возведён вольер.

Особое внимание при строительстве постов было уделено безопасности. Каждое здание имеет стены повышенной прочности. Поэтому внутри даже пропадает сигнал сотовой связи. Специальное стекло на окнах выдерживает выстрел из пистолета в упор. Каждый пост оборудован пуленепробиваемыми ставнями и бронированной дверью. Имеется бомбоубежище. На подъезде к месту досмотра транспорта установлена бронированная бойница.

Посты оснащены по последнему слову техники. Они имеют независимое энергоснабжение, круглосуточные системы видеонаблюдения. Здесь установлена стационарная система идентификации транспортных средств по государственным регистрационным знакам «Поток». Ещё на подъезде к посту аппаратура фиксирует все транспортные средства, распознаёт и выявляет те, что составляют оперативный интерес. Если автомобиль находится в розыске, по громкой связи как снаружи, так и внутри поступает сигнал. Времени достаточно, чтобы инспекторы могли отреагировать и остановить автомобиль. Каждое проезжающее транспортное средство заносится в журнал проходящего транспорта. Эта информация передаётся в краевую базу, что позволяет в любой момент проследить, где и когда проезжала машина. Оборудование днём и ночью автоматически идентифицирует все транспортные средства даже при высоком автомобильном потоке.

На каждом посту установлена федеральная информационная система учёта, сканер, позволяющий оперативно считывать информацию с документов, проверять их на подлинность. Имеется оборудование, позволяющее проводить экспертизу соответствие транспортных средств заявленному идентификационному номеру.

У каждого инспектора, заступающего на дежурство, есть индивидуальный видеорегистратор. В здании установлен терминал, позволяющий одновременно и заряжать устройства и сбрасывать с них информацию в общую базу. Также здесь есть радио и телефонная связь с постом-дублёром. Она обязательно проверяется каждые сутки. Ведь посты на керченском и на таманском берегу — единое целое перехода. Налажена связь с дежурной частью, а также ситуационным центром Крымского моста, который отслеживает все события на объекте. Всё это даёт возможность в комплексе обеспечивать безопасность всего перехода.

Комфорт ради порядка

Министр транспорта России Евгений Дитрих считает, что стационарные посты с обеих сторон Крымского моста создадут только удобства пересекающим переход гражданам. Ведь востребованность новой магистрали, а значит и её загрузка только увеличивается.

«В прошлом году зафиксирован рекорд движения по мосту — 36 900 автомобилей в сутки. Для того, чтобы люди имели возможность двигаться быстро и безопасно, нужно было создать хорошие условия. Не менее важно, чтобы те, кто обеспечивают безопасность движения, также имели всю совокупность бытовых удобств. Если сотрудник ДПС будет ощущать себя комфортно на рабочем месте, все, кто проезжает по дороге, также будут чувствовать себя хорошо. Большое количество людей на дорогах нашей страны часто пытается останавливаться на отдых именно в местах стационарных постов, потому что знают: здесь безопасно, здесь удобно, здесь всегда придут на помощь», — отметил Дитрих.

Министр предположил, что с окончанием в 2020 году строительства автодороги «Таврида» туристический поток на полуостров только увеличится, что неминуемо усложнит задачи для работающих здесь сотрудников ДПС.

Начальник главного управления по обеспечению безопасности дорожного движения Министерства внутренних дел России генерал-лейтенант полиции Михаил Черников сообщил, что в ходе строительства капитальных зданий постов были учтены все требования МВД к их конструкции и оснащению.

— Два современнейших поста ДПС на подъездах к Крымскому мосту являются лучшими в нашей стране, как по своему структурному обустройству, так и по обеспеченности и оснащённости. Данная трасса и сам мост являются самыми безопасными участками дорог в России. Сотрудникам госавтоинспекции здесь в первую очередь необходимо оказывать содействие участникам дорожного движения, которые десятками тысяч в сутки преодолевают многие километры при подъезде к мосту. Уверен, что служба на этих постах будет комфортной и безопасной. Комфортно будет и водителям с пассажирами, которые могут быть уверены, здесь сделают всё возможное, чтобы им помочь, — отметил Черников.

Каждый пост также получил 5 новых автомобилей Skoda Octavia. Все машины отечественной сборки, оснащены специальным оборудованием. Автомобили будут нести службу на мосту и на подходах. Черников заметил, что транспорт уже получает положительные отзывы от сотрудников.

В ближайшее время рядом с постами построят инспекционно-досмотровые комплексы. На них будут выявлять факты перевоза незаконных грузов, в том числе в скрытых полостях. Тайники в автотранспорте будут находить с помощью радиоволн, которые способны распознавать плотность предмета или материала.

Особое значение введения новый постов ДПС отметил начальник главного управления МВД России по Краснодарскому краю генерал-майор полиции Владимир Андреев. Он заявил, что сотрудники правопорядка приложат все усилия, чтобы законопослушные граждане при пересечении транспортного перехода ощущали себя комфортно. Те же, кто не уважает закон, почувствовали его силу и неотвратимость. Андреев подчеркнул, что условия, созданные для инспекторов, обязывают их увеличить производительности труда в вопросе обеспечения безопасности дорожного движения.

Пока на мосту и подъездных путях к нему разрешена скорость 90 км/ч. Черников считает, что с полным вводом в эксплуатацию трассы «Таврида» скоростной порог может быть повышен до 110 км/ч. Ведь магистраль в районе Крымского моста соответствует наивысшим нормам безопасности.

Пост дорожно-патрульной службы стационарный — это… Что такое Пост дорожно-патрульной службы стационарный?

Пост дорожно-патрульной службы стационарный

«…Стационарный пост дорожно-патрульной службы: место несения службы нарядами дорожно-патрульной службы, оборудованное специальными служебными помещениями, оснащенное оперативно-техническими и специальными средствами, инженерными и иными сооружениями, а также закрепленная за ним зона ответственности…»

Источник:

» ГОСТ Р 52765-2007. Национальный стандарт Российской Федерации. Дороги автомобильные общего пользования. Элементы обустройства. Классификация»

(утв. и введен в действие Приказом Ростехрегулирования от 23.10.2007 N 269-ст)

Официальная терминология. Академик.ру. 2012.

  • Пост вневедомственной охраны
  • Пост маневровый

Смотреть что такое «Пост дорожно-патрульной службы стационарный» в других словарях:

  • стационарный пост дорожно-патрульной службы — 3.25 стационарный пост дорожно патрульной службы: Место несения службы нарядами дорожно патрульной службы, оборудованное специальными служебными помещениями, оснащенное оперативно техническими и специальными средствами, инженерными и иными… …   Словарь-справочник терминов нормативно-технической документации

  • стационарный — Режим, который достигается после завершения адаптации активного ила и отображается на зависимости Свых=f(t) выходом на плато Б (рисунок 1 а, в) Источник: ГОСТ Р 50595 93: Вещества поверхностно активные. Метод определения биоразлагаемости в водной …   Словарь-справочник терминов нормативно-технической документации

  • ГОСТ Р 52765-2007: Дороги автомобильные общего пользования. Элементы обустройства. Классификация — Терминология ГОСТ Р 52765 2007: Дороги автомобильные общего пользования. Элементы обустройства. Классификация оригинал документа: 3.23 аварийно вызывная связь: Система связи для вызова к месту дорожно транспортного происшествия сотрудника ГИБДД,… …   Словарь-справочник терминов нормативно-технической документации

  • СП ДПС — стационарный пост дорожно патрульной службы …   Словарь сокращений и аббревиатур

Dps защищает клетки от множественных стрессов во время стационарной фазы

Abstract

Dps, неспецифический ДНК-связывающий белок из голодных клеток, является наиболее распространенным белком в стационарной фазе Escherichia coli . Гомологи Dps обнаруживаются во всех бактериях и по крайней мере у одного вида архей. Было показано, что Dps защищает клетки от окислительного стресса во время экспоненциальной фазы роста. Во время стационарной фазы Dps организует хромосому в высокоупорядоченный стабильный нуклеопротеидный комплекс, называемый биокристаллом.Мы показываем здесь, что Dps необходим для долгосрочной жизнеспособности в стационарной фазе в конкурентных условиях и что dps мутантов имеют измененные лаг-фазы по сравнению с клетками дикого типа. Мы также показываем, что во время стационарной фазы Dps защищает клетку не только от окислительного стресса, но также от УФ и гамма-излучения, токсичности железа и меди, теплового стресса, а также кислотного и основного шока. Защитные роли Dps, скорее всего, достигаются за счет комбинации функций, связанных со связыванием белок-ДНК и уплотнением хромосом, хелатированием металлов, активностью ферроксидазы и регуляцией экспрессии генов.

Dps, ДНК-связывающий белок из голодных клеток, является одним из наиболее распространенных белков в стационарной фазе Escherichia coli . Когда клетки переходят от экспоненциальной фазы роста к стационарной фазе, Dps индуцируется RpoS-зависимым образом, достигая до 200000 молекул на клетку (2). Dps также регулируется OxyR и σ 70 в ответ на окислительный стресс во время экспоненциальной фазы (3). Белок обладает неспецифической ДНК-связывающей активностью, влияет на экспрессию по крайней мере трех десятков генов и играет роль в различных стрессовых ответах, включая защиту от окислительного повреждения (2, 18).Активная форма белка представляет собой полый сферический додекамер с внешним диаметром ∼90 Å и внутренним диаметром ядра ∼45 Å (2, 27). Во время стационарной фазы Dps связывает хромосому, образуя высокоупорядоченный и стабильный нуклеопротеидный комплекс, называемый биокристаллом. Эта биокристаллическая форма отличается от экспоненциально-фазовой конфигурации нуклеоида и уникальна для клеток с неподвижной фазой (12, 19, 27). Формирование биокристаллов способствует способности Dps влиять на экспрессию генов и защищает хромосомную ДНК.Dps демонстрирует значительную структурную гомологию с ферритинами, высококонсервативным семейством белков, обнаруженных практически во всех организмах, и обладает ферроксидазной активностью и способностью связывать железо (15). Эта железосвязывающая активность, скорее всего, играет важную роль в способности Dps защищать хромосому от окислительного повреждения.

Для E. coli большинство исследований Dps было сосредоточено на его роли в защите от окислительного повреждения, особенно от пероксидов, во время экспоненциальной фазы (2, 18).Здесь мы расширяем репертуар потенциальных стрессоров, чтобы включить долгосрочную инкубацию в стационарной фазе в условиях стресса и конкуренции с питательными веществами, присутствия окислителей и тяжелых металлов, теплового стресса, ионизирующего и УФ-излучения и экстремальных значений pH. Наша рабочая гипотеза состоит в том, что этот многофункциональный белок участвует во многих клеточных процессах и, вероятно, действует через несколько различных механизмов. Во-первых, посредством прямого взаимодействия Dps-ДНК белок защищает ДНК, изолируя хромосому в высокостабильный биокристаллический комплекс.Dps может также напрямую защищать ДНК, выступая в качестве альтернативной мишени для реактивных агентов. Во-вторых, белок снижает производство окислительных радикалов, которые могут повредить ДНК и белок, изолируя и минерализируя ионы металлов, особенно двухвалентного железа, которые могут участвовать в реакции Фентона (9, 26). В-третьих, Dps может нейтрализовать токсичные пероксиды благодаря своей ферроксидазной активности. Наконец, Dps может регулировать экспрессию генов, необходимых для длительного выживания и стрессовых реакций клеток в стационарной фазе.Мы решили проверить эту гипотезу путем определения относительной чувствительности клеток дикого типа и мутантных клеток dps к широкому спектру стрессов окружающей среды.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Штаммы бактерий и плазмиды.

Все эксперименты проводились со штаммами, происходящими от E. coli K-12 штамма ZK126 (28), и перечислены в таблице. Плазмида pJE106 включает ген dps с собственной регуляторной областью (2).

ТАБЛИЦА 1.

Штамм Соответствующий генотип Источник или ссылка
ZK126 W3110 Δ lacU169 tna-2 27
ZK1142 ZK126
ZK1143 ZK126 strR 27
ZK1058 ZK126 dps :: kan 2
ZK1146 ZK126 dps лаборатория
SF2042 ZK1058 pJE106 Это исследование
SF2043 ZK1146 pBR322 Это исследование

Условия культивирования, среды и анализы титрования.

Все штаммы культивировали в 5 мл бульона Лурия-Бертани (LB) (Difco) и инкубировали при 37 ° C с аэрацией в роллере для тестовых пробирок, если не указано иное. Подсчет жизнеспособных клеток определяли серийным разведением клеток, периодически удаляемых из культуры, с последующим посевом на агар LB, содержащий соответствующий антибиотик (ы). Использовали антибиотики в следующих концентрациях: налидиксовая кислота 20 мкг / мл; стрептомицин, 25 мкг / мл; хлорамфеникол, 30 мкг / мл; канамицин, 50 мкг / мл; ампициллин, 150 мкг / мл.Все химические вещества были получены от Sigma-Aldrich.

Анализы конкуренции на долгосрочном росте, лаг-фазе и стационарной фазе.

Чтобы измерить долгосрочную выживаемость отдельных штаммов, 5-миллилитровые культуры бульона LB были инокулированы 1: 1000 (объем: объем) из свежих ночных культур, начатых непосредственно из замороженных запасов бульона LB с глицерином. Эти монокультуры инкубировали и периодически определяли количество жизнеспособных культур. Для определения продолжительности лаг-фазы клеток, покидающих длительную стационарную фазу инкубации, культуры первоначально инокулировали, как описано выше, и инкубировали в течение 10 дней.Каждые 24 ч отбирали 10 мкл клеток и использовали для инокуляции новых 5-мл культур бульона LB. Затем каждые 30 минут в течение 5 часов определяли количество жизнеспособных клеток и оптическую плотность при 600 нм. Время задержки вычислялось как промежуток времени от инокуляции до начала экспоненциального роста, который определяли путем интерполяции линии через временные точки экспоненциальной фазы и отметки точки перегиба относительно горизонтальной линии, представляющей начальную плотность. Все эксперименты по фазе роста и конкуренции проводились не менее трех раз.Определение лаг-фазы проводилось четыре или пять раз.

Для определения относительной приспособленности штаммы дикого типа, мутантные и / или трансформированные плазмидой штаммы, несущие различные маркеры устойчивости к антибиотикам, коокулировали 1: 1000 (об.: Об.) Из свежих ночных культур. Титры индивидуальных субпопуляций определяли после периодического отбора проб, серийных разведений и посева на среду, содержащую соответствующие антибиотики. Для экспериментов, в которых определялась относительная приспособленность штаммов, несущих плазмиды, экспрессирующие dps , в каждый момент времени серийные разведения высевали на агар, содержащий либо только канамицин, канамицин и ампициллин, только хлорамфеникол, либо хлорамфеникол и ампициллин.Посев клеток на среду, содержащую одно лекарство по сравнению с двумя лекарствами, позволяет определить степень потери плазмиды. Для всех экспериментов предел обнаружения составляет <1000 КОЕ / мл.

Анализ окислительного стресса.

Ночные стационарные культуры клеток дикого типа или dps мутантных клеток инкубировали при 37 ° C с аэрацией в присутствии или в отсутствие перекиси водорода в концентрациях до 400 мМ. После добавления H 2 O 2 (который в эксперименте становится нулевым моментом времени) периодически определяли количество жизнеспособных клеток.Все анализы проводились не менее трех раз.

УФ и гамма-облучение.

Ночные стационарные культуры клеток дикого типа или dps мутантных клеток подвергали воздействию УФ-света. Пятимиллилитровые культуры переносили в стерильную чашку Петри диаметром 10 см, помещали под бактерицидную лампу (254 нм, 30 Дж / м 2 ) и периодически отбирали пробы в течение до 5 мин. После воздействия образцы хранили на льду до определения количества жизнеспособных клеток. Все УФ-эксперименты проводились пять раз.

Ночные стационарные культуры клеток дикого типа или dps мутантных клеток подвергали воздействию гамма-излучения в дозе до 700 Гр в Лаборатории реактивного движения, Пасадена, Калифорния. Один миллилитр каждой культуры переносили в микроцентрифужные пробирки и экспонировали. без встряхивания при температуре окружающей среды. Количество облучения было пропорционально времени воздействия. После воздействия образцы хранили на льду до определения количества жизнеспособных клеток. Эксперименты по гамма-облучению проводили дважды.

Анализ напряжения металла.

