Лады модели фото: Фотографии автомобилей Lada — полный каталог фото Lada

ВАЗ — все модели Lada 2021: характеристики, цены, модификации, видео, дилеры

Все модели ВАЗ 2021 года: модельный ряд автомобилей Lada, цены, фото, обои, технические характеристики, модификации и комплектации, отзывы владельцев ВАЗ, история марки Lada, обзор моделей ВАЗ, архив моделей Lada. Также здесь вы можете найти «горячие» предложения от дилеров марки ВАЗ.

В нашем каталоге указаны ориентировочные цены на автомобили ВАЗ. Если Вы хотите приобрести определенную модель Lada из числа представленных на сайте — обращайтесь к официальным дилерам ВАЗ в вашем городе или регионе.

От 600 000 ₽

Внедорожник

Россия

Год: 2021

От 645 000 ₽

Внедорожник

Россия

Год: 2021

От 704 000 ₽

Седан

Россия

Год: 2015

От 852 000 ₽

Седан

Россия

Год: 2017

От 1 110 000 ₽

Седан

Россия

Год: 2018

От 791 000 ₽

Универсал

Россия

Год: 2017

От 906 000 ₽

Универсал

Россия

Год: 2017

От 500 000 ₽

Седан

Россия

Год: 2018

От 616 000 ₽

Универсал

Россия

Год: 2018

От 522 000 ₽

Хэтчбек

Россия

Год: 2018

От 529 000 ₽

Универсал

Россия

Год: 2018

От 545 500 ₽

Хэтчбек

Россия

Год: 2018

От 680 000 ₽

Хэтчбек

Россия

Год: 2015

От 791 000 ₽

Кроссовер

Россия

Год: 2018

От 691 000 ₽

Универсал

Россия

Год: 2021

От 866 000 ₽

Универсал

Россия

Год: 2021

От 686 000 ₽

Фургон

Россия

Год: 2021

От 738 000 ₽

Внедорожник

Россия

Год: 2020

Архив моделей марки Lada

История АвтоВАЗ

В 1967 году в СССР приступили к строительству Волжского автомобильного завода в г. Тольятти. Первым генеральным директором завода был Поляков В.Н. В 1971 году завод вступил в строй, его первая очередь была рассчитана на выпуск 220000 легковых автомобилей в год. Легендарная «копейка» ВАЗ-2101 была разработана на базе итальянского ФИАТ-124. С этого времени появилась слабая тенденция уменьшения острого дефицита советского рынка автомобилей. Пятиместная малолитражка ВАЗ-2101 снабжалась четырехцилиндровым двигателем с мощностью в 60 л.с. и развивала скорость до 140 км/час. Руководство СССР считало, что «Жигули» из-за низкой цены и массовости станут народным автомобилем. Но этого не произошло, так как цена росла при выпуске каждой новой модели. В 1977 году с конвейера завода сошла «Нива» — ВАЗ-2121, которая имела полный привод и могла с успехом преодолевать сельское бездорожье. При советской власти в Тольятти был разработан и выпущен ряд из 9-ти моделей, особой популярностью среди которых пользовались «копейка», 6-я и 9-я модели. «Девятка», как и 8-ая модель, впервые имела привод на передние колеса.

Производство «шестерки» ВАЗ-2106 было начато в 1976 году, за базовую модель был взят FIAT 124 Speciale. Внедорожник «Нива» ВАЗ-2121 из-за высокой цены не был распространен в СССР, но на ярмарке в Познани получил золотую медаль. Приз «Золотой Меркурий» завод получил в 1987 году за большой вклад в международное сотрудничество. В 1995 году стартовала сборка нового семейства автомобилей – ВАЗ 2110. Модель выпускалась в 4-х вариантах кузова – седан, универсал, хэтчбек и купе. В 1997-м публике представлен новый ВАЗ 2115 – рестайлинговая версия ВАЗ 21099. В ноябре 2004 года компания АвтоВАЗ начала выпуск принципиально новой модели Lada Kalina, которая по данным Ассоциации европейского бизнеса (2009 год) заняла 4-е место в рейтинге самых популярных автомобилей России. В 2007-м году модельный ряд компании пополнила Lada Priora – автомобиль, призванный полностью вытеснить с производства устаревшую «десятку». Весной 2008 года в списке основных акционеров российской автокомпании появилась фирма Renault, которая приобрела 25% акций АвтоВАЗ. В 2009 году предприятие переживает кризис и несет огромные убытки. Финансовая поддержка от государства, а также программа субсидирования потребительских автокредитов оказали положительное влияние на сложившуюся ситуацию. Для спасения АвтоВАЗ также были предприняты решительные действия, в частности, крупные сокращения персонала.

В 2010-м году АвтоВАЗ впервые после кризиса выходит на прибыль. В октябре 2011 года на конвейере АвтоВАЗ стартовало производство Lada Granta — удешевленной версии Lada Kalina, призванной занять стартовую нишу в модельной линейке. В этом же году должность главного дизайнера российской компании получил Стив Маттин – именно ему удалось создать фирменный образ новых Lada Vesta и Lada XRAY. Усиливается партнерство АвтоВАЗ с альянсом Renault-Nissan – последнему с 2013 года принадлежит контрольный пакет акций российского предприятия. В 2013 году кресло главы АвтоВАЗ занимает Бу Андерссон, который до этого возглавлял ГАЗ. Этому человеку удалось запустить в серию две модели Vesta и XRAY, но, несмотря на положительные тенденции развития компании и оптимизацию работы завода АвтоВАЗ в 2014-2015 так и не сумел выйти на прибыль. В 2016 году главой АвтоВАЗ стал директор российской Dacia Николя Мор. Согласно информации официального сайта АвтоВАЗ, приоритетами компании на будущее являются повышение эффективности производства, улучшение качества автомобилей и выход на операционную прибыль.

4 новые модели Lada, которые появятся в 2021 году – Daily-Motor

В Сети назвали четыре новые модели Lada, которые должны выйти в продажу в России в 2021 году.

Фото: открытые источники

«АвтоВАЗ» продолжает наращивать продажи автомобилей в России. По итогам октября дилеры Lada реализовали 37 тысяч 30 новых машин, что является лучшим результатом для компании с октября 2014 года. 

В следующем году модельная линейка Lada должна серьезно расшириться. Ожидается, что в продажу выйдет сразу четыре новые модели бренда.

Lada Largus FL

Lada Largus FL должен был выйти в продажу в этом году, но, по слухам, доберется до дилеров только в 2021-м. Прототипы этой модели тестируются в окрестностях Тольятти уже несколько месяцев, что позволяет фотошпионам регулярно их фотографировать. С фейслифтингом новый «Ларгус» получит новую головную оптику от Renault Logan 2 поколения, радиаторную решетку с крупной ладьей Lada, новый бампер, крылья и капот. Кроме того, в максимальной комплектации реформенная модель обзаведется «вестовскими» боковыми зеркалами с подогревом и электроприводом складывания. 

Lada Granta (2 поколение)

Слухи о новой генерации Lada Granta ходят уже давно. Со сменой тележки автомобиль переедет на архитектуру Global Acess (B0), лежащую в основе Lada Largus и Renault Logan. Новое поколение бюджетника получит доработанную подвеску, усовершенствованное рулевое управление и новые задние тормоза с надежными механизмами самоподвода стояночного тормоза. Дизайн пока держится в секрете, но машину несколько раз показывали на неофициальных рендерах.

Lada Vesta FL

Пожалуй одной из самых знаменательных новинок следующего года от «АвтоВАЗа» станет обновленная Lada Vesta. Как и в случае с «Грантой», как будет выглядеть автомобиль, неизвестно, но есть пару предположений от независимых дизайнеров. Ожидается, что новая «Веста» получит модернизированный внешний облик, более современный и комфортабельный интерьер, но сохранит моторную линейку и список трансмиссий.

Lada Vesta SW Sport

Спортивный универсал Lada Vesta SW Sport много раз ловили в ходе тестовых испытаний, но информации о том, когда он появится в продаже, до сих пор нет. Предполагалось, что автомобиль выйдет летом этого года, но помешала пандемия. Теперь появления Vesta SW Sport придется подождать до 2021 года. 