Экспоненциально-фазовые или стационарные культуры клеток дикого типа или dps мутантных клеток инкубировали при 37 ° C с аэрацией в присутствии или в отсутствие различных металлов в следующих концентрациях: FeSO 4 , от 5 до 10 мМ в логарифмической фазе и от 20 до 200 мМ в стационарной фазе; CuSO 4 , от 5 до 10 мМ; От 50 до 100 мМ; MnCl 2 , от 50 до 100 мМ и 100 мМ; SnCl 2 , от 50 до 100 мМ и от 50 до 100 мМ; K 2 Cr 2 O 7 , от 5 до 10 мМ и 100 мМ; Pb (NO 3 ) 2 , от 50 до 100 мМ и от 50 до 100 мМ; Na 2 SeO 3 , от 5 до 10 мМ и от 50 до 100 мМ; CdCl 2 , от 5 до 500 мМ и от 250 до 500 мМ; NiSO 4 , от 5 до 10 мМ и от 250 до 500 мМ; HgCl 2 , от 5 до 10 мМ и от 50 до 100 мМ.После добавления раствора металла (который становится нулевым в эксперименте) периодически определяли количество жизнеспособных клеток. Все анализы напряжения металла были выполнены в двух экземплярах.

Для определения чувствительности клеток к металлам во время лог-фазы роста ночные культуры инокулировали 1: 500 (объем: объем) в свежий бульон LB и выращивали в течение 2 часов. Затем культуры обрабатывали металлами и периодически определяли количество жизнеспособных организмов.

Температурное напряжение.

Дикого типа или мутантные клетки dps инкубировали в течение ночи при 37 ° C.Затем культуры переносили на водяную баню со встряхиванием при температуре от 45 до 60, 4 или 18 ° C. Периодически определяли количество жизнеспособных клеток. Все анализы были выполнены четыре раза.

Для экспериментов по термоадаптации клетки сначала выращивали, как описано выше. Затем мутантные культуры дикого типа или dps переводили на температуру 53 ° C на 10 мин с последующим изменением температуры на 55 ° C. Периодически определяли количество жизнеспособных клеток. Эксперименты проводились в двух экземплярах.

pH-стресс.

Ночные стационарные культуры клеток дикого типа или dps мутантных клеток инкубировали при 37 ° C с аэрацией в среде, доведенной до pH 2 с помощью 10% HCl или до pH 12 с помощью 5 N NaOH. После сдвига pH (который в эксперименте становится нулевым) периодически определяли количество жизнеспособных клеток. Все анализы стресса pH проводили в двух экземплярах.

РЕЗУЛЬТАТЫ

dps требуется для долгосрочного выживания в стационарной фазе во время соревнований в сокультуре, но не в монокультуре.

Поскольку Dps максимально экспрессируется во время стационарной фазы, мы хотели определить, требуется ли белок для выживания в стационарной фазе. Мутантные клетки дикого типа или dps инокулировали в монокультуре в бульон LB и инкубировали при 37 ° C (фиг.). Количество жизнеспособных клеток как дикого типа, так и мутантных клеток сравнимо в течение 10 дней инкубации, первоначально достигая ~ 10 9 КОЕ / мл при переходе в стационарную фазу и снижаясь до ~ 10 7 КОЕ / мл после прохождения фазы гибели.Количество жизнеспособных клеток остается на уровне ~ 10 7 КОЕ / мл в течение более 15 дней непрерывной периодической инкубации культур без добавления питательных веществ (данные не показаны).

Модели долгосрочного выживания и конкуренции. (А) Наложение кривых роста клеток, выращенных отдельно в монокультуре. WT, дикий тип. (B) Конкурентный анализ клеток, выращенных в сокультуре. (C) Конкуренция нуль-мутантов dps , содержащих dps -экспрессирующих (pJE106) или контрольных (pBR322) плазмид. Сплошные символы, SF2049 (pJE106-Dps + ), нанесенный только на канамицин (квадраты) или на канамицин и ампициллин (круги).Открытые символы, SF2043 (pBR322-Dps ), нанесенный только на хлорамфеникол (квадраты) или на хлорамфеникол и ампициллин (кружки). Звездочки указывают на отсутствие детектируемых клеток (предел обнаружения <1000 КОЕ / мл). Показаны репрезентативные данные.

Напротив, когда мутантные клетки dps дикого типа и dps совместно культивируют в одной культуре, мутанты dps обнаруживают специфический для стационарной фазы конкурентный дефект (9; R. Yalamanchili и S. E. Finkel, неопубликованные данные). Эта неспособность соревноваться наблюдается в двух типах соревновательных экспериментов.Во-первых, когда в течение ночи культуры стационарной фазы как клеток дикого типа, так и мутантных клеток смешивают в соотношении 1: 1, а затем позволяют продолжить инкубацию в стационарной фазе, мутантная популяция начинает уменьшаться по сравнению с диким типом после 1 дня совпадения (рис. .). Через 3 дня титры мутантов dps составляют <1% от максимальной плотности клеток, а через 7 дней мутанты dps больше не обнаруживаются в культуре; клетки дикого типа поддерживают ~ 10 7 КОЕ / мл. По существу, такие же результаты наблюдаются, когда свежая культура бульона LB инокулируется 1: 1000 равным количеством мутантных клеток дикого типа и dps .Титры обеих субпопуляций первоначально достигают одинаковой плотности ~ 10 9 КОЕ / мл в стационарной фазе, а затем мутантная популяция dps постепенно снижается до тех пор, пока через 7-10 дней клетки не будут обнаружены (данные не показаны).

Специфический для стационарной фазы дефект конкуренции мутантов dps может быть устранен путем экспрессии Dps из плазмиды. При проведении длительных экспериментов по инкубации с использованием монокультуры мутантов dps и , несущих либо Dps-экспрессирующую плазмиду, либо контрольную плазмиду, ни один из штаммов не показывает разницы в выживаемости в стационарной фазе по сравнению с клетками без плазмиды (данные не показаны).Однако, когда мутант dps , несущий плазмиду с геном dps (pJE106), конкурирует в сокультуре со штаммом dps , несущим контрольную плазмиду (pBR322), штамм с контрольным вектором уступает клеткам, экспрессирующим dps (рис.). dps мутантов, несущих контрольную плазмиду, не только не выдерживают конкуренции, но также теряют векторную плазмиду с течением времени (когда эксперименты проводят без выбора лекарственного средства), что позволяет предположить, что экспрессия Dps помогает поддерживать плазмиду (данные не показаны).Эти результаты демонстрируют, что мутанты dps выживают в монокультуре, но не могут конкурировать со штаммами дикого типа в среде с ограниченным питанием.

Различия лаг-фазы между мутантами

dps и клетками дикого типа после инкубации в стационарной фазе.

Известно, что нуклеоидные структуры клеток дикого типа и мутантных клеток dps значительно различаются в стационарной фазе (10). Клетки, экспрессирующие Dps, образуют высокоупорядоченный биокристалл, в то время как нуклеоид у мутантов dps переходит в высокостабильную гелеобразную холестерическую фазу во время длительного культивирования (12, 17).Как сообщалось ранее, при нанесении на свежий питательный агар мутанты dps из 6-дневных культур образуют колонии медленнее, чем клетки дикого типа (12). Это наблюдение привело нас к изучению эффекта Dps во время выхода из долгосрочной стационарной фазы путем определения продолжительности лаг-фазы.

Мутантные клетки дикого типа или dps инокулировали в бульон LB и инкубировали при 37 ° C в течение 10 дней. Каждый день по 10 мкл отбирали из каждой культуры и вносили в свежую среду.Затем определяли время запаздывания и скорость роста экспоненциальной фазы. Мутанты Dps имеют увеличенный лаг-период по сравнению с клетками дикого типа в течение первых 2 дней длительной инкубации в стационарной фазе, что примерно вдвое больше, чем наблюдается для клеток дикого типа (рис., Таблица). Удивительно, но через 3 дня инкубации время задержки на 6-й день было одинаковым. По прошествии этого времени, по мере увеличения возраста инокулята, время задержки dps мутантных культур снова увеличивалось по сравнению с культурами дикого типа до 9-го дня (Таблица ).Хотя продолжительность лаг-фазы различается, как только клетки входят в экспоненциальную фазу, темпы роста и конечная плотность клеток сравнимы с таковыми для клеток дикого типа, и плотности достигают ~ 10 9 КОЕ / мл после инкубации в течение ночи.

Сравнение лаг-фаз для мутантных клеток дикого типа (WT) и dps из однодневных культур стационарной фазы. Показано наложение кривых роста клеток, выращенных отдельно в монокультуре.

ТАБЛИЦА 2.

Время задержки для штаммов дикого типа и dps

Количество дней в стационарной фазе Продолжительность задержки (мин) ± стандартное отклонение
Отношение времени задержки ( dps мутант / дикий тип)
Дикий тип dps
1 83 ± 23 152 ± 30 1.8
2 88 ± 19 175 ± 50 2,0
3 81 ± 31 100 ± 20 1,2
4 105 ± 11 105 ± 11 1
5 98 ± 4 98 ± 4 1
6 100 ± 21 100 ± 21 1
7 90 ± 42 140 ± 55 1.6
8 100 ± 0 110 ± 14 1,1
9 125 ± 45 125 ± 45 1
10 95 ± 6 95 ± 6 1

dps мутанты чувствительны к окислительному стрессу в стационарной фазе.

Большинство исследований чувствительности к окислительному стрессу мутантов dps было сосредоточено на клетках с экспоненциальной фазой.Здесь мы исследуем стационарные культуры. Ночные культуры клеток дикого типа или мутантных клеток dps обрабатывали перекисью водорода и определяли характер выживаемости. В отличие от клеток с экспоненциальной фазой, которые уничтожаются H 2 O 2 при концентрациях выше 50 мМ, стационарные клетки дикого типа и мутантные клетки dps устойчивы к пероксиду водорода более 3 часов при концентрациях до 200 мМ. Выше этих концентраций мутанты dps начинают проявлять повышенную чувствительность к перекиси водорода. dps Мутанты , обработанные 400 мМ H 2 O 2 , теряют жизнеспособность через 30 минут обработки, тогда как клетки дикого типа сохраняют жизнеспособность на уровне ~ 10 6 КОЕ / мл в течение ~ 90 минут (рис.).

Стресс перекиси водорода. Ночные культуры клеток дикого типа (WT; квадраты) или dps (кружки) обрабатывали 400 мМ H 2 O 2 . Сплошные символы, необработанные клетки; открытые символы, клетки, обработанные перекисью. Звездочки указывают на отсутствие детектируемых клеток (предел обнаружения <1000 КОЕ / мл).Показаны репрезентативные данные.

dps мутанты чувствительны к УФ-облучению.

Стационарные культуры клеток дикого типа или мутантных клеток dps подвергали УФ-облучению и определяли характер выживаемости. dps Мутанты более чувствительны к УФ-свету, чем клетки дикого типа (рис.). После 30 секунд воздействия погибает более 99% клеток dps по сравнению с 90% клеток дикого типа. После 60 с воздействия жизнеспособность мутантных клеток еще больше снижается по сравнению с жизнеспособностью клеток дикого типа.Через 3 мин количество клеток дикого типа составляет ~ 10 6 КОЕ / мл, в то время как мутанты dp s не обнаруживаются.

УФ-стресс. Ночные культуры клеток дикого типа (WT) или dps подвергали воздействию УФ-излучения. Звездочки указывают на отсутствие детектируемых клеток (предел обнаружения <1000 КОЕ / мл). Показаны репрезентативные данные.

dps мутанты чувствительны к гамма-облучению.

Стационарные культуры мутантных клеток или клеток дикого типа dps подвергали воздействию гамма-излучения.Смертельная доза облучения для E. coli во время экспоненциальной фазы составляет примерно от 30 до 70 Гр (10). Во время стационарной фазы клетки дикого типа полностью теряют жизнеспособность выше ∼700–1000 Гр. dps Мутанты более чувствительны к гамма-облучению на всех уровнях воздействия, постоянно демонстрируя в 10 раз меньшую выживаемость при облучении 300 Гр и выше (рис.).

Гамма-радиационный стресс. Ночные культуры клеток дикого типа (WT) или dps подвергали гамма-облучению.Показаны репрезентативные данные.

dps мутанты показывают дифференциальную чувствительность к определенным металлам во время стационарной фазы и экспоненциальной фазы.

Стационарные культуры клеток дикого типа и dps мутантных клеток обрабатывали различными металлами. Обработка кадмием, хромом, свинцом, ртутью, марганцем, никелем, селеном и оловом не выявляет специфического для Dps эффекта; клетки дикого типа и мутантные клетки dps демонстрируют сходную чувствительность (данные не показаны). Значительный Dps-специфический эффект наблюдается при обработке железом или медью во время стационарной фазы.После 45 мин обработки 100 мМ железа плотность клеток дикого типа составляет 10 7 КОЕ / мл, в то время как титры мутантов снижаются до ~ 10 3 КОЕ / мл (рис.). После 80 мин обработки dps мутантов не обнаруживаются; клеткам дикого типа требуется в два раза больше времени, чтобы полностью потерять жизнеспособность. Эффект, специфичный для Dps, также наблюдался в логарифмической фазе. Во время ранней логарифмической фазы мутантные клетки dps более чувствительны, чем клетки дикого типа, при обработке 5-10 мМ Fe 2+ (рис.).

Напряжение металла во время стационарной фазы и каротажной фазы. Клетки дикого типа (WT; квадраты) или dps (кружки) клетки обрабатывали либо железом (A и B), либо медью (C и D) во время стационарной фазы (A и C) или логарифмической фазы (B и D). Открытые символы, обработка металла; закрашенные символы, элементы управления без обработки. Звездочки указывают на отсутствие детектируемых клеток (предел обнаружения <1000 КОЕ / мл). Показаны репрезентативные данные.

При обработке 50 мМ меди культуры в стационарной фазе мутантов dps полностью теряют жизнеспособность через 30 мин воздействия, тогда как клеткам дикого типа требуется около 90 мин для потери жизнеспособности (рис.). Однако, в отличие от того, что было обнаружено для обработки железом, мутанты dps не обнаруживают значительного увеличения чувствительности к меди во время экспоненциально-фазового роста (рис.).

Обработка цинком показывает специфический эффект dps только во время перехода от поздней экспоненциальной фазы к стационарной фазе. При обработке 100 мМ цинка титры мутантных клеток снижаются более чем в 100 раз (с 10 6 до 10 4 КОЕ / мл), тогда как титры дикого типа снижаются только в 10 раз (с 10 7 до 10 6 КОЕ / мл).Эта специфическая для Dps разница в выживаемости не наблюдается в культурах в ранней экспоненциальной фазе или в стационарной фазе (данные не показаны).

dps мутанты чувствительны к тепловому стрессу и не проявляют температурно-зависимую тепловую адаптацию.

Ночные стационарные культуры клеток дикого типа или dps мутантных клеток переводили на температуру инкубации от 45 до 60 ° C, после чего жизнеспособность клеток определяли каждые 5 минут в течение 1 часа. При 45 ° C не наблюдали разницы в жизнеспособности между клетками дикого типа и мутантными клетками dps.При 50 и 53 ° C жизнеспособность клеток дикого типа в 10 раз выше, чем у мутантов после 90 мин воздействия. Через 15 мин при 55 ° C наблюдается 100-кратная разница в выживаемости между клетками дикого типа и dps мутантами; титры мутантов падают до 10 7 КОЕ / мл, тогда как титры дикого типа остаются на уровне 10 9 КОЕ / мл (рис.). Еще через 15 минут титры dps клеток уменьшаются до 10 5 КОЕ / мл, а через 45 минут титры не определяются; клетки дикого типа выживают около 60 мин.Через 5 мин при 58 ° C клетки дикого типа показывают титры 10 4 КОЕ / мл, тогда как мутанты dps являются неактивными (данные не показаны).

Температурное напряжение. Ночные культуры клеток дикого типа (WT) или dps инкубировали при 55 ° C. Звездочки указывают на отсутствие детектируемых клеток (предел обнаружения <1000 КОЕ / мл). Показаны репрезентативные данные.

Учитывая повышенную чувствительность мутантов dps к тепловому стрессу, мы определили, играет ли Dps роль в тепловой адаптации.Термическая адаптация — это явление, при котором клетки, которые изначально подвергаются повышенной сублетальной температуре, становятся устойчивыми к более высоким температурам, которые обычно являются летальными (16, 23, 24). Чтобы наблюдать Dps-специфические эффекты на тепловую адаптацию, клетки стационарной фазы как мутантных, так и штаммов дикого типа предварительно обрабатывали при 53 ° C в течение 10 минут с последующей инкубацией при 55 ° C. dps Титры мутантных клеток упали до 10 6 КОЕ / мл в течение 15 минут при 55 ° C, тогда как клетки дикого типа, по-видимому, претерпели тепловую адаптацию, оставаясь на уровне 10 9 КОЕ / мл.Титры клеток дикого типа остаются высокими в течение 30 мин (данные не показаны).