Автомобили Lada — Модельный ряд 2020-2021: комплектации и цены, фото на новые модели

Сообщить об ошибке

Вы можете оставить сообщение для команды разработчиков «Без руля.ру»

Каталог

Подробный справочник
автомобилей

Дилеры

Адреса дилеров
по всей стране

Седан

Хэтчбек

Универсал

Внедорожник

Адреса официальных дилеров Lada

Комплектации и цены новых автомобилей

357 моделей, 1 871 комлектация, 158 877 пакетов и опций

Модели лады фото с названиями

Несравненная классика LADA – модели, выпускаемые с 2007 по 2018 года – семейная LADA Kalina, молодёжная LADA Priora, народная LADA Granta.

Бренд LADA постоянно развивается и стремится к улучшению, обновляя свой модельный ряд.

Вы, как владелец LADA, всегда можете записаться на ТО к официальному дилеру, купить оригинальные аксессуары или скачать руководство по эксплуатации.

Автомобили

Девушки

Автосалоны

Хотите увидеть первые фото машины Лада? Узнать, как выглядели легендарные модели в 1966 году и как она представлена сегодня? Оставайтесь на портале VERcity и оцените эволюцию продукции концерна Lada по фото. Вас ждет привлекательная подборка снимков, которая расскажет о модификациях в дизайне автомобилей данной марки.

Что можно найти в галерее?

Фото машины Lada позволяет оценить внешний экстерьер транспортного средства. Для удобства поиска картинки рассортированы по названию серии и году выпуска. Фото новых Лада также дают возможность изучить дизайн салона, расположение механизмов управления и варианты обивки.

Фото всех моделей Lada есть на портале. Практически каждый год деятельности компании ознаменован выпуском новой модели или целого класса транспортных средств. Фото Лада продемонстрируют новинки дизайнерских решений и развитие мировой автомобильной индустрии.

Преимущества VERcity

В отличие от других информационных интернет-ресурсов, наш портал предлагает:

• Бесплатно скачать фото Lada любой модели.
• Ознакомиться с интересными фактами из истории компании-производителя.
• Узнать последние новости автомобильной индустрии.

Качественные фото машины Lada станут хорошим украшением рабочего стола. Следите за развитием авто мира вместе с VERcity.

• Страна: Россия
• Годы работы: 1966 — н.в.
• Гарантия от сквозной коррозии: н/у

АО «АвтоВАЗ» одно из крупнейших автопроизводителей не только в России, но и во всей Восточной Европе. Завод был учрежден в 1966 году и имеет тесные связи с концерном Fiat. На данный момент должность.

LADA («Ла́да») — марка автомобилей, производимых АО «АВТОВАЗ». Ранее использовалась лишь для автомобилей, поставляемых на экспорт, а для внутреннего потребления автомобили производились под маркой «Жигули», затем — «Спутник» (следующее семейство), которое поставлялось на экспорт как «LADA Samara» и вскоре стало называться так же внутри страны. В 2011 году главным дизайнером автомобилей LADA назначен британский дизайнер Стив Маттин [1] .

Содержание

Производящиеся модели [ править | править код ]

Названия приведены в соответствии с современной заводской классификацией. Внутризаводские обозначения вида ВАЗ-XXXX приводятся в скобках. Если тип кузова или количество дверей (для хетчбэка) не входят в заводское название модели, они указываются отдельно.