Подобные эксперименты по выживанию были проведены для холодового шока. Культуры стационарной фазы как дикого типа, так и мутантных клеток dps были переведены на 4 или 18 ° C. Не наблюдалось различий в жизнеспособности клеток между штаммами дикого типа и мутантными штаммами после 2 ч инкубации при любой температуре или после 10 дней инкубации при 4 ° C (данные не показаны).

dps мутанты чувствительны к щелочному и кислому pH.

pH культур стационарной фазы дикого типа или dps мутантных клеток изменяли в диапазоне от 2 до 12 добавлением HCl или NaOH, соответственно. В условиях кислотного стресса мутанты dps демонстрируют в 100 раз большую чувствительность через 30 минут при pH 2 и 10 4 — в раз большую чувствительность после 60 минут воздействия, когда мутанты становятся необнаруживаемыми (рис.). . Клеткам дикого типа требуется в два раза больше времени, чтобы полностью потерять жизнеспособность.

pH-стресс.Ночные культуры клеток дикого типа (сплошные символы) или dps (светлые символы) инкубировали при pH 7 (квадраты), 2 (кружки) или 12 (треугольники). Звездочки указывают на отсутствие детектируемых клеток (предел обнаружения <1000 КОЕ / мл). Показаны репрезентативные данные.

В щелочных условиях (pH 12) dps мутанты мгновенно теряют жизнеспособность при добавлении NaOH (рис.). Хотя клетки дикого типа показывают немедленное 100-кратное снижение клеточного титра, этим клеткам требуется 30 минут, чтобы полностью потерять жизнеспособность.

ОБСУЖДЕНИЕ

Мы идентифицировали гомологи Dps у более чем 130 видов бактерий и одного члена архей, представляющих широкий спектр прокариотических организмов (S. Nair и S. E. Finkel, неопубликованные данные). Повсеместность среди видов, высокая численность, ДНК-связывающая активность и защитные функции Dps привели нас к изучению роли этого белка в долгосрочном выживании в стационарной фазе. Это исследование показывает, что клетки, экспрессирующие Dps, способны выдерживать многие стрессы окружающей среды в большей степени, чем мутанты dps .Существует ряд механизмов, с помощью которых Dps может защищать клетки от этих стрессов, основанных на четырех внутренних свойствах белка: связывании ДНК, связывании и секвестрации металлов, активности ферроксидазы и способности влиять на регуляцию генов. Каждый из них обсуждается ниже.

Мономеры Dps собираются в додекамерную функциональную единицу, и эти додекамеры упаковывают (как апельсины, сложенные в ящик) с ДНК в трехмерную гексагональную структуру (10, 11, 16, 24). В биокристалле положительно заряженный остов ДНК, скорее всего, взаимодействует с Dps через основные остатки на поверхности додекамеров (13).Во время стационарной фазы Dps конденсирует хромосому, так что большинство других макромолекул исключаются. Путем прямого связывания хромосомы Dps может защищать ДНК от повреждений, вызванных пероксидами и другими агентами. Эта модель подтверждается исследованиями, показывающими, что Dps защищает плазмидную ДНК от атаки пероксида и ДНКазы I (12). Защита от гамма-излучения, обеспечиваемая ДНК с помощью HU, другого бактериального гистоноподобного белка, аналогична защите с помощью Dps, показанной здесь (6). Мутанты HU в пять раз более чувствительны к гамма-излучению, чем клетки дикого типа.Мы предполагаем, что Dps защищает ДНК от УФ- и гамма-излучения по механизму, аналогичному HU: предотвращение одно- и двухцепочечных разрывов, связанных с облучением. Он также может служить конкурентным субстратом для окислительных радикалов, генерируемых различными растворителями, металлами и излучением.

Также возможно, что Dps увеличивает эффективность и точность процесса репарации за счет привлечения ферментов репарации или других белков к хромосоме. Например, Dps может модулировать взаимодействия с белками, участвующими в поддержании сверхспирального состояния ДНК.Поскольку, как показано здесь, мутанты dps чувствительны к температуре, образуя связанный с ДНК биокристалл, Dps может предотвращать релаксацию ДНК во время теплового шока (1). Это может быть похоже на наблюдаемые взаимодействия между DnaK и ДНК-гиразой. Во время теплового шока шаперон DnaK связывается с хромосомой, способствуя активности ДНК-гиразы (20). Было бы интересно определить, взаимодействует ли Dps аналогичным образом с какими-либо такими белками.

Мы также можем видеть сходство между активностью Dps и белков SASP (малых растворимых в кислоте) спор Bacillus subtilis (25).Белки SASP неспецифически связываются с ДНК и изменяют ее конформацию с формы B на форму A. Во время УФ-облучения белки SASP предотвращают образование фотопродуктов бипиримидина, таких как фотодимер Т-Т. Вместо этого образуются фотопродукты, называемые повреждениями SP, которые восстанавливаются с помощью специфической для спор системы репарации (22). Белки SASP также изменяют химическую реактивность ДНК во время теплового стресса, замедляя скорость депуринизации. Dps, образуя биокристалл, может аналогичным образом изменять реактивность ДНК, так что она становится менее чувствительной к тепловому стрессу и УФ-облучению.Будет полезно определить конформацию ДНК, связанной с Dps, и сравнить относительное количество сайтов депуринизации после теплового стресса у штаммов дикого типа и dps нулевых штаммов.

Dps является структурным гомологом ферритина, основного белка-хранилища железа практически всех организмов (13, 14). Функционально ферритины определяются способностью связывать железо и наличием ферроксидазной активности. Фундаментальное различие между Dps и ферритинами заключается в том, что Dps связывает ДНК.Мономеры Dps и ферритина имеют одинаковую третичную структуру из четырех спиралей и пучков и образуют мультибелковые сферы с полыми ядрами, функционирующие как 12-меры и 24-меры, соответственно. В обеих мультимерных сферах три субъединицы мономера образуют тримеры (четыре в Dps и восемь для ферритинов) с порами диаметром ∼20 Å. Эти поры выстланы кислотными остатками, которые могут принимать положительно заряженные ионы, такие как железо (13). Гомологи Dps у других организмов, таких как Dps из Listeria innocua (7) и DpsA из Halobacterium salinarium (22), также оказались ферритинами.DpsA из Synechococcus представляет собой бактериоферритин, так как он содержит гемовый фрагмент (21). Недавно было показано, что Dps действует как запасной белок железа, участвуя в его связывании, окислении и минерализации (15). Каждый додекамер может вместить около 500 атомов железа. Хелатирование металлов защищает организмы от нападения различных химически активных металлов, включая Fe (II), который участвует в реакции Фентона: Fe 2+ + H 2 O 2 → Fe 3+ + OH + ОЙ.Эта реакция дает гидроксильные радикалы, которые могут повредить макромолекулы, включая белки, мембранные липиды и ДНК. В ферритинах Fe (II) окисляется в центре ферроксидазы, выпадает в осадок в виде нерастворимого оксигидроксида железа, Fe (III), и сохраняется в полой сердцевине белка. Следующая реакция суммирует реакции, которые происходят во время окисления и минерализации железа, когда окислителем является кислород (14): 4Fe 2+ + O 2 + 6H 2 O → 4FeOOH + 8H + .Напротив, окисление железа Dps происходит медленно, когда окислителем является O 2 . Однако в присутствии перекиси водорода окисление и минерализация железа происходят быстро (29). Скорость окисления более чем в 100 раз выше в присутствии H 2 O 2 , чем O 2 . Это различие может быть связано с разными аминокислотами, образующими активный центр ферроксидазы, по сравнению с аминокислотами для ферритинов (13, 15). Dps не имеет консервативных остатков, связанных с ферроксидазным центром семейства ферритина.Ферроксидаза Dps потребляет H 2 O 2 двумя способами, как для окисления, так и для минерализации (29), что суммируется реакцией 2Fe 2+ + H 2 O 2 + 2H 2 O → 2FeOOH + 4H + . В этой реакции Fe (II) окисляется до Fe (III) с помощью H 2 O 2 , и окисленный Fe (III) минерализуется в ядре в виде нерастворимого оксогидроксида железа (III) в ядре додекамера (29). . Одна молекула H 2 O 2 расходуется на каждые две окисленные молекулы Fe (II).

Таким образом, окисляя и минерализуя железо, Dps служит двум целям: (i) оба процесса приводят к гашению H 2 O 2 и предотвращают его взаимодействие с двухвалентным железом в реакции Фентона и (ii) через минерализацию, Fe (III) хранится в ядре Dps. Захваченное железо изолируется из цитозоля, восстановительной среды, которая может преобразовать его обратно в реактивное Fe 2+ . Это предотвращает его взаимодействие с H 2 O 2 , образующимся во время различных метаболических процессов.Также было показано, что Dps обладает слабой каталазной активностью, дополнительно нейтрализуя перекись водорода (29). Это приводит к превращению двух потенциально вредных реагентов в безвредные продукты.

Dps, как известно, влияет на экспрессию генов как положительно, так и отрицательно. При проведении двумерного гель-электрофореза клеточных экстрактов, полученных из клеток дикого типа и мутантных клеток dps , наблюдаются различия в структуре белковых пятен (2). Некоторые пятна присутствуют в клетках дикого типа, но не в мутанте, и наоборот.Во время длительной инкубации в стационарной фазе (до 10 дней) наблюдалась дифференциальная экспрессия белка (S. E. Finkel и R. Kolter, неопубликованные результаты). У эукариот гистоны подвергаются обратимым ковалентным модификациям, чтобы сделать ДНК доступной или недоступной для транскрипционного аппарата, тем самым регулируя экспрессию генов (4). Будет интересно определить, играет ли Dps аналогичную роль в дифференциальной экспрессии генов, подвергаясь ковалентным модификациям. Dps может регулировать экспрессию генов как за счет модуляции структуры ДНК, так и за счет взаимодействия с аппаратом транскрипции, возможно рекрутируя факторы транскрипции.Также представляет интерес сравнение паттернов экспрессии генов в различных стрессовых условиях, таких как описанные здесь.

Присутствие гомологов Dps в большом количестве организмов, хотя и с функциональной дивергенцией, предполагает их важность для выживания при стрессе во многих средах. У большинства организмов это, вероятно, ДНК-связывающий белок, защищающий организм от различных стрессов. Однако у некоторых патогенных организмов, таких как Treponema pallidum и Haemophilus ducreyi , это основной детерминант вирулентности, необходимый для патогенности (5, 8, 11).Исследования бактерий стационарной фазы могут служить лучшим приближением к естественной среде обитания этих организмов, и такие исследования помогут нам лучше понять бесчисленное множество ролей этого очень распространенного белка.

Янтарь наносит больше урона в секунду, если вы нажимаете, чем удерживаете, чтобы стрелять. Это может быть полезно против неподвижных целей, врагов рядом с вами или врагов, преследующих вас. : BrawlStarsCompetitive

отредактируйте, чтобы улучшить TLDR

TLDR: Ошибки в игре приводят к тому, что Эмбер не достигает своего полного DPS постоянно, 6/10 тестов с новыми игровыми экземплярами показывают дольше, чем ожидалось 4 секунды до каждый раз выгружать все боеприпасы из оружия.

1. 3/10 испытаний показали 4,97 с для разгрузки всех боеприпасов, снижение урона на ~ 20%, увеличение продолжительности на ~ 25% уменьшение dps, увеличение длительности ~ 42%;

базовый урон составляет 3360 на 4 с для Янтаря уровня 9/10, а Сценарий 2 просто показывает возврат к базовому уровню 3360 дпс (10 снарядов в секунду x 336 урона).


Я не могу воспроизвести это. Все мои нажатия = потеря дпс даже с техникой двух касаний по экрану, и у меня есть некоторые сомнения относительно того, что происходит, поэтому я посмотрел некоторые цифры:

К сожалению, но нет никакого увеличения ДПС. сортировка, быстрый просмотр числа в вики показывает, что урона янтаря уровня 9/10 в секунду составляет 3360 (я должен добавить, что они соответствуют внутриигровому тексту, уровень 1 = 2400 дпс)

У вас есть ДПС уменьшение вашего Первого Сценария

Что-то мешает вашему Первому Сценарию?

Можете ли вы повторить тесты DPS на этот раз с Эмбер, сидящей наверху робота, и получить хороший урон в секунду после калибровки?

https: // brawlstars.fandom.com/wiki/Amber

Уровень 1 Янтарь с помощью «Попробуйте» делает 2400 дпс — протестировал и записал видео, чтобы показать это; Робот HP от 80 560 до 70 960; 9600 урона (от 0,244 до 4,243 с; ~ 3,999 с для разгрузки, 2400 дпс)

Я смог показать 2400 дпс (240 на снаряд) точно так, как указано в вики, поместив янтарь 1 уровня наверх Робот.

2-е тестовое видео показывает, что мое собственное испытание на разгрузку начинается с 10,575 до 14,648 (4,073 с) — обратите внимание на стартовое количество HP 100000 = 9600 = 240 на снаряд = 2400 дпс = 4 с разгрузки; edit отметил небольшую паузу в потоке урона, но все еще совпадает со временем разгрузки 4 секунды, как в 1-м видео

Таким образом, мы можем сделать вывод, что Янтарь 9 уровня должен делать базовый уровень 3360 дпс в первую очередь

Можете ли вы повторить видео со своим уровнем 9 янтарь на роботе?


Итак, небольшой анализ видео:

Есть разница в вашей скорости разгрузки, если я смотрю на продолжительность.

Фактическая приостановка видео показывает:

показывает уменьшение времени разгрузки на ~ 30% (и ДПС тоже должно быть на ~ 30% больше), что также подтверждает правильность показаний измерителя dps 2400/3360 = 71%


Если мы посмотрим при HP робота, 4 секунды или ряды выгрузки:

  • Сценарий 1: HP робота от 100000 до 86560 = 13440 урона (выстраивается с разгрузкой на 4 секунды !!! 336 на снаряд, 3360 урона в секунду) — DPS метр показывает, что вы наносите ~ 2362 урона в секунду, и указывает на что-то сомнительное в вашем Первом сценарии

  • Сценарий 2: Здоровье робота увеличено с 73 120 до 59 680 = 13 440 единиц урона (соответствует разгрузке на 4 секунды !!! 336 на снаряд, 3360 урона в секунду)


Что-то мешает вашему первому сценарию? запись видео / оверлей и т. д.?

Также я пробовал много раз, и я не могу по-человечески нажимать на скорость в вашей записи, каждый раз потеря dps, вы используете автокликер?

тайминги выгрузки всех боеприпасов: 13.От 928 до 18,593 = 4,637 с, (9600 / 4,637) ~ 2,070 д / с

некоторые другие испытания, каждый раз новый экземпляр, позиционирование слева от робота, прицеливание вправо, больше нет видеозаписи:

  1. ~ 1930 д / с = ~ 4,97 с (по расчету для разгрузки 9600 dmg)

  2. ~ 2176 dps = ~ 4.41

  3. ~ 2369 dps = ~ 4,05

  4. ~ 2400 dps = ~ 4 с (хотя у этого есть небольшой провал до 2369 dps в конце показывается хотя бы один потерянный кадр или что-то в этом роде)

  5. ~ 1930 dps = ~ 4.97 с

  6. ~ 2034 dps = ~ 4,71 с

  7. ~ 2400 dps = ~ 4 с (это также имеет характерный спад до 2368 и 2369 в конце)

  8. ~ 2340 dps = ~ 4,10 (начало 2400 дпс, опускается позже)

  9. ~ 2400 дпс = ~ 4 с (характерное падение до 2369 в конце)

  10. ~ 1930 дпс = ~ 4,97 с

TLDR глючит в игре

Frontiers | Молекулярные основы выживания в стационарной фазе и приложения

Введение

Большинство микроорганизмов вокруг нас в воздухе, морской воде и почве преимущественно находятся в стационарной фазе (Gefen et al., 2014). Естественная среда обитания микроорганизмов часто содержит ограниченное количество питательных веществ, из-за которых обычно затрудняется быстрый рост. Помимо недостатка питательных веществ, существуют и другие условия, в том числе физические и химические стрессы, которые приводят к несбалансированному росту. Все эти события приводят к множеству изменений на молекулярном уровне. Эти молекулярные изменения сопоставимы с теми, которые наблюдаются во время стационарной фазы бактерий, что подтверждается лабораторными исследованиями. Попадание бактерий в стационарную фазу может быть вызвано различными факторами, включая ограничение определенного необходимого питательного вещества, накопление токсичных побочных продуктов, наличие стрессовых факторов, таких как изменение pH, температуры, осмолярности и т. Д.Когда клетка входит в эту фазу, размер клетки уменьшается, а соотношение ДНК / белок увеличивается при переходе в стационарную фазу (Nystrom, 2004). Стационарной фазе уделялось много внимания из-за характера синтеза белка в этой фазе, а также из-за стратегии выживания, принятой бактериями. Когда растущая клетка входит в стационарную фазу, наблюдаются многочисленные физиологические, морфологические изменения и изменения экспрессии генов. Они обсуждаются в следующих разделах.