2012 — LADA Largus [ править | править код ]

• LADA Largus универсал (R90)

• LADA Largus универсал CNG
• LADA Largus Cross

(LADA Largus грузовой фургон (F90)

LADA Largus грузовой фургон CNG

2018 — LADA Granta 2 [ править | править код ]

• LADA Granta седан
• LADA Granta лифтбек
• LADA Granta хетчбэк
• LADA Granta универсал SW

2016 — LADA XRAY [ править | править код ]

• LADA XRAY
• LADA XRAY Cross

2015 — LADA Vesta [ править | править код ]

• LADA Vesta Cross
• LADA Vesta CNG
• LADA Vesta Sport

LADA Vesta SW

LADA Vesta SW Cross

1977 — LADA 4×4 [ править | править код ]

• LADA 4×4 3D Urban
• LADA 4×4 Bronto

LADA 4×4 5D

LADA 4×4 5D Urban

Снятые с производства модели [ править | править код ]

1970 — Семейство «Классика» («Жигули») [ править | править код ]

1984 — Семейство Samara (Спутник) [ править | править код ]

1987 — «Ока» [ править | править код ]

1996 — Семейство 110 [ править | править код ]

• LADA 110
• LADA 111
• LADA 112
• LADA 112 Coupe

1997 — Семейство Samara 2 [ править | править код ]

2004 — Семейство Kalina [ править | править код ]

• LADA Kalina седан
• LADA Kalina хетчбэк

LADA Kalina универсал

2007 — Семейство Priora [ править | править код ]

• LADA Priora седан
• LADA Priora хетчбэк
• LADA Priora Coupe
• LADA Priora универсал

2011 — Семейство Granta [ править | править код ]

LADA Granta лифтбек

2013 — Семейство Kalina 2 [ править | править код ]

• LADA Kalina хетчбэк

LADA Kalina универсал

LADA Kalina Cross

Ребрендинг 2015 года [ править | править код ]

С 1 апреля 2015 года изменился фирменный логотип Волжского Автозавода «Ладья», он стал более объёмным. Новый логотип украсил не только новинки автозавода, такие как LADA XRAY и LADA Vesta, но и выпускаемые ранее машины [2] .

Продажи в ЕС [ править | править код ]

В 2016 году в странах Европейского Союза объем экспортных поставок «АвтоВАЗа» составил около 16,5 тыс. автомобилей, а в 2017 году экспорт вырос на 31 %, и составил около 24 тыс. экземпляров.

С начала 2017 года седан LADA Vesta продается в Австрии, Болгарии, Венгрии, Германии и Литве.

За 2017 год было продано 5,167 тыс. моделей LADA в странах ЕС, что на 28,6 % больше показателя за 2016 год. 2,6 тыс. автомобилей было реализовано в Германии (LADA 4×4 — 1,470 автомобиля; Granta — 693; Vesta — 472) [3] [4] .

В апреле 2019 «АвтоВАЗ» принял решение прекратить поставки автомобилей Lada в Европу, «в связи с ужесточением экологических норм в европейских странах». [5]

Интересные факты [ править | править код ]

• Под торговым названием «Жигули» продавались автомобили семейства ВАЗ-2101 на внутреннем и международном рынке. Но так как слово «Жигули» потребители ассоциировали со словом жиголо (особенно в испаноязычных странах), на внешнем рынке довольно быстро торговая марка «Жигули» была заменена на Lada [6] .
• В 2004 году руководство «АвтоВАЗа» объявило о переходе на латиницу при официальном написании названий всех выпускаемых заводом автомобилей: Lada — вместо «ВАЗ» и «Лада». Руководивший в то время предприятием Владимир Каданников иронично заметил, что самые меткие названия его продукции даёт народ — «копейку» и «зубило» не искоренит никакая латиница [7] .
• Российские потребители зачастую предпочитают использовать жаргонные названия, связанные с номерами моделей, либо иронически обыгрывающие название завода: «десятка», «одиннадцатая», «ТАЗ» и др. [8][9]
• Когда военное правление в Бразилии (1964—1985) закончилось, страна импортировала в 1990 году некоторые модели Lada из Советского Союза, которые были очень популярны для использования в качестве такси; нетрудно найти модель Lada в крупных бразильских городах, хотя Ford и Volkswagen — марки куда более популярные [10] .
• В 1991 годучилийский футбольный клуб «Коло-Коло» в первый (и на данный момент — единственный) раз выиграл Кубок Либертадорес. Титульным спонсором была LADA — именно эта надпись (красного цвета) была помещена на футболках чилийских игроков [11] .