Физиология стационарной фазы

В стационарной фазе клетки становятся сферическими и меньше с жесткой клеточной оболочкой, клеточная стенка сильно сшита, текучесть мембран снижается, и клетки активируют строгий механизм ответа, чтобы пережить бедствие. Активация этого механизма позволяет бактериям перепрограммировать паттерн экспрессии генов, чтобы адаптироваться к различным стрессам. Двумя ключевыми компонентами строгого ответа бактерий являются ppGpp и pppGpp (которые описаны в следующем разделе).Как следствие, клетки отвлекают свои ресурсы от роста на синтез аминокислот, чтобы способствовать выживанию до улучшения условий питания.

На рисунке 1 показаны различные изменения, наблюдаемые в ячейке, когда она входит в стационарную фазу. Слой пептидогликана, являющийся стрессовым компонентом клетки, увеличивается в толщине. Он составляет 0,7–0,8% от сухого веса клеток в ячейках с экспоненциальной фазой, тогда как в стационарной фазе он увеличивается до 1,4–1,9% (Mengin-Lecreulx and van Heijenoort, 1985).На субклеточном уровне происходит конденсация нуклеоидов для защиты ДНК, цитоплазма конденсируется с общим снижением синтеза белка в результате стресса или стационарной фазы (Navarro Llorens et al., 2010). На уровне трансляции 70S рибосомы превращаются в неактивные димеры 100S рибосом за счет ассоциации с фактором модуляции рибосом (Wada, 1998). Этот процесс, называемый гибернацией рибосом, считается механизмом для тонкой настройки процесса трансляции в соответствии с условиями окружающей среды (McKay and Portnoy, 2015).Недавно было показано, что фрагментация 16S рРНК на конце спирали 6 ослабляет активность 30S рибосомной субъединицы и тем самым синтез белка (Luidalepp et al., 2016). Кроме того, при ограниченной доступности питательных веществ происходит накопление усеченной мРНК и деацилированной тРНК. Рибосомы застревают на этих мРНК, и из-за отсутствия стоп-кодона рибосома не может высвободиться (Pletnev et al., 2015). Под этими механизмами понимается защитная реакция на голодание.В результате различных морфологических, метаболических, транскрипционных или трансляционных изменений клетки стационарной фазы становятся устойчивыми к высокой температуре, высоким концентрациям H 2 O 2 и очень высокой средней осмолярности.

РИСУНОК 1. Сравнение молекулярных и клеточных изменений в экспоненциальной и стационарной фазах.

Клетки в экспоненциальной, стационарной и длительной стационарной фазах имеют разные судьбы (рис. 2). В результате голодания многие бактерии, включая роды Bacillus и Clostridium , образуют устойчивые споры, помогая им противостоять суровой окружающей среде.Неоптимальные условия роста также приводят к образованию биопленки у многих видов бактерий. Физиологически биопленочные бактерии подобны бактериям стационарной фазы. Одним из ключевых переходов является образование персистеров, индуцированное во время стационарной фазы в биопленках, а также как следствие общей стрессовой реакции. Эти клетки также могут возникать в экспоненциальном росте за счет активации ppGpp как следствие сублетальной концентрации антибиотика. Считается, что образование этих бактериальных персистеров является причиной рецидивов инфекций и основной причиной лекарственной устойчивости (Harms et al., 2016).

РИСУНОК 2. Различные бактериальные адаптации в стационарной и длительной стационарной фазе. Сокращения описаны в тексте.

Во время поздней стационарной фазы, иногда называемой длительной стационарной фазой, происходит несколько замечательных адаптаций. При продолжающемся голодании одна из стратегий выживания включает переход бактерий в жизнеспособное, но некультивируемое состояние (VBNC). В этом состоянии бактерии остаются метаболически активными, но не могут образовывать колонии на бактериологической среде.Несколько бактерий, включая Rhodococcus biphenylivorans (Su et al., 2015), Escherichia coli, Agrobacterium tumefaciens, Helicobacter pylori, Lactococcus lactis , многие Vibrio видов, а Vibrio видов и указывали на вид Pseudomonas Оливер, 2005). Состояние VBNC представляет серьезный риск для здоровья, поскольку спящие виды бактерий могут оставаться незамеченными в условиях культивирования, хотя и могут вызывать инфекции (Navarro Llorens et al., 2010). Утверждается, что к проявлению состояния VBNC приводят разнообразные напряжения (Плетнев и др., 2015). Продолжительное голодание также приводит к фенотипу преимущества роста в стационарной фазе (GASP). Феномен GASP является результатом мутаций в аллеле rpoS (описанном ниже), который дает полезную способность продолжать рост в условиях голодания, заменяя таким образом родительскую популяцию (Navarro Llorens et al., 2010). Эти мутации позволяют мутантам эффективно поглощать питательные вещества, выделяемые мертвыми клетками (Zambrano and Kolter, 1996).Ряд грамположительных бактерий, таких как Listeria monocytogenes (Bruno и Freitag, 2011), Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis и Bacillus globigii (Finkel et al., 1997) и грамотрицательные бактерии, включая Campylobacter. , Geobacter, Vibrio, E. coli, Pseudomonas и др., Как было обнаружено, входят в состояние GASP (Chen and Chen, 2014). Gefen et al. (2014) придумали термин «стационарная фаза постоянной активности» (CASP) для описания феномена постоянной скорости синтеза белка, наблюдаемого у нерастущих бактерий, подвергшихся голоданию более 60 часов.Изучая производство белка на этой стадии, они обнаружили, что как аппарат синтеза белка, включая рибосомы, РНК-полимеразы и т. Д., Так и ресурсы, такие как аминокислоты, нуклеотиды и т. Д., Остаются постоянными в CASP. Наконец, в этом эксперименте наблюдалась постоянная активность промотора до 10 ч голодания. Другим интересным явлением, с которым сталкивается популяция бактерий в стационарной фазе, является «стационарное фазовое контактно-зависимое ингибирование» (SCDI). Это требует физического контакта между эволюционировавшими и исходными бактериями (Lemonnier et al., 2008). В этом процессе было замечено, что эволюционирующие штаммы либо убивали, либо подавляли рост бактерий, от которых они произошли. Ингибирующая способность этих штаммов объясняется мутациями в одном гене, участвующем в пути синтеза гликогена: glgC (кодирующем АДФ-глюкозопирофосфорилазу). Удивительно, но все эволюционирующие штаммы чрезмерно продуцировали гликоген, что казалось необходимым для возникновения SCDI (Navarro Llorens et al., 2010).

Альтернативные сигма-факторы, активные на стационарной фазе

Ключевой регулятор экспрессии гена стационарной фазы у E.coli представляет собой фактор транскрипции S [продукт гена rpoS ( katF )]. Геном E. coli содержит два гена katE и katG , кодирующие каталазы HPII и HP1w1-4x. Экспрессия HPII была наивысшей в стационарной фазе и, как было показано, полностью зависит от продукта гена katF . Последний служит сигма-фактором для РНК-полимеразы и поэтому называется rpoS или σ S или σ 38 или сигма-фактором стационарной фазы или сигма-фактором голодания (Tanaka et al., 1997).

Количество σ S остается относительно низким в фазе роста клеток, но заметно увеличивается, когда клетка испытывает стресс, голодание или входит в стационарную фазу. Роль этого белка заключается в помощи в выживании и повышении устойчивости к стрессовым условиям. Индукция σ S наблюдается в условиях низкого pH, теплового или холодового шока, УФ-индуцированного повреждения ДНК, недостатка питательных веществ, высокой плотности клеток, высокой осмолярности и т. Д. (Hengge, 2011). Гены, зависимые от σ S , были объяснены морфологическими изменениями (Hengge, 2011), индукцией белков голодания (Alexander and St.John, 1994), поглощение железа, метаболизм углеводов, транспорт аминокислот и т. Д. В начале стационарной фазы (Lacour and Landini, 2004).

Сигма-фактор rpoS выборочно используется в стационарной фазе. Главный сигма-фактор rpoD (σ 70 ) ингибируется регулятором сигма D (Rsd). Обоснование селективности in vivo относительно σ S до конца не изучено, но известно, что многие промоторы могут проявлять как опосредованную σ S , так и σ 70 экспрессию in vitro. Хорошо известно, что на σ 70 влияют изменения в области спейсера и консенсусных положениях –10 и –35, но показано, что альтернатива σ S менее подвержена изменениям в этих областях, что делает ее более селективной. in vivo (Hengge, 2011). Другое наблюдение Tanaka et al., 1995 показывает, что область -35 не всегда необходима для экспрессии в стационарной фазе (Tanaka et al., 1995). В этом исследовании было показано, что промотор fic функционирует с промоторными последовательностями ниже –17.Также обнаружено, что промоторы, распознаваемые RpoS, содержат изогнутую область ДНК. Следовательно, отсутствие консенсуса -35 и наличие изогнутой области ДНК придавали зависимость σ S промоторам galP1 и galP2, тогда как присутствие последовательности -35 в том же промоторе изменяло специфичность в сторону σ 70 (Kolb et al. ., 1995). Таким образом, общепринято считать, что промоторы σ S лишены консенсусной последовательности –35. Однако некоторые авторы предложили CTGCAA (Bohannon et al., 1991) или CCGACA (Wise et al., 1996) в качестве консенсусной последовательности –35. Аналогично для –10 Hengge-Aronis (1993) предложил согласованную последовательность TATACT, которая позже была изменена на CTATACT (Espinosa-Urgel et al., 1996). Совсем недавно была предложена длинная консенсусная последовательность KCTAYRCTTAA для области –10, где K может быть T или G, Y может быть T или C, а R может быть A или G (Weber et al., 2005). Не все гены, индуцированные стационарной фазой, зависят от σ S , и из многих генов, которые демонстрируют более высокий уровень экспрессии в стационарной фазе, известно, что только 10% зависят от σ S (Rava et al., 1999). Из генов, индуцированных в стационарной фазе, те, которые демонстрируют независимое поведение от σ S , — это dnaK, groEL, htpG , которые зависят от σ 32 (Kolter et al., 1993).

Сообщалось о нескольких других альтернативных сигма-факторах. В Salmonella typhimurium , σ E было предложено выполнять дополнительную роль в выживании в стационарной фазе. Было показано, что мутанты с дефицитом гена rpoH , кодирующего σ E , подвержены окислительному стрессу (Testerman et al., 2002).

Число сигма-факторов варьируется от 1 до Mycoplasma genitalium (Dorman, 2011) до 6 из Gordonia sp. IITR100 (Jaishankar et al., 2017), 7 в E. coli (Ishihama, 1997), 18 в B. subtilis (Gruber and Gross, 2003), 24 в Pseudomonas aeruginosa (Potvin et al., 2008) и 65 — у Streptomyces coelicolor (Kim et al., 2008). В таблице 1 представлен список различных сигма-факторов у известных видов бактерий и типов сигма-факторов, активируемых в стационарной фазе.

ТАБЛИЦА 1. Список сигма-факторов, активируемых в стационарной фазе у различных бактерий.

Регламент РПОС

RpoS регулируется на посттранскрипционном уровне с помощью вторичной структуры мРНК rpoS, , малых РНК, белков Hfq и HU, протеазы ClpXP и RssB (фактора узнавания RpoS, модулируемого фосфорилированием) (Hengge-Aronis, 2002). МРНК rpoS стимулируется регуляторными факторами, такими как белок Hfq (HF-1) и DsrA (малая регуляторная РНК), и репрессируется H-NS (гистоноподобный белок) и РНК oxyS .5′-UTR мРНК rpoS образует петлю, которая репрессирует ее трансляцию. Эта петля может быть разорвана некодирующими РНК, такими как dsrA, rprA и arcA (Gaida et al., 2013). Другой мРНК, которая положительно регулирует мРНК rpoS , является gcvB (Jin et al., 2009).

Оборот белка RpoS в экспоненциальной фазе очень высок с периодом полураспада 1,4 мин (Lange and Hengge-Aronis, 1994). Белок RpoS стабилен в стационарной фазе.

Уровни RpoS также контролируются рядом других факторов. К ним относятся как положительные регуляторы, такие как ppGpp и полифосфат (полип), так и отрицательные регуляторы, такие как цАМФ и UDP-глюкоза.

Доступность ppGpp зависит от RelA, синтазы ppGpp, связанной с рибосомами. В стационарной фазе, когда незаряженные тРНК накапливаются из-за снижения доступности аминокислот, включается relA и синтезирует ppGpp. Это включает промоторы, участвующие в биосинтезе и захвате аминокислот (Barker et al., 2001). Было показано, что 6S РНК регулирует экспрессию гена relA , что приводит к изменению уровней ppGpp в стационарной фазе (Cavanagh et al., 2010). Гены рРНК отключаются ppGpp. Многие промоторы стационарной фазы (SPP) также регулируются 6S РНК, даже в отсутствие ppGpp.

В B. subtilis было продемонстрировано, что клетки, входящие в стационарную фазу, имеют небольшие пулы GTP и GDP. Возможно, это происходит из-за превращения GTP в (p) ppGpp или из-за отсутствия достаточного количества предшественников, доступных для синтеза нуклеотидов.Лопес и соавторы продемонстрировали, что обработка клеток ловинином, ингибитором GMP-синтазы, может приводить к индукции генов стационарной фазы (Ratnayake-Lecamwasam et al., 2001).

Внутриклеточные уровни некоторых соединений, таких как трегалоза, глицин бетаин, гликоген и полифосфат, высоки в стрессовых условиях. Некоторые из этих соединений модулируют функцию холофермента RpoS. Например, глутамат и трегалоза модулируют связывание холофермента с промоторами. Аналогичным образом измененная селективность промотора наблюдалась у E.coli , когда RpoS связывается с неорганическим полифосфатом. Ингибирование, вызванное PolyP, снимается высокими концентрациями глутамата калия (Shimada et al., 2004). Бактериальный феромон, гомосеринлактон (HSL), небольшая молекула, отвечающая за коммуникацию между бактериями, также влияет на концентрацию σ S в клетке. Мутанты в биосинтетическом пути синтеза HSL теряют способность индуцировать σ S (Zambrano and Kolter, 1996).

Экспрессия генов в стационарной фазе

Когда клетки растут, гены, связанные с метаболизмом, сильно экспрессируются и отключаются, когда клетки входят в стационарную фазу.Стационарная фаза — это период отсутствия роста, однако на этой стадии экспрессируются гены, необходимые для выживания организмов. Около 20% генов E. coli экспрессируются на более высоком уровне в стационарной фазе (Rava et al., 1999). Эти гены напрямую связаны со многими ключевыми событиями, включая репарацию ДНК, выработку гликогена, термотолерантность, осмотолерантность и т. Д. (Bohannon et al., 1991; Ishihama, 1997). Профилирование транскриптома / анализ экспрессии E. coli в стационарной фазе выявил активацию генов, которые участвуют в выживании во время осмотического стресса ( ots, tre, osm ), долгосрочном выживании (e.g., bolA, dps, cbpA и glgS ), периплазматический шок ( rpoE и rseA ), холодовой шок ( гены csp ) и т. д. Другие гены включают регулятор накопления углерода ( csrA ). ), связывающий репрессор trp белок ( wrbA ) и универсальный стрессовый белок ( uspA ) (Chang et al., 2002). Более того, некоторые антибиотики, включая лактоцин B молочнокислых бактерий, альфатоксин видов Aspergillus , производятся в основном в стационарной фазе (Matin, 1992).