Галерея [ править | править код ]

Lada 1500 (ВАЗ-21061-37) версия для Канадского рынка. 1981 г.в, Квебек, Канада, 2011 г.

АВТОВАЗ начал производить модель Niva под брендом LADA

Фото: АВТОВАЗ

В июле компания «ЛАДА Запад Тольятти», входящая в Группу АВТОВАЗ, начала выпускать внедорожники Niva под маркой LADA. Решетку радиатора и руль теперь украшает логотип LADA в виде всем известной трехмерной ладьи. 

В декабре 2019 года АВТОВАЗ закрыл сделку о выкупе 50% акций тольяттинского СП GM-AVTOVAZ у американской компании. Таким образом производственная площадка, позднее переименованная в «ЛАДА Запад Тольятти», стала на 100% принадлежать АВТОВАЗу, а модель Niva вернулась в продуктовый портфель LADA. 

Напомним, что Niva является разработкой АВТОВАЗа и ее производство начиналось в 2000 году под маркой LADA. Спустя два года модель стала выпускаться под маркой Chevrolet на совместном предприятии GM-АВТОВАЗ. Все это время сохранялся высокий уровень сотрудничества совместного предприятия и АВТОВАЗа. Основные узлы – кузов, шасси, силовой агрегат – производились на мощностях АВТОВАЗа, а на партнерской производственной площадке была организована окраска и финальная сборка. Всего к настоящему моменту изготовлено более 700 тыс. внедорожников Niva. 

«LADA Niva органично дополняет модельный ряд LADA, становясь вторым полноприводным внедорожником в семействе, – заявил исполнительный вице-президент по продажам и маркетингу LADA Оливье Морне. – Этот автомобиль пользуется заслуженным спросом и имеет сильную репутацию. Мы намерены и далее развивать его продажи, которые теперь организованы и в самой большой дилерской сети России, которая на сегодня насчитывает более 300 центров продаж и обслуживания».

События, связанные с этим

10 июля 2020

АВТОВАЗ начал производить модель Niva под брендом LADA

Подпишитесь на новости

характеристики и комплектации, отзывы владельцев

Марка автомобилей ВАЗ известна всему миру. В настоящее время отечественный автопром выпускает конкурентоспособные модели, которые практически ни в чем не уступают иномаркам. Большим преимуществом продукции ВАЗ является ценовая политика. Если поглубже рассмотреть, что производитель предлагает за такую цену, то можно смело приобретать данные авто.

Последние модели «Лады» заслуживают особого внимания. Данные представители превзошли все ожидания автолюбителей. В них производители учли все нюансы и создали модели в соответствии с европейскими стандартами, однако при этом сохранили приемлемые цены.

Lada Vesta

«Лада-Веста» – автомобиль В-класса. Его презентация состоялась летом 2014 г. Масштабное производство началось спустя год в Ижевске. Тип кузова у «Весты» – седан. Модель полностью переднеприводная. В основу была положена платформа Lada B/С. Она характеризуется колесной базой 2635 мм, передними стойками McPherson и торсионной балкой.

Размеры нового седана составили 4410х1764х1497 мм. Двигатель 16-клапанный, объемом 1,6 л и мощностью в 106 л.с. Силовые агрегаты только бензиновые, работают в комплекте с механической и автоматической трансмиссией. В зависимости от выбора КПП, несколько меняются технические и эксплуатационные характеристики. Например, механическая 5-ступенчатая трансмиссия позволяет разогнать авто за 11,8 сек., однако требует большего потребления топлива (6,9 л). Коробка-«автомат» экономичная (расход горючего 6,6 л/100 км), однако уступает во временном промежутке разгона на 1 сек.

Основываясь на отзывах автолюбителей, можно с уверенностью сказать, что «Лада-Веста» укомплектована по последним требованиям. Здесь в стандартном наборе присутствует усилитель рулевого колеса, система антипробуксовки, полный электропакет (стеклоподъемники, центральный замок, сигнализация), обогрев стекол и сидений, круиз-контроль и многое другое.

Lada Granta

«Лада-Гранта» – первый седан, в основе которого была использована модернизированная платформа «Калины». Однако «АвтоВАЗ» не собирался останавливаться на достигнутом, и уже в 2013 г. вышел хэтчбек Granta. Прототипом ему послужила знаменитая в свое время модель ВАЗ 2109, однако он отличается достаточно большими размерами.

В новых версиях производитель отказался от использования не совсем качественных материалов, поэтому специфические запахи теперь полностью отсутствуют. В функциональном плане седан и хэтчбек не уступают свои импортным аналогам.

Новая модель «Лады» хоть и появилась в 2010 г, но испытания и тесты проходят до сих пор. Поэтому в настоящий момент автовладельцы заявляют, что машина отлично отлажена. Прочность кузова, аэродинамика, работа двигателя и другие функции полностью соответствуют эксплуатации на российских дорогах.

Что касается экстерьера и интерьера, то здесь все сделано в духе «АвтоВАЗа». Кузов, фары, радиаторная решетка, безусловно, определяют марку «Лада». На автомобиль установлен двигатель 1,6 л, количество клапанов зависит от комплектации. Например, в стандарте – 8, а люксе – 16.

Базовые опции: одна подушка безопасности, дневная оптика, трансформирующиеся задние сидение, силовой агрегат ВАЗ-11183.

Наполнение люкс: две подушки безопасности, молдинги, электроподъемники задних стекол, подогрев окон, зеркал и сидений, система навигации.

Lada Kalina

Последние модели «Лады-Калины» представили объединенный вариант всех автомобилей «АвтоВАЗа». Их разработка началась еще в 1993 г. Первая презентация седана состоялась в 2000 г., хэтчбека – в 1999 г., универсала – в 2001 г. Масштабное производство «Калины» было запущено в 2004 г.

Автомобиль Lada Kalina разработан с особенностями городского транспортного средства. Он достаточно компактный, что позволяет ему легко маневрировать на дорогах, внешне привлекателен и вполне устойчив. Салон вместительный, пассажиры на задних сидениях не ощущают дискомфорта даже при росте 180-190 см. Все детали сделаны качественно, хорошая шумоизоляция, однако при работе двигателя чувствуется небольшая вибрация. Именно такие выводы сделали владельцы авто.

Последние модели «Лады-Калины» (второе поколение) выпускаются только с двумя типами кузовов: универсал и хэтчбек. Последний унаследовал двери и крышу. А вот в универсале появились рейлинги. Что касается светооптики, то здесь нет больших изменений. Единственное отличие: форма задних фар несколько растянулась, теперь они заходят на крыло.

Преимущества II поколения все же ощутимы. Как утверждают владельцы «Калины», кузов стал более жестким, а это, в свою сторону, свидетельствует об уровне безопасности. В стандартную комплектацию вошли индикатор ремней безопасности и одна подушка, также есть усилитель руля, передние электроподъемники и аудиосистема. Увеличился клиренс, колесная база и общие габариты авто.

Lada Priora

Новая модель «Лады» – «Приора» — появилась в 2007 г. Изначально автомобиль выпускали только с кузовом седан. Однако после того, как модель набрала популярность, «АвтоВАЗ» решил запустить производство универсала и хэтчбека. Автолюбители характеризуют «Приору» как перспективное транспортное средство с ярко выраженными солидными чертами во внешнем виде.

При разработке авто была поставлена цель выпустить машину с максимальным уровнем комфорта, безопасности, надежности, функциональности и простоты в техобслуживании. Также немаловажным вопросом являлась ценовая политика. Цена не была завышена. «Приора» оснащена 16-клапанным силовым агрегатом 1,6 л. Он достаточно мощный, что позволяет быстро набрать скорость 100 км/ч (за 11,5 сек.).

Для автомобиля есть три варианта дополнительной комплектации:

• Стандарт: иммобилайзер, штампосварные диски, регулировка ремней безопасности, электропривод замка багажного отделения, система фильтрации воздуха.
• Норма: центральный замок, одна подушка безопасности, зеркала заднего вида с управлением и обогревом, электроподъемники передних стекол.
• Люкс: датчики незакрытых дверей, три ремня безопасности и подголовники на заднем сидении, подсветка, индикаторы вкл/выкл светооптики, две подушки безопасности и др.