Образование клеток-персистеров также приписывают генам, дифференциально экспрессирующимся в стационарной фазе. Эти клетки невосприимчивы к лечению антибиотиками и часто являются основной причиной лекарственной устойчивости. Некоторые полиамины, включая путресцин, спермидин и кадаверин, направляют образование персистеров за счет активации таких генов, как rpoS, rmf, yqjD (Ткаченко и др., 2017). Это наблюдение предполагает, что метаболизм полиаминов участвует в регуляции образования клеток-персистеров.Для определения генов, активируемых в стационарной фазе, микроматрица была сделана в микробактериях Mycobacterium smegmatis , выращенных в условиях истощения глицерина и глюкозы. Были идентифицированы различные подмножества генов, которые преимущественно активируются в стационарной фазе. Категории генов включали те, которые участвуют в метаболизме серы, сигма-факторы, включая sigB, sigE и sigH , деградацию жирных кислот, анаэробное дыхание и т. Д. (Hampshire et al., 2004). Кроме того, ключевой интерес в этом исследовании представляет присутствие оперонов стационарной фазы, включающих многие кластеры генов, которые были значительно активированы в стационарной фазе.При дальнейшем исследовании было обнаружено присутствие других таких оперонов. Оперон pdh из Streptococcus mutans экспрессируется только в стационарной фазе. Было обнаружено, что этот оперон транскрибируется только субпопуляцией бактерий в стационарной фазе и жизненно важен для выживания в течение длительных периодов сахарного голодания. Оперон pdh состоит из четырех генов, которые транскрибируются как оперон: pdhD, pdhA, pdhB, pdhC , которые кодируют компоненты комплекса PDH (пируватдегидрогеназы), т.е.е., пируватдегидрогеназа (две субъединицы, кодируемые pdhA и pdhB ), дигидролипоилтрансацетилаза ( pdhC ) и дигидролипоилдегидрогеназа ( pdhD ). Инактивация первого гена: pdhD привела к нарушению выживаемости как в периодических культурах, так и в биопленках (Busuioc et al., 2010). Аналогичным образом, оперон фагового белка шока ( pspABCE ) E. coli , как сообщается, имеет решающее значение для выживания в длительной стационарной фазе в щелочных условиях.Этот оперон сильно экспрессировался в экстремальных стрессовых условиях и оставался значимым для выживания в условиях ограниченного количества питательных веществ (Weiner and Model, 1994). Категории генов, которые преимущественно активируются в стационарной фазе, показаны на рисунке 3. Исследования показали, что голодные клетки проявляют большую защитную устойчивость к различным стрессам по сравнению с устойчивостью, индуцированной во время стадии роста несмертельным воздействием стрессов (Kolter et al., 1993).

РИСУНОК 3. Категории генов, транскрибируемых в стационарной фазе.

Промоторы стационарной фазы

Гены, экспрессируемые в стационарной фазе, контролируются промоторами, что приводит к индукции стационарной фазы. Включенные промоторы называются SPP. Они распознаются холоферментом РНК-полимеразы, содержащим σ S и поэтому называются RpoS.

Огромная важность SPP была осознана еще в 1980-х годах при исследовании промотора mcbA и промотора bolA P1 E.coli (Коннелл и др., 1987; Альдеа и др., 1989). Промотор mcbA вызывает повышенный уровень инициации транскрипции для Microcin B17, ингибитора репликации ДНК. Слияние промотора mcbA -LacZ показало индукцию транскрипции в условиях азотного, фосфатного и углеродного голодания. Точно так же слияние bolA-lacZ продемонстрировало увеличение экспрессии примерно в 10-20 раз при переходе в стационарную фазу. С тех пор многие SPP были выделены и охарактеризованы как у грамположительных, так и у грамотрицательных бактерий (таблицы 2, 3).В частности, в отношении E. coli и B. subtilis , регуляция гена, специфичная для стационарной фазы, интенсивно изучалась (Hengge, 2011).

ТАБЛИЦА 2. Промоторы стационарной фазы в грамотрицательных бактериях.

ТАБЛИЦА 3. Промоторы стационарной фазы из грамположительных бактерий.

При анализе различных SPP мы обнаружили, что между этим классом промоторов и промоторами σ 70 не так много различий.Последовательность за пределами -10 и -35 областей различает σ 70 — и σ S -зависимые промоторы. На рисунках 4A, B показаны области –10, –35 и спейсер нескольких SPP из грамположительных и грамотрицательных бактерий, а консенсусная последовательность в области –10 показана в виде логотипа, созданного с использованием программного обеспечения WebLogo, доступного в Интернете (Crooks et al. ., 2004).

РИСУНОК 4. Выравнивание последовательностей (A), грамположительных и (B) грамотрицательных промоторов стационарной фазы.–10 и –35 подчеркнуты и показаны красным и зеленым цветом соответственно. Консервированные основания показаны ниже.

Среди SPP существует особый класс промоторов, известный как промоторы коробки передач, который включает mcbAp, bolAp1, ftsQp и многие другие. Этот класс промоторов был изучен на нескольких грамотрицательных бактериях, включая E. coli . Две различные высококонсервативные консенсусные последовательности –10 и –35 были предложены Aldea et al. (1993) для этого класса промоторов: CTGCAA или GTTAAGC в положении –35 и CGGCAAGTA или CGTCC в положении –10.Экспрессия гена, индуцированная промотором редуктора, по-видимому, обратно коррелирует со скоростью роста, и эти промоторы могут зависеть или не зависеть от σ S .

Запасы энергии, потребленные в стационарной фазе, и источник питательных веществ для производства белка

В неблагоприятных условиях роста перепрограммирование клеточного аппарата для поддержания жизнеспособности является естественным процессом адаптации. Резервные полимеры, такие как гликоген и поли-β-гидроксимасляная кислота, которые накапливаются бактериями во время роста, быстро расходуются в условиях углеродного голодания для обеспечения выживания.В случае бактерий, которые не накапливают эти полимеры, клеточная РНК быстро разрушается для выработки энергии (Matin, 1992). Среди РНК преимущественно деградирует рРНК (Deutscher, 2003). Кроме того, 50% рибосом, синтезируемых во время экспоненциального роста, деградируют при переходе в стационарную фазу (Piir et al., 2011). Удивительно то, что в стационарной фазе эти рибосомы довольно стабильны, и поэтому деградация происходит только между стадиями.

Выход продукции белка из систем со стационарной фазой достигает 121% по сравнению с их аналогами в логарифмической фазе (Ou et al., 2004). Это поднимает очень важный вопрос: что делает возможным синтез белка в стационарной фазе?

Балабан и его коллеги разработали микрофлюидное устройство и проследили производство флуоресцентных белков в стационарной фазе. Они обнаружили, что клетки после перехода в стационарную фазу продолжают вырабатывать белки в течение нескольких дней (Gefen et al., 2014). Было высказано предположение, что клетки продолжают производить белки в стационарной фазе, повторно используя аминокислоты из деградированных белков. Более того, было показано, что путь биосинтеза нескольких аминокислот, включая серин, аспартат / аспарагин, глутамин / глутамат и аланин, активен во время стационарной фазы (Shaikh et al., 2010). Кроме того, показано, что каждое состояние, приводящее к голоданию, приводит к индукции определенного набора белков (Kolter et al., 1993).

Разработка систем экспрессии генов с использованием промоторов стационарной фазы

Сильный промотор — ключ к разработке эффективных систем экспрессии генов. Для производства рекомбинантного белка несколько бактериальных хозяев использовались в качестве клеточных фабрик с такими функциями, как простая очистка, улучшенная укладка и секреция белков, высокая продукция мембранных белков и т. Д.(Феррер-Мираллес и Вильяверде, 2013). Чтобы разработать больше таких систем экспрессии у бактерий, необходимо обеспечить правильный выбор промотора, который будет управлять экспрессией генов в нужное время и с максимальным количеством.

Промоторы

можно классифицировать как конститутивные или индуцибельные, ограниченные по стадиям роста, тканеспецифические и т. Д. Индуцибельные промоторы можно далее классифицировать на индуктор-специфические и аутоиндуцибельные промоторы. Конститутивные промоторы не подходят для токсичных белков.Индуктор-специфические промоторы включают стоимость индуктора. Кроме того, некоторые химические индукторы, такие как изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид (IPTG), дороги и токсичны (Cao and Xian, 2011). Кроме того, добавление внешних индукторов часто требует мониторинга роста, который жизненно важен для продуктивности и, следовательно, приводит к затруднениям в ферментации.

Автоиндуцируемые промоторы идеальны для крупномасштабного производства белка, поскольку они индуцируются в поздней логарифмической или стационарной фазе. Такие промоторы индуцируют экспрессию рекомбинантного гена без какого-либо индуктора и, следовательно, являются экономичными.Однако большинство из них обладают низкой активностью (Yu et al., 2015). В B. subtilis Fan и соавторы успешно идентифицировали сильный SPP Pylb с помощью микроматрицы (Yu et al., 2015). Активность β-галактозидазы составляла до 5000 миллерных единиц. Авторы предположили, что такой промотор будет полезен для продукции белка. Система автоиндуцируемой экспрессии гена на основе SPP была сконструирована с использованием промотора cry3Aa. Pcry управляет экспрессией кристаллических белков в B.thuringiensis . Промотор cry3Aa был протестирован на B. subtilis , и у дикого типа уровни LacZ доходили до 1000 миллеровых единиц, а при мутагенезе уровни доходили до 5200 миллерных единиц (Lee et al., 2010). Аналогично, у другой грамположительной бактерии, Gordonia sp. IITR100, был идентифицирован SPP, и активность β-галактозидазы составляла до 600 миллеровских единиц (Singh et al., 2016). Однако активность β-галактозидазы варьируется в зависимости от штамма, числа копий плазмиды, среды для выращивания, температуры и т. Д., поэтому сложно оценить силу промотора только на основе единиц Миллера. В будущем исследование таких промоторов на основе количества транскриптов было бы полезно для сравнения силы.

В Corynebacterium glutamicum было обнаружено, что промотор гена cg3141 , кодирующий флавогемопротеин, проявляет более высокую индуцибельность в стационарной фазе. Затем была подготовлена ​​библиотека синтетических промоторов для изменения спейсерной и фланкирующей областей в промоторе, чтобы получить диапазон силы промотора (Kim et al., 2016). В конце был получен один из синтетических промоторов, который показал в 20 раз более высокую силу по сравнению с исходным промотором cg3141 и продемонстрирован для периодического культивирования глутатион-S-трансферазы в 5-литровом реакторе. В таблице 4 представлен список векторов экспрессии на основе SPP, созданных до настоящего времени. Подобные исследования показывают, что потенциал SPP феноменален. В Streptomyces запатентована система экспрессии рекомбинантного белка высокого уровня (патент США №7,316,914).

ТАБЛИЦА 4. Системы экспрессии генов на основе промотора стационарной фазы, полученные от грамотрицательных и грамположительных бактерий.

Приложения

У

SPP есть огромный потенциал для использования во многих отраслях (Рисунок 5).

РИСУНОК 5. Применение систем экспрессии генов стационарной фазы.

Рекомбинантное производство токсинов, избыточное производство которых пагубно сказывается на росте клеток, требует контролируемых условий для экспрессии.В таких случаях использование SPP является преимуществом, поскольку его избыточное производство не влияет на рост клеток-хозяев. Многие бактерии использовались для демонстрации полезности систем экспрессии, зависимых от плотности клеток, для продукции гетерологичных белков. Метаболическая инженерия бактерий для увеличения производства промышленно важных химикатов проводится уже давно. Промотор fic из E. coli использовали для экспрессии гена phlD с более высоким титром в стационарной фазе без добавления какого-либо индуктора для производства флороглюцина, который используется в фармацевтической промышленности и культуре тканей растений. .После 20 ч культивирования в колбе при встряхивании 9% поступившей глюкозы превратилось во флороглюцин с производительностью 0,014 г / л ч (Cao and Xian, 2011). B. subtilis был сконструирован для сверхпродукции аминопептидазы с использованием мутированной системы P srfA и привел к ферментной активности 87,89 Ед / мл (Guan et al., 2015). Используя B. subtilis , была разработана система на основе промотора cry , в которой целлюлоза и щелочная протеаза продуцировались с более высоким выходом по сравнению с промотором cry3A дикого типа (Lee et al., 2010).

Это хорошо известный факт, что нерастущая фаза молочнокислых бактерий составляет основную долю производства аромата у молочнокислых бактерий (van de Bunt et al., 2014). Следовательно, инженерия бактериальных клеток таким образом, чтобы они экспрессировались на высоком уровне в процессе созревания, с помощью SPP повысила бы их применимость в пищевой промышленности.

В индустрии биоремедиации для удаления загрязняющих веществ обычно используются микроорганизмы.Из-за низкой доступности питательных веществ на загрязненных участках генная инженерия клеток, приводящая к более высокой ферментативной активности при более низких скоростях роста, оказалась высокоэффективной для процесса биоремедиации. При изучении способности двух нерастущих рекомбинантных штаммов E. coli к расщеплению фенола было обнаружено, что система экспрессии гена, управляемая промотором groEL-, вызвала 75% деградацию фенола, в то время как экспрессия, управляемая промотором tac , могла вызывают разложение фенола только на 15% (Матин, 1992).По предположению Tunner et al. (1992), можно использовать индуцированные голоданием промоторы для биодеградации химических отходов, когда ферменты могут вызываться естественным образом бактериями из-за наличия в окружающей среде условий, ограниченных питательными веществами. Это могло бы сэкономить затраты на индукцию, тем самым повысив эффективность процесса.

В очень интересном эксперименте клетки Rhodospirillum rubrum , выращенные фотогетеротрофно, выделяли водород в течение примерно 70 часов после прекращения роста (Melnicki et al., 2008). Точно так же пурпурная несодержащая сера фотосинтезирующая бактерия, Rhodopseudomonas palustris в условиях азотного голодания, вырабатывала газообразный водород в течение более 4000 часов, что открыло путь для создания «искусственных листьев» (Gosse et al., 2010).

Заключение и перспективы на будущее

Выживание в стационарной фазе — это средство бактериальной адаптации, с помощью которого бактерии выживают в условиях стресса или голода. Уродливым аспектом этого является то, что такой механизм приводит к сохранению патогенных бактерий, которые могут вызвать рецидив инфекций.Однако хорошая сторона представлена ​​различными биотехнологическими приложениями, которые появились в последнее время на основе промоторов генов, которые активируются в стационарной фазе. В настоящем обзоре мы обсудили не только изменения на клеточном и молекулярном уровнях в стационарной фазе, но и различные охарактеризованные промоторы, их регуляцию и разработанные системы экспрессии генов. Еще много неизвестного. Например, очень мало известно о белках, которые участвуют в организации хромосом и их взаимодействии с ДНК в стационарной фазе.Такие белки могут играть важную роль в регуляции экспрессии генов в стационарной фазе. Кроме того, до настоящего времени экспериментально охарактеризовано очень мало SPP. Такие промоторы должны быть очень полезны для продукции белка, поскольку фазы роста и продукции белка могут быть разделены. Это проложит путь к созданию улучшенных систем экспрессии генов для производства рекомбинантных белков.

Авторские взносы

JJ и PS написали и отредактировали рукопись.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Авторы выражают благодарность Департаменту биотехнологии правительства Индии за финансовую поддержку.

Список литературы

Альдеа М., Гарридо Т., Эрнандес-Чико К., Висенте М. и Кушнер С. Р. (1989). Индукция промотора, зависящего от фазы роста, запускает транскрипцию bolA, морфогена Escherichia coli . EMBO J. 8, 3923–3931.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Александр, Д.М. и Сент-Джон А.С. (1994). Характеристика индуцируемого углеродным голоданием и индуцируемого стационарной фазой гена slp, кодирующего липопротеин внешней мембраны в Escherichia coli . Мол. Microbiol. 11, 1059–1071. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.1994.tb00383.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Баркер М. М., Гаал Т., Йосайтис К. А. и Гурс Р. Л. (2001). Механизм регуляции инициации транскрипции с помощью ppGpp. I. Влияние ppGpp на инициацию транскрипции in vivo и in vitro . J. Mol. Биол. 305, 673–688. DOI: 10.1006 / jmbi.2000.4327

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Беккер Г. и Хенгге-Аронис Р. (2004). Что делает промотор Escherichia coli σ S зависимым? Роль положений промотора нуклеотидов -13 / -14 и области 2.5 σ S . Мол. Microbiol. 39, 1153–1165. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.2001.02313.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Боханнон, Д.E., Connell, N., Keener, J., Tormo, A., Espinosa-Urgel, M., Zambrano, M. M., et al. (1991). Индуцируемые в стационарной фазе промоторы-редукторы: дифференциальные эффекты мутаций katF и роль сигма 70. J. Bacteriol. 173, 4482–4492. DOI: 10.1128 / jb.173.14.4482-4492.1991

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бруно, Дж. К. мл., И Фрейтаг, Н. Э. (2011). Listeria monocytogenes приспосабливается к долгосрочному выживанию в стационарной фазе без ущерба для вирулентности бактерий. FEMS Microbiol. Lett. 323, 171–179. DOI: 10.1111 / j.1574-6968.2011.02373.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бусуйок М., Буттаро Б. А. и Пиггот П. Дж. (2010). Оперон pdh экспрессируется в субпопуляции бактерий стационарной фазы и важен для выживания голодающих по сахару Streptococcus mutans . J. Bacteriol. 192, 4395–4402. DOI: 10.1128 / JB.00574-10

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кавана, А.Т., Чандрансу, П., Вассарман, К. М. (2010). 6S РНК-регуляция relA изменяет уровни ppGpp в ранней стационарной фазе. Microbiology 156 (Pt 12), 3791–3800. DOI: 10.1099 / mic.0.043992-43990

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чанг Д. Э., Смолли Д. Дж. И Конвей Т. (2002). Профили экспрессии генов переходов роста Escherichia coli : расширенная модель строгого ответа. Мол. Microbiol. 45, 289–306.DOI: 10.1046 / j.1365-2958.2002.03001.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чанг, Ю. Ю., Ван, А. Ю., и Кронан, Дж. Э. мл. (1994). Экспрессия пируватоксидазы Escherichia coli (PoxB) зависит от сигма-фактора, кодируемого геном rpoS (katF) . Мол. Microbiol. 11, 1019–1028. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.1994.tb00380.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Коннелл, Н., Хан, З., Морено, Ф., и Колтер, Р. (1987). Промотор E. coli , индуцированный прекращением роста. Мол. Microbiol. 1, 195–201. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.1987.tb00512.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кроксатто А., Прайд Дж., Хардман А., Уильямс П., Камара М. и Милтон Д. Л. (2004). Отличительная двухканальная система определения кворума работает в Vibrio anguillarum . Мол. Microbiol. 52, 1677–1689.DOI: 10.1111 / j.1365-2958.2004.04083.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Денкин, С. М., и Нельсон, Д. Р. (2004). Регуляция экспрессии металлопротеиназы Vibrio anguillarum empA и ее роль в вирулентности. Заявл. Environ. Microbiol. 70, 4193–4204. DOI: 10.1128 / AEM.70.7.4193-4204.2004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дерш П., Шмидт К. и Бремер Э. (1993). Синтез H-NS нуклеоид-ассоциированного ДНК-связывающего белка Escherichia coli K-12 подвергается контролю фазы роста и ауторегуляции. Мол. Microbiol. 8, 875–889. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.1993.tb01634.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дорман, К. Дж. (2011). Регуляция транскрипции суперспирализацией ДНК в Mycoplasma genitalium : глобальный контроль в наименьшем известном самовоспроизводящемся геноме. Мол. Microbiol. 81, 302–304. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.2011.07718.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эспиноза-Ургель, М., Чамизо, К., и Тормо, А. (1996). Консенсусная структура для сигма-S-зависимых промоторов. Мол. Microbiol. 21, 657–659. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.1996.tb02573.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Феррер-Мираллес, Н., Вильяверде, А. (2013). Фабрики бактериальных клеток для производства рекомбинантного белка; расширение каталога. Microb. Cell Fact. 12: 113. DOI: 10.1186 / 1475-2859-12-113

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Финкель, С.Э., Зинсер Э., Гупта С. и Колтер Р. (1997). «Жизнь и смерть в стационарной фазе», в «Молекулярной микробиологии» . Серия НАТО ASI (Серия H: Клеточная биология) , Vol. 103, ред. С. Дж. У. Басби, К. М. Томас и Н. Л. Браун (Берлин: Springer).

Google Scholar

Гайда, С. М., Аль-Хинаи, М. А., Индурти, Д. К., Николау, С. А., и Папуцакис, Э. Т. (2013). Синтетическая толерантность: три некодирующие малые РНК, DsrA, ArcZ и RprA, действуют супрааддитивно против кислотного стресса. Nucleic Acids Res. 41, 8726–8737. DOI: 10.1093 / nar / gkt651

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гефен О., Фридман О., Ронин И., Балабан Н. К. (2014). Прямое наблюдение за бактериями, находящимися в одной стационарной фазе, показывает удивительно долгий период постоянной активности по производству белка. Proc. Natl. Акад. Sci. США 111, 556–561. DOI: 10.1073 / pnas.1314114111

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Госсе, Дж.Л., Энгель, Б. Дж., Хуэй, Дж. К. Х., Харвуд, С. С. и Фликингер, М. С. (2010). Прогресс на пути к биомиметическому листу: 4000 часов производства водорода за счет стабилизированного покрытия непрорастающим фотосинтетическим материалом Rhodopseudomonas palustris . Biotechnol. Прог. 26, 907–918. DOI: 10.1002 / btpr.406

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Грубер Т. М. и Гросс К. А. (2003). Множественные сигма-субъединицы и разделение бактериального транскрипционного пространства. Annu. Rev. Microbiol. 57, 441–466. DOI: 10.1146 / annurev.micro.57.030502.0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Guan, C., Cui, W., Cheng, J., Zhou, L., Guo, J., Hu, X., et al. (2015). Конструирование и развитие системы экспрессии ауторегуляторных генов в Bacillus subtilis . Microb. Cell Fact. 14, 150. DOI: 10.1186 / s12934-015-0341-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гуань, К., Цуй, В., Ченг, Дж., Чжоу, Л., Лю, З., и Чжоу, З. (2016). Разработка эффективной аутоиндуцируемой системы экспрессии с помощью промоторной инженерии в Bacillus subtilis . Microb. Cell Fact. 15, 66. DOI: 10.1186 / s12934-016-0464-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Haldenwang, W. G. (1995). Сигма-факторы Bacillus subtilis . Microbiol. Ред. 59, 1–30.

Google Scholar

Хэмпшир, Т., Soneji, S., Bacon, J., James, B.W., Hinds, J., Laing, K., et al. (2004). Стационарная фаза экспрессии гена Mycobacterium tuberculosis после прогрессирующего истощения питательных веществ: модель устойчивых организмов? Туберкулез 84, 228–238. DOI: 10.1016 / j.tube.2003.12.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хенгге-Аронис Р. (1993). Выживание после голода и стресса: роль rpoS в регуляции гена ранней стационарной фазы у E.coli . Cell 72, 165–168. DOI: 10.1016 / 0092-8674 (93) -A

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хенгге-Аронис Р. (2002). Сигнальная трансдукция и регуляторные механизмы, участвующие в контроле сигма (S) (RpoS) субъединицы РНК-полимеразы. Microbiol. Мол. Биол. Ред. 66, 373–395. DOI: 10.1128 / MMBR.66.3.373-395.2002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Исихама, А. (1997). Адаптация экспрессии генов у бактерий стационарной фазы. Curr. Opin. Genet. Dev. 7, 582–588. DOI: 10.1016 / S0959-437X (97) 80003-2

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джайшанкар, Дж., Сингх, П., и Шривастава, П. (2017). Проект последовательности генома биодесульфурирующей бактерии, Gordonia sp. штамм IITR100. Genome Announc. 5: e00230-17. DOI: 10.1128 / genomeA.00230-17

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джин Ю., Ватт Р. М., Данчин А. и Хуанг Дж.Д. (2009). Малая некодирующая РНК GcvB представляет собой новый регулятор кислотной устойчивости Escherichia coli . BMC Genomics 10: 165. DOI: 10.1186 / 1471-2164-10-165

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ким, Э. С., Сонг, Дж. Й., Ким, Д. В., Чейтер, К. Ф., и Ли, К. Дж. (2008). Возможное расширенное семейство регуляторов активности сигма-фактора у Streptomyces coelicolor . J. Bacteriol. 190, 7559–7566. DOI: 10.1128 / JB.00470-08

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ким, М. Дж., Йим, С. С., Чой, Дж. У. и Чон, К. Дж. (2016). Разработка потенциальной системы экспрессии гена, специфичной для стационарной фазы, путем конструирования SigB-зависимого промотора cg3141 в Corynebacterium glutamicum . Заявл. Microbiol. Biotechnol. 100, 4473–4483. DOI: 10.1007 / s00253-016-7297-y

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кольб, А., Котларц, Д., Кусано, С., и Исихама, А. (1995). Селективность РНК-полимеразы E sigma 38 Escherichia coli в отношении перекрывающихся промоторов и способности поддерживать активацию CRP. Nucleic Acids Res. 23, 819–826. DOI: 10.1093 / nar / 23.5.819

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Колтер Р., Зигеле Д. А. и Тормо А. (1993). Стационарная фаза жизненного цикла бактерий. Annu. Rev. Microbiol. 47, 855–874. DOI: 10.1146 / annurev.mi.47.100193.004231

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лакур, С., и Ландини, П. (2004). Экспрессия SigmaS-зависимых генов в начале стационарной фазы в Escherichia coli : функция sigmaS-зависимых генов и идентификация их промоторных последовательностей. J. Bacteriol. 186, 7186–7195. DOI: 10.1128 / JB.186.21.7186-7195.2004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ланге, Р., Барт, М.и Хенгге-Аронис Р. (1993). Комплексный контроль транскрипции сигма s-зависимого гена, индуцированного стационарной фазой и осмотически регулируемого гена osmY (csi-5), предполагает новые роли Lrp, комплекса белок-цАМФ рецептора циклического АМФ (цАМФ) и интеграционного фактора хозяина в стационарной фазе. ответ Escherichia coli . J. Bacteriol. 175, 7910–7917. DOI: 10.1128 / jb.175.24.7910-7917.1993

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ланге, Р.и Хенгге-Аронис Р. (1994). Ген nlpD расположен в опероне с rpoS на хромосоме Escherichia coli и кодирует новый липопротеин с потенциальной функцией в формировании клеточной стенки. Мол. Microbiol. 13, 733–743. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.1994.tb00466.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, С. Дж., Пан, Дж. Г., Парк, С. Х., и Чой, С. К. (2010). Разработка аутоиндуцируемой системы экспрессии, специфичной для стационарной фазы, в Bacillus subtilis . J. Biotechnol. 149, 16–20. DOI: 10.1016 / j.jbiotec.2010.06.021

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лемонье, М., Левин, Б. Р., Ромео, Т., Гарнер, К., Бакеро, М. Р., Мерканте, Дж. И др. (2008). Эволюция контактно-зависимого ингибирования в нерастущих популяциях Escherichia coli . Proc. Биол. Sci. 275, 3–10. DOI: 10.1098 / rspb.2007.1234

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Луидалепп, Х., Бергер, С., Джосс, О., Тенсон, Т., и Полачек, Н. (2016). Отключение рибосом фрагментацией 16S рРНК в стационарной фазе Escherichia coli . J. Mol. Биол. 428 (10 баллов B), 2237–2247. DOI: 10.1016 / j.jmb.2016.01.033

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маршалл, К., Лабрусс, В., Креймер, М., Вейхарт, Д., Колб, А., и Хенгге-Аронис, Р. (1998). Молекулярный анализ регуляции csiD, гена, вызываемого углеродным голоданием, в Escherichia coli , который зависит исключительно от сигм и требует активации с помощью цАМФ-CRP. J. Mol. Биол. 276, 339–353. DOI: 10.1006 / jmbi.1997.1533

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Матин А. (1992). Физиология, молекулярная биология и приложения реакции бактериального голодания. Soc. Прил. Бактериол. Symp. Сер. 21, 49С – 57С. DOI: 10.1111 / j.1365-2672.1992.tb03624.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маккей, С. Л., Портной, Д. А. (2015). Гибернация рибосом способствует устойчивости бактерий стационарной фазы к аминогликозидам. Антимикробный. Агенты Chemother. 59, 6992–6999. DOI: 10.1128 / AAC.01532-15

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Melnicki, M., Bianchi, L., Dephilippis, R., and Melis, A. (2008). Производство водорода во время стационарной фазы у пурпурных фотосинтезирующих бактерий. Внутр. J. Hydrogen Energy 33, 6525–6534. DOI: 10.1016 / j.ijhydene.2008.08.041

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Mengin-Lecreulx, D., and van Heijenoort, J.(1985). Влияние условий роста на содержание пептидогликана и цитоплазматические этапы его биосинтеза у Escherichia coli . J. Bacteriol. 163, 208–212.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Наварро Льоренс, Дж. М., Тормо, А., и Мартинес-Гарсия, Э. (2010). Стационарная фаза у грамотрицательных бактерий. FEMS Microbiol. Ред. 34, 476–495. DOI: 10.1111 / j.1574-6976.2010.00213.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нистром, Т.(2004). Физиология стационарной фазы. Annu. Rev. Microbiol. 58, 161–181. DOI: 10.1146 / annurev.micro.58.030603.123818

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Оливер Дж. Д. (2005). Жизнеспособное, но некультивируемое состояние бактерий. J. Microbiol. 43, 93–100.

Google Scholar

Ou, J., Wang, L., Ding, X., Du, J., Zhang, Y., Chen, H., et al. (2004). Избыточное производство белка в стационарной фазе — фундаментальная способность Escherichia coli . Biochem. Биофиз. Res. Commun. 314, 174–180. DOI: 10.1016 / j.bbrc.2003.12.077

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Патек М., Нешвера Дж. (2013). «Промоторы и плазмидные векторы Corynebacterium glutamicum » в Corynebacterium glutamicum. Монографии по микробиологии , Vol. 23, ред. Х. Юкава и М. Инуи (Берлин: Springer), 51–88.

Google Scholar

Пийр, К., Пайер, А., Лийв, А., Тенсон, Т., и Майвали, У. (2011). Деградация рибосом у растущих бактерий. EMBO Rep. 12, 458–462. DOI: 10.1038 / embor.2011.47

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Плетнев П., Остерман И., Сергиев П., Богданов А., Донцова О. (2015). Руководство по выживанию: Escherichia coli в стационарной фазе. Acta Nat. 7, 22–33.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Ци Ю., Кобаяши Ю. и Хьюлетт Ф.М. (1997). Оперон pst Bacillus subtilis имеет промотор, регулируемый фосфатом, и участвует в транспорте фосфата, но не в регуляции фосрегулона. J. Bacteriol. 179, 2534–2539. DOI: 10.1128 / jb.179.8.2534-2539.1997

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ratnayake-Lecamwasam, M., Serror, P., Wong, K. W., and Sonenshein, A. L. (2001). Bacillus subtilis CodY репрессирует гены ранней стационарной фазы, определяя уровни GTP. Genes Dev. 15, 1093–1103. DOI: 10.1101 / gad.874201

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рава П. С., Сомма Л. и Штейнман Х. М. (1999). Идентификация регулятора, который контролирует экспрессию каталазы-пероксидазы в стационарной фазе в Caulobacter crescentus . J. Bacteriol. 181, 6152–6159.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Репойла Ф. и Гутьеррес К. (1991). Осмотическая индукция периплазматической треалазы в Escherichia coli K12: характеристика промотора гена treA. Мол. Microbiol. 5, 747–755. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.1991.tb00745.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Shaikh, A. S., Tang, Y. J., Mukhopadhyay, A., Martin, H. G., Gin, J., Benke, P. I., et al. (2010). Изучение метаболизма стационарной фазы с помощью изотопомерного анализа аминокислот изолированного белка. Biotechnol. Прог. 26, 52–56. DOI: 10.1002 / btpr.325

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шимада, Т., Макиношима, Х., Огава, Ю., Мики, Т., Маэда, М., и Исихама, А. (2004). Классификация и измерение силы промоторов стационарной фазы с использованием недавно разработанного вектора клонирования промоторов. J. Bacteriol. 186, 7112–7122. DOI: 10.1128 / JB.186.21.7112-7122.2004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сингх П., Чачан С., Сингхи Д. и Шривастава П. (2016). Выделение и молекулярная характеристика промотора стационарной фазы, пригодного для экспрессии гена в Gordonia . Ген 591, 153–160. DOI: 10.1016 / j.gene.2016.07.018

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Su, X., Sun, F., Wang, Y., Hashmi, M. Z., Guo, L., Ding, L., et al. (2015). Идентификация, характеристика и молекулярный анализ жизнеспособного, но некультивируемого Rhodococcus biphenylivorans . Sci. Отчет 5: 18590. DOI: 10.1038 / srep18590

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Танака, К., Handel, K., Loewen, P. C., and Takahashi, H. (1997). Идентификация и анализ rpoS -зависимого промотора katE , кодирующего каталазу HPII в Escherichia coli . Biochim. Биофиз. Acta 1352, 161–166. DOI: 10.1016 / S0167-4781 (97) 00044-4