Lada Largus

«Лада-Ларгус» представляет собой универсал В-класса. Этот автомобиль рассчитан на 5-7 посадочных мест. Впервые машина дебютировала в Москве. Летом 2012 г. началось серийное производство «Ларгуса». Этот выпуск примечателен тем, что «АвтоВАЗ» начал сотрудничество с Renault-Nissan.

Характеристики «Лады-Ларгус» вполне соответствуют новым стандартам. Авто укомплектовали двумя видами бензиновых двигателей: 8 и 16-клапанным. Коробка передач механическая. Трогаясь с места, скорость 100 км/ч авто набирает за 13,4 сек. Потребление горючего с 8-клапанным мотором – 8 л., а с усиленным агрегатом – 7,5 л. В основе автомобиля заложена платформа ВО. Комплектация представлена тремя вариантами: норма, стандарт, люкс.

Lada 4×4 Urban

Последние модели «Лады», прототипом которым послужила всем известная «Нива», выпускаются под названием «Урбан» с 2014 г. Их презентация состоялась в Москве. Уникальность этой модели в том, что все улучшения были придуманы непосредственно пользователями.

Изменения не заставили себя очень долго ожидать. Новая версия «Лады 4×4» оснащена совершенно другими бамперами, радиаторной решеткой, 16-дюймовой колесной базой. Производители улучшили эту модель, укомплектовали ее кондиционером, электроподъемниками, обогревом и дистанционным управлением зеркал. На автомобиль установлен двигатель 1,7 л, механическая КПП. Время разгона занимает 17 сек., расход бензина составляет около 10 литров.

Все виды лады фото и названия

LADA – автомобильная марка, принадлежащая ОАО «АвтоВАЗ» (крупнейшему производителю легковых машин в России и Восточной Европе), который, в свою очередь, находится под контролем франко-японского альянса… Автомобили данного бренда занимают порядка 20% отечественного рынка, а характеризуются они относительно невысокой стоимостью и хорошей приспособленностью к «российским реалиям».

Премьера этого концептуального кроссовера состоялась в августе 2016-го на автошоу в Москве. Автомобиль, продемонстрировавший возможное развитие модельной линейки «Лада», получил эффектный дизайн и интересную технику, а в 2018 году может стать серийным.

Первый электромобиль «АвтоВАЗа» появился на свет осенью 2011 года, а в 2013-м был выпущен опытной партией в 100 экземпляров. Внешне и внутри пятидверка повторяет «Калину-универсал» оригинального поколения, но в движение приводится электромотором швейцарского производства.

Гоночный «вазовский» болид, разработанный фирмой «Торгмаш», выпускался с 2004 по 2008 года специально для участия в кольцевых гонках. Этот автомобиль обладает аэродинамически выверенной внешностью, одноместным салоном и мощными бензиновыми моторами.

Данная малолитражка начала «карьеру» в 1988 году и за свою историю многократно модернизировалась, а выпускалась до 2008-го. Это – предельно простой автомобиль «особо малого класса» с бесхитростным видом, архаичным салоном и слабыми двигателями.

Отечественный однообъёмник выпускался небольшими партиями с 1998 по 2006 года, после чего покинул «автомобильную сцену». Автомобиль имеет своеобразную внешность и семиместный салон, а технику (в том числе двигатели и полноприводную трансмиссию) делит с «Нивой».

Этот внедорожник должен был стать 2-м поколением «старой Нивы», но его рождение совпало с «перестройкой государства» (в результате затянулось на 20 лет)… на «запуск серии» ресурсов так и не нашлось (в результате он был «куплен американцами» и превратился в «Шевроле Ниву»).

История отечественного «автогиганта» богата событиями и интересна не только автолюбителям, но и рядовым гражданам – ведь в свое время по мощности этому предприятию не было равных на всей территории огромного Советского Союза (да и сегодня автомобили с шильдиком «Lada» широко распространены не только в России, но и далеко за её пределами). Несмотря на то, что это