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Танака К., Кусано С., Фудзита Н., Исихама А. и Такахаши Х. (1995). Детерминанты промотора для голофермента РНК-полимеразы Escherichia coli , содержащего сигма 38 (продукт гена rpoS ). Nucleic Acids Res. 23, 827–834. DOI: 10.1093 / nar / 23.5.827

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тестерман, Т. Л., Васкес-Торрес, А., Сюй, Ю., Джонс-Карсон, Дж., Либби, С. Дж., И Фанг, Ф. К. (2002). Альтернативный сигма-фактор sigmaE контролирует антиоксидантную защиту, необходимую для вирулентности Salmonella и выживания в стационарной фазе. Мол. Microbiol. 43, 771–782. DOI: 10.1046 / j.1365-2958.2002.02787.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ткаченко, А.Г., Кашеварова Н. М., Тюленева Е. А., Шумков М. С. (2017). Гены стационарной фазы, активируемые полиаминами, ответственны за образование клеток-персистеров Escherichia coli , устойчивых к нетилмицину. FEMS Microbiol. Lett. 364: fnx084. DOI: 10.1093 / femsle / fnx084

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Трипати, Л., Чжан, Ю., Линь, З. (2014). Бактериальные сигма-факторы как мишени для инженерного или синтетического контроля транскрипции. Фронт. Bioeng. Biotechnol. 2:33. DOI: 10.3389 / fbioe.2014.00033

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Таннер, Дж. Р., Робертсон, К. Р., Шиппа, С., и Матин, А. (1992). Использование голодания по глюкозе для ограничения роста и индукции производства белка в Escherichia coli . Biotechnol. Bioeng. 40, 271–279. DOI: 10.1002 / бит. 260400211

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Утсуми, Р., Кусафука, С., Накаяма, Т., Танака, К., Такаянаги, Ю., Такахаши, Х. и др. (1993). Специфическая для стационарной фазы экспрессия гена fic в Escherichia coli K-12 контролируется продуктом гена rpoS (сигма 38). FEMS Microbiol. Lett. 113, 273–278. DOI: 10.1016 / 0378-1097 (93) -P

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

ван де Бунт, Б., Брон, П. А., Сийтсма, Л., де Вос, В. М., и Хугенгольц, Дж. (2014). Использование нерастущих клеточных суспензий Lactococcus lactis для производства летучих метаболитов, имеющих непосредственное отношение к формированию вкуса во время ферментации молочных продуктов. Microb. Cell Fact. 13: 176. DOI: 10.1186 / s12934-014-0176-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ван, В., Ли, X., Ван, Дж., Сян, С., Фэн, X., и Ян, К. (2013). Разработан сильный промотор для стрептомицетов. Заявл. Environ. Microbiol. 79, 4484–4492. DOI: 10.1128 / AEM.00985-13

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Уотерман, С. Р., Смолл, П. Л. (2003). Идентификация промоторных областей и сигма-зависимой регуляции генов gadA и gadBC, связанных с глутамат-зависимой кислотной устойчивостью у Shigella flexneri . FEMS Microbiol. Lett. 225, 155–160. DOI: 10.1016 / S0378-1097 (03) 00508-1

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Weber, H., Polen, T., Heuveling, J., Wendisch, V.F., and Hengge, R. (2005). Полногеномный анализ общей сети стресс-ответа в Escherichia coli : sigmaS-зависимые гены, промоторы и селективность сигма-фактора. J. Bacteriol. 187, 1591–1603. DOI: 10.1128 / JB.187.5.1591-1603.2005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вайнер, Л., и Модель, П. (1994). Роль оперона стресс-ответа Escherichia coli в выживании в стационарной фазе. Proc. Natl. Акад. Sci. США 91, 2191–2195. DOI: 10.1073 / pnas.91.6.2191

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Уайз А., Бремс Р., Рамакришнан В. и Вилларехо М. (1996). Последовательности в области -35 Escherichia coli rpoS-зависимых генов способствуют транскрипции с помощью E sigma S. J. Bacteriol. 178, 2785–2793.DOI: 10.1128 / jb.178.10.2785-2793.1996

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сюй Дж. И Джонсон Р. К. (1995). aldB, RpoS-зависимый ген в Escherichia coli , кодирующий альдегиддегидрогеназу, которая репрессируется Fis и активируется Crp. J. Bacteriol. 177, 3166–3175. DOI: 10.1128 / jb.177.11.3166-3175.1995

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Yu, X., Xu, J., Liu, X., Chu, X., Ван П., Тиан Дж. И др. (2015). Идентификация высокоэффективного промотора стационарной фазы в Bacillus subtilis . Sci. Отчет 5: 18405. DOI: 10.1038 / srep18405

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Программа обслуживания буксиров | Департамент общественной безопасности Аризоны

Закон Аризоны (ARS 28-3511) Удаление и обездвиживание или арест транспортного средства; База данных информационного центра преступности Аризоны требует буксировки и конфискации транспортных средств за любое из следующих нарушений:

A. Офицер по поддержанию мира должен вызвать удаление и либо обездвиживание, либо арест транспортного средства, если он определит, что:

1. Человек управляет транспортным средством, при этом применяется любое из следующих условий:

a. Если иное не предусмотрено в этом подразделе, водительские права человека аннулируются по любой причине. Офицер охраны порядка не должен вызывать удаление и обездвиживание или арест транспортного средства в соответствии с этим подразделом, если право человека управлять автомобилем действует в этом состоянии.

г. Этому лицу никогда не выдавались действующие водительские права или разрешения, и это лицо не предъявляет доказательств того, что когда-либо имело действующие водительские права или разрешения, выданные другой юрисдикцией. Это подразделение не относится к работе сельскохозяйственных орудий.

г. К этому человеку предъявляются требования к устройству блокировки зажигания в соответствии с главой 4 настоящего раздела, и это лицо управляет транспортным средством без работающего сертифицированного устройства блокировки зажигания.Это подразделение не применяется к эксплуатации транспортного средства из-за существенной аварийной ситуации, как это определено в разделе 28-1464.

г. Содействуя незаконному пребыванию иностранца в Соединенных Штатах и ​​в нарушение уголовного преступления, это лицо перевозит, перемещает или пытается перевезти или перемещать иностранца в этом штате в транспортном средстве, если это лицо знает или по неосторожности игнорирует тот факт, что иностранец прибыл, въехал или остается в Соединенных Штатах с нарушением закона.

эл. Лицо скрывает, укрывает или защищает или пытается скрыть, укрывать или оградить от обнаружения инопланетянина в этом состоянии в транспортном средстве, если это лицо знает или по неосторожности игнорирует тот факт, что инопланетянин прибыл, въехал или остается в Соединенных Штатах. в нарушение закона.

2. Человек управляет транспортным средством в нарушение статьи 28-693, и офицер по охране общественного порядка обоснованно полагает, что разрешение этому человеку продолжать управлять транспортным средством подвергнет других людей риску серьезных телесных повреждений или смерти.

3. Человек управляет транспортным средством в нарушение статьи 28-708, и офицер по охране общественного порядка обоснованно полагает, что разрешение этому человеку продолжать управлять транспортным средством подвергнет других людей риску серьезных телесных повреждений или смерти.

4. Человек блокирует шоссе или другую общественную улицу в нарушение статьи 13-2906, и офицер по охране общественного порядка обоснованно полагает, что разрешение этому человеку продолжать управлять транспортным средством подвергнет других людей риску серьезных телесных повреждений или смерть.

5. Транспортное средство выставлено на продажу или для передачи права собственности с идентификационным номером транспортного средства, который был уничтожен, удален, покрыт, изменен или испорчен.

B. Офицер охраны правопорядка должен вызвать изъятие и конфискацию транспортного средства, если офицер охраны правопорядка определит, что человек управляет транспортным средством, и если применимы все следующие условия:

1. Право на управление автомобилем аннулируется или аннулировано по какой-либо причине, или человеку никогда не выдавались водительские права или разрешение в этом штате, и это лицо не предъявляет доказательств того, что когда-либо имело водительские права или разрешения, выданные другой юрисдикцией.

2. Лицо не соблюдает требования финансовой ответственности главы 9, статьи 4 настоящего заголовка.

3. Человек управляет транспортным средством, которое попало в аварию, повлекшую за собой материальный ущерб, телесные повреждения или смерть другого человека.

C. За исключением случаев, предусмотренных в подразделе D этого раздела, в то время как мирный офицер контролирует транспортное средство, мирный офицер должен вызвать удаление и либо обездвиживание, либо арест транспортного средства, если у миротворца есть вероятная причина для ареста водитель транспортного средства за нарушение раздела 4-244, параграфа 34 или раздела 28-1382 или 28-1383

Если ваш автомобиль буксировался в соответствии с ARS 28-3511, у него есть период удержания.Это означает, что он должен оставаться на аресте в течение периода удержания. Не связывайтесь с буксирной фирмой для получения разрешения на передачу автомобиля. DPS уведомит зарегистрированных владельцев транспортных средств в течение 3 (трех) рабочих дней с момента изъятия с копией отчета об удалении транспортного средства и информацией о расписании слушаний по почтовому хранению. Для получения дополнительной информации о слушании после хранения и освобождении транспортного средства, пожалуйста, позвоните в пункт задержания DPS, который указан в нижней части отчета об удалении транспортного средства в разделе «Информация о задержании / изъятии».

Слушание об аресте

Если офицер полиции снимает и останавливает или конфискует транспортное средство в соответствии с ARS 28-3511, иммобилизирующее или конфисковывающее агентство может предоставить владельцу, супруге владельца или любому другому лицу указание права собственности или другой доли в транспортном средстве, непосредственно перед иммобилизацией или арестом, с возможностью проведения слушания по иммобилизации или пост-хранению. Слушание определит действительность иммобилизации или хранения или рассмотрит любые смягчающие обстоятельства, связанные с иммобилизацией, хранением или освобождением транспортного средства до окончания 30-дневного периода иммобилизации или задержания.

Задержка может быть освобождена от досрочно, если:

— транспортное средство является угнанным

— транспортное средство подлежит залогу и управляется сотрудником коммерческого предприятия, включая службу парковки или ремонтный гараж, который подпадает под действие ARS 28-3511, подраздел A, B или C

— владелец эксплуатировал транспортное средство во время удаления и либо иммобилизации, либо конфискации, и представляет доказательства, удовлетворительные для иммобилизирующего или конфисковывающего агентства, что владелец права на вождение восстановлены

— применяются все следующие условия:

— владелец или агент владельца не был лицом, управляющим транспортным средством в соответствии с ARS 28-3511, подраздел A

— владелец или агент владельца находится в бизнес по аренде автотранспортных средств без водителей

— автомобиль зарегистрирован в соответствии с ARS 28-2166

— на момент иммобилизации действовал договор аренды. билизация или конфискация.Во время или по окончании удержания зарегистрированный владелец должен пройти процедуру обычного освобождения. следующие данные в агентство по аресту или иммобилизации:

— действующие водительские права, выданные этим государством или государством проживания владельца или агента владельца.

— Текущая регистрация транспортного средства или действующее свидетельство о праве собственности на ремонт или демонтаж.

— Доказательство того, что транспортное средство соответствует требованиям финансовой ответственности ARS 28-3514, Глава 9, Статья 4.

Удержания не должны превышать 25,00 долларов в день за хранение транспортного средства в соответствии с ARS 28-3511.

Статуи, относящиеся к трюмам:

— ARS 28-3511: Удаление и обездвиживание или арест транспортного средства; База данных информационного центра преступности Аризоны

— ARS 28-3512: Освобождение автомобиля; гражданские штрафы; определение

— ARS 28-3513: Административные расходы

— ARS 28-3514: Слушания; уведомление об иммобилизации или хранении; определение

— ARS 28-3515: Невостребованные автомобили

Доказательства гликозилирования ДНК-связывающего белка Salmonella enterica | Фабрики микробных клеток

  • 1.

    Альмирон М., Линк А.Дж., Ферлонг Д., Колтер Р.: Новый ДНК-связывающий белок с регуляторной и защитной ролью в голодных Escherichia coli . Gen Develop. 1992, 6: 2646-2654.

    Артикул Google ученый

  • 2.

    Мартинес А., Колтер Р.: Защита ДНК во время окислительного стресса с помощью неспецифического ДНК-связывающего белка Dps. J Bacteriol. 1997, 179: 5188-5194.

    Google ученый

  • 3.

    Frenkiel-krispin D, Minsky A: Биокристаллизация: стратегия последнего средства для бактерий. Новости ASM. 2002, 68: 277-283.

    Google ученый

  • 4.

    Grant RA, Filman DJ, Filkel SE, Kolter R, Hogle JM: Кристаллическая структура Dps, гомолога ферритина, который связывает и защищает ДНК. Nat Struct Biol. 1998, 5: 294-303. 10.1038 / nsb0498-294.

    Артикул Google ученый

  • 5.

    Ren B, Tibbelin G, Kajino T., Asami O, Ladenstein R: Многослойная структура Dps с новым диядерным ферроксидазным центром. J Mol Biol. 2003, 329: 467-77. 10.1016 / S0022-2836 (03) 00466-2.

    Артикул Google ученый

  • 6.

    Chen L, Helmann JD: Bacillus subtilis MrgA является гомологом Dps (PexB): данные о металлорегуляции гена окислительного стресса. Mol Microbiol. 1995, 18: 295-300. 10.1111 / j.1365-2958.1995.mmi_18020295.x.

    Артикул Google ученый

  • 7.

    Pena MM, Burkhart W, Bullerjahn GS: Очистка и характеристика Synechococcus sp. полипептид штамма PCC 7942 структурно подобен стресс-индуцированному белку Dps / PexB Escherichia coli . Arch Microbiol. 1995, 163: 337-344.

    Артикул Google ученый

  • 8.

    Моенс С., Вандерлейден Дж .: Гликопротеины в прокариотах.Arch Microbiol. 1997, 168: 169-175. 10.1007 / s002030050484.

    Артикул Google ученый

  • 9.

    Альтман Э., Бриссон Дж.Р., Гагне С.М., Кольбе Дж., Месснер П., Слейтр У. Б.: Структура гликановой цепи из гликопротеина поверхностного слоя Clostridium thermohydrosulfuricum L77-66. Biochim Biophys Acta. 1992, 1117: 71-77.

    Артикул Google ученый

  • 10.

    Месснер П., Кристиан Р., Нойнингер С., Шульц Г.: сходство «основных» структур в двух разных гликанах тирозин-связанных гликопротеинов S-слоя эубактерий. J Bacteriol. 1995, 177: 2188-2193.

    Google ученый

  • 11.

    Messner P, Christian R, Kolbe J, Schulz G, Sleytr UB: Анализ новой единицы связи O -связанных углеводов из гликопротеина кристаллического поверхностного слоя Clostridium thermohydrosulfuricum S102-70.J Bacteriol. 1992, 174: 2236-2240.

    Google ученый

  • 12.

    Стимсон Э., Вирджи М., Мейкпис К., Делл А., Моррис Х.Р., Пейн Дж., Сондерс Дж. Р., Дженнингс М.П., ​​Баркер С., Панико М., Бленч I, Моксон Э.Р .: Менингококковый пилин: гликопротеин, замещенный дигалактозилом. 2,4-диацетамидо-2,4,6-тридезоксигексоза. Mol Microbiol. 1995, 17: 1201-1214. 10.1111 / j.1365-2958.1995.mmi_17061201.x.

    Артикул Google ученый

  • 13.

    Virji M: Посттрансляционные модификации менингококковых пилей. Идентификация общих заместителей: гликаны и α-глицерофосфат — обзор. Ген. 1997, 192: 141-147. 10.1016 / S0378-1119 (97) 00082-6.

    Артикул Google ученый

  • 14.

    Лехнер Дж, Виланд Ф: Структура и биосинтез прокариотических гликопротеинов. Анну Рев Биохим. 1989, 58: 173-194. 10.1146 / annurev.bi.58.070189.001133.

    Артикул Google ученый

  • 15.

    Olsen O, Thomsen KK: Улучшение термостабильности бактериальной β-глюканазы путем гликозилирования. J Gen Microbiol. 1991, 137: 579-585.

    Артикул Google ученый

  • 16.

    Kuo C, Takahashi N, Swanson AF, Ozeki Y, Hakomori S: олигосахарид высокоманнозного типа, связанный с N , экспрессируемый в основном белке внешней мембраны Chlamydia trachomatis , опосредует прикрепление и инфекционность микроорганизма в клетки HeLa.J Clin Invest. 1996, 98: 2813-2818.

    Артикул Google ученый

  • 17.

    Kozloff LM, Turner MF, Arellano F: Образование липогликопротеиновых комплексов, образующих ледяные зародыши бактериальной мембраны. J Bacteriol. 1991, 173: 6528-6536.

    Google ученый

  • 18.

    Smith H, Cole JA, Parsons NJ: Сиалирование гонококкового липополисахарида факторами хозяина: основное влияние на патогенность.FEMS Microbiol Lett. 1992, 100: 287-292. 10.1111 / j.1574-6968.1992.tb05717.x.

    Артикул Google ученый

  • 19.

    Muthukumar G, Nickerson KW: гликопротеиновый токсин Bacillus thuringiensis subsp. Israelensis указывает на лектин-подобный рецептор в кишечнике личинок комара. Appl Environ Microbiol. 1987, 53: 2650-2655.

    Google ученый

  • 20.

    Упрети Р.К., Кумар М., Шанкар В. Бактериальные гликопротеины: функции, биосинтез и применение. Протеомика. 2003, 3: 363-379. 10.1002 / pmic.2003.

    Артикул Google ученый

  • 21.

    Wacker M, Linton D, Hitchen PG, Nita-Lazar M, Haslam SM, North SJ, Panico M, Morris HR, Dell A, Wren BW, Aebi M: N -связанное гликозилирование в Campylobacterjejuni и его функциональный перенос в E. coli .Наука. 2002, 298: 1790-1793. 10.1126 / science.298.5599.1790.

    Артикул Google ученый

  • 22.

    Дженнингс М.П., ​​Вирджи М., Эванс Д., Фостер В., Сриханта Ю.Н., Стигс Л., ван дер Лей П., Moxon ER: Идентификация нового гена, участвующего в гликозилировании пилина в Neisseria meningitides . Mol Microbiol. 1998, 29: 975-984. 10.1046 / j.1365-2958.1998.00962.x.

    Артикул Google ученый

  • 23.

    Roque-Barreira MC, Campos-Neto A: Jacalin: IgA-связывающий лектин. J. Immunol. 1986, 134: 1740-1743.

    Google ученый

  • 24.

    Састри М.В., Банарджи П., Патанджали С.Р., Свами М.Дж., Сварналата Г.В., Суролия А: Анализ связывания сахарида с лектином Artocarpus integrifolia показывает специфическое распознавание Т-антигена [бета-D-Gal (1- 3) D-GalNAc]. J Biol Chem. 1986, 261: 11726-11733.

    Google ученый

  • 25.

    Bourne Y, Astoul CH, Zamboni V, Peumans WJ, Menu-Bouaouiche L, Van Damme EJ, Barre A, Rouge P: Структурная основа необычной специфичности связывания углеводов жакалином по отношению к галактозе и маннозе. Biochem J. 2002, 364: 173-180.

    Артикул Google ученый

  • 26.

    Arockia-Jeyaprakash A, Jayashree G, Mahanta SK, Swaminathan CP, Sekar K, Surolia A, Vijayan M: Структурная основа энергетики взаимодействий джакалин-сахар: беспорядочные половые связи против специфичности.J Mol Biol. 2005, 347: 181-188. 10.1016 / j.jmb.2005.01.015.

    Артикул Google ученый

  • 27.

    Altuvia S, Almirón M, Huisman G, Kolter R, Storz G: Промотор dps активируется Oxy R во время роста и IHF и сигмой S в стационарной фазе. Mol Microbiol. 1994, 13: 265-272. 10.1111 / j.1365-2958.1994.tb00421.x.

    Артикул Google ученый

  • 28.

    Halsey TA, Vazquez-Torres A, Gravdahl DJ, Fang FC, Libby SJ: ферритин-подобный белок Dps необходим для Salmonella enterica серовар Typhimurium Устойчивость к окислительному стрессу и вирулентность. Infect Immun. 2004, 72: 1155-1158. 10.1128 / IAI.72.2.1155-1158.2004.

    Артикул Google ученый

  • 29.

    Ахмед Х., Чаттерджи Б.П.: Дальнейшая характеристика и иммунохимические исследования углеводной специфичности джекфрута ( Artocarpus integrifolia ).J Biol Chem. 1989, 264: 9365-9372.

    Google ученый

  • 30.

    Benz I, Schimidt MA: гликозилирование с помощью остатков гептозы, опосредованное продуктом гена aah, необходимо для соблюдения адгезии AIDA-I. Mol Microbiol. 2001, 40: 1403-1413. 10.1046 / j.1365-2958.2001.02487.x.

    Артикул Google ученый

  • 31.

    Gil-Serrano AM, Rodriguez-Carvajal MA, Tejero-Mateo P, Espartero JL, Menendez M, Corzo J, Ruiz-Sainz JE, BuendiA-Claveria AM: структурное определение 5-ацетамидо-3, Гомополисахарид, содержащий 5,7,9-тетрадеокси-7- (3-гидроксибутирамидо) -L-глицеро-L-маннонулозоновую кислоту, выделенный из Sinorhizobium fredii Hh203.Biochem J. 1999, 342: 527-535. 10.1042 / 0264-6021: 3420527.

    Артикул Google ученый

  • 32.

    Schirm M, Soo EC, Aubry AJ, Austin J, Thibault P, Logan SM: Структурная, генетическая и функциональная характеристика процесса гликозилирования флагеллина в Helicobacter pylori . Mol Microbiol. 2003, 48: 1579-1592. 10.1046 / j.1365-2958.2003.03527.x.

    Артикул Google ученый

  • 33.

    Thibault P, Logan SM, Kelly JF, Brisson JR, Ewing CP, Trust TJ, Guerry P: Идентификация углеводных фрагментов и мотивов гликозилирования в флагеллине Campylobacter jejuni . J Biol Chem. 2001, 276: 34862-34870. 10.1074 / jbc.M104529200.

    Артикул Google ученый

  • 34.

    Ceci P, Cellai S, Falvo E, Rivetti C, Rossi GL, Chiancone E: Конденсация ДНК и самоагрегация Escherichia coli Dps — это связанные явления, связанные со свойствами N -конца. .Nucl Acids Res. 2004, 32: 5935-5944. 10.1093 / нар / гх915.

    Артикул Google ученый

  • 35.

    [http://www.cbs.dtu.dk/services/NetOGlyc/]

  • 36.

    Zachara NE, O’Donnell N, Cheung WD, Mercer JJ, Marth JD, Hart GW: Динамическая модификация O -GlcNAc нуклеоцитоплазматических белков в ответ на стресс. Ответ выживания клеток млекопитающих. J Biol Chem. 2004, 279: 30133-30142. 10.1074 / jbc.M403773200.

    Артикул Google ученый

  • 37.

    Hart GW, Kreppel LK, Comer FI, Arnold CS, Snow DM, Ye Z, Cheng X, DellaManna D, Caine DS, Earles BJ, Akimoto Y, Cole RN, Hayes BK: O -GlcNAцилирование ключевых ядерных белков и белков цитоскелета: взаимность с O -фосфорилированием и предполагаемые роли в мультимеризации белков. Гликобиол. 1996, 6: 711-716. 10.1093 / гликоб / 6.7.711.

    Артикул Google ученый

  • 38.

    Айер С.П., Харт Г.В.: Динамическое ядерное и цитоплазматическое гликозилирование: ферменты циклирования O- GlcNAc. Biochem. 2003, 42: 2493-2499. 10.1021 / bi020685a.

    Артикул Google ученый

  • 39.

    Freestone P, Grant S, Trinei M, Onoda T, Norris V: фосфорилирование белка в Escherichia coli L. форма NC-7. Microbiol. 1998, 144: 3289-95.

    Артикул Google ученый

  • 40.

    Вольф С.Г., Френкиль Д., Арад Т., Финкель С.Е., Колтер Р., Мински А.Защита ДНК путем биокристаллизации, вызванной стрессом. Природа. 1999, 400: 83-85. 10.1038 / 21918.

    Артикул Google ученый

  • 41.

    Али Азам Т., Ивата А., Нишимура А., Уэда С., Исихама А. Зависимые от фазы роста изменения в составе белков нуклеоида Escherichia coli . J Bacteriol. 1999, 181: 6361-6370.

    Google ученый

  • 42.

    Стефани К., Вейхарт Д., Хенгге Р.: Динамический контроль уровней белка Dps с помощью протеаз ClpXP и ClpAP в Escherichia coli . Mol Microbiol. 2003, 49: 1605-1614. 10.1046 / j.1365-2958.2003.03644.x.

    Артикул Google ученый

  • 43.

    Blum H, Beier H, Gross HJ: Улучшенное окрашивание серебром растительных белков, РНК и ДНК в полиакриламидных гелях. Электрофорез. 1987, 8: 93-99. 10.1002 / elps.1150080203.

    Артикул Google ученый

  • 44.

    Tsai C-H, Frasch CE: чувствительное окрашивание серебром для обнаружения липополисахаридов в полиакриламидных гелях. Анальная биохимия. 1982, 119: 115-119. 10.1016 / 0003-2697 (82) -Х.

    Артикул Google ученый

  • 45.

    Fontes W, Cunha RB, Sousa MV, Morhy L: Улучшение извлечения лизина при автоматическом секвенировании белков. Анальная биохимия. 1998, 258: 259-267. 10.1006 / abio.1998.2565.

    Артикул Google ученый

  • 46.

    LeGendre N, Matsudaira P: Прямое микросеквенирование белка с мембраны для переноса Immobilon-P. Биотехники. 1988, 6: 154-159.

    Google ученый

  • 47.

    Rademaker GJ, Pergantis SA, Blok-Tip L, Langridge JI, Kleen A, Thomas-Oates JE: масс-спектрометрическое определение участков присоединения O -гликана с низкой пикомолярной чувствительностью. Анальная биохимия. 1998, 257: 149-160. 10.1006 / abio.1997.2548.

    Артикул Google ученый

  • 48.

    Silva-Lucca RA, Tabak M, Nascimento OR, Roque-Barreira MC, Beltramini LM: Структурные и термодинамические исследования KM +, лектина, связывающего D-маннозу, из семян Artocarpus integrifolia . Biophys Chem. 1999, 79: 81-93. 10.1016 / S0301-4622 (99) 00035-6.

    Артикул Google ученый

  • 49.

    Koma M, Miyagawa S, Honke K, Ikeda Y, Koyota S, Miyoshi S, Matsuda H, Tsuji S, Shirakura R, Taniguchi N: Снижение основного ксеноантигена на гликосфинголипидах эндотелиальных клеток свиней с помощью различных эндотелиальных клеток свиней. .Гликобиол. 2000, 10: 747-751. 10.1093 / гликоб / 10.7.745.

    Артикул Google ученый

  • 50.

    Диас-Баруффи М., Сакамото М., Россетто С., Возари-Хампе М.С., Роке-Баррейра М.С.: Миграция и агрегация нейтрофилов, вызванная эуфорбином, лектином из латекса Euphorbia milii , var. мили . Inflamm Res. 2000, 49: 732-736. 10.1007 / с000110050654.

    Артикул Google ученый

  • 51.

    Юлениус К., Мёльгаард А., Гупта Р., Брунак С.: Прогнозирование, анализ сохранения и структурная характеристика участков гликозилирования муцинового типа O млекопитающих. Гликобиол. 2005, 15: 153-164. 10.1093 / гликоб / cwh251.

    Артикул Google ученый

  • 52.

    Ferguson MAJ: GPI-мембранные анкеры: изоляция и анализ. Гликобиология: практический подход. Под редакцией: Фукуда М., Кобата А. 1993, Oxford University Press, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк, 349-383.

    Google ученый

  • Младший сотрудник службы безопасности — Департамент общественной безопасности

    📁
    💼
    📅   
    R335813 Заявка №

    Мы ищем помощника сотрудника службы безопасности для Департамента общественной безопасности Санкт-Петербурга.Марыйский медицинский центр.

    Расположение: Apple Valley, CA
    График работы: по вызову / суточные
    Смена: 8 часов, дни (переменная)

    Краткое описание вакансии:

    Обеспечивает безопасную среду для всего медицинского персонала, пациентов и посетителей кампуса Медицинского центра Святой Марии; 24 часа в сутки.

    Основные функции:

    • Ответственный за запирание и отпирание Медицинского центра, включая хозяйственные постройки.

    • Патрулируйте все зоны медицинского центра, в первую очередь зоны с высокой проходимостью, включая отделение неотложной помощи, помещения для пациентов и парковки в качестве присутствия в униформе для выявления и сдерживания преступной деятельности. Будьте внимательны, ищите и сообщайте о любых угрозах безопасности или проблемах с безопасностью

    • Офицер общественной безопасности II будет укомплектовать стационарные посты, следить за деятельностью в окрестностях, вести соответствующие журналы и регистрировать посетителей на объекте.

    • Офицер общественной безопасности II должен соблюдать законы штата и правила больниц при выполнении обязанностей DPS.

    • О любых негативных инцидентах с участием опекунов SMMC, замеченных любым сотрудником общественной безопасности, следует сообщать руководителю или руководителю DPS, начальнику смены дома или административному координатору.

    • Все сотрудники службы общественной безопасности будут вести журнал происшествий во время дежурства и сообщать обо всех серьезных происшествиях руководителю DPS как можно скорее после происшествия.

    • Производит необходимые аресты и / или составляет точный отчет, когда совершается преступное деяние или когда в кампусе Медицинского центра произошел инцидент, о котором следует сообщить. При необходимости PSO II передаст арестованных или задержанных в полицейское управление Эппл-Вэлли для рассмотрения.

    • Офицер общественной безопасности II будет следить за вестибюлем, чтобы помогать посетителям и обеспечивать безопасность имущества SMMC.

    • Офицер общественной безопасности II должен подчиняться дежурному офицеру общественной безопасности III.

    • Обеспечивает достойное передвижение умерших.

    Навыки:

    • Отличные устные и письменные коммуникативные навыки.

    • Способность получать указания от старшего персонала.

    • Способность справляться с физически и эмоционально трудными ситуациями.

    Минимальные требования к должности:

    Образование: H.S. Диплом или GED

    Лицензии / сертификаты:

    Лучшая позиция Квалификация:

    Образование: Курсовая работа / обучение — Посещал аккредитованную программу обучения сотрудников правоохранительных органов.

    Опыт работы: 1 год Патрульный стаж.

    Лицензии / Сертификаты: Базовый сертификат POST сотрудника службы безопасности Калифорнии или базовый сертификат сотрудника службы охраны мира первого уровня.

    Медицинский центр Святой Марии (SMMC) — это больница неотложной помощи на 213 коек и более 1750 сотрудников, что делает его одним из крупнейших работодателей в регионе, обслуживающим общины Высокой пустыни. Учреждение было построено в 1956 году и вошло в систему здравоохранения Св. Джозефа в 1992 году.

    В этом учреждении есть единственное отделение неонатальной помощи в High Desert, аккредитованное Службой помощи детям Калифорнии и получившее одобрение в качестве специальной больницы Калифорнийским сообществом по обслуживанию детей. Отделение интенсивной терапии новорожденных.Сент-Мэри была аккредитована в качестве основного центра приема инсультов в 2018 году, единственного центра приема инсультов в High Desert.

    Услуги и клинические специальности, предлагаемые в этой больнице, включают диабетическое просвещение, неотложную помощь, сердечно-сосудистые услуги, визуализационные услуги, реабилитационные услуги, респираторные услуги, услуги роботизированной хирургии, хирургические услуги, услуги для женщин и детей, уход за ранами и гипербарическую медицину.

    Техасский DPS наращивает принудительное переключение / замедление

    Водители, не соблюдающие закон штата о переезде / замедлении движения, могут быть подвергнуты штрафу в размере 2000 долларов и тюремному заключению.

    Автор: Тайлер Гибсон

    Размещено: / Обновлено:

    (Изображение: Texas DPS / MGN)

    ХЬЮСТОН (КИАХ). Техасским водителям, не соблюдающим закон штата о переезде / замедлении движения, грозит штраф в размере 2000 долларов и тюремное заключение. Вот почему в октябре DPS наращивает усилия по обеспечению соблюдения законов в штате Техас. Одна операция проводится в течение дня октября.20 в регионе Юго-Восточного Техаса.

    Закон о передвижении / замедлении требует от автомобилистов передвигаться или замедляться, когда определенные транспортные средства, такие как полиция, пожарная служба, служба скорой помощи, транспортные средства Департамента транспорта Техаса (TxDOT) и эвакуаторы, останавливаются на обочине дороги с включенными аварийными огнями. . Транспортные средства для технического обслуживания или строительства дорог по контракту с TxDOT, автомобили коммунального обслуживания и стационарные автомобили для твердых отходов или утилизации также были добавлены в список из-за 86-й законодательной сессии.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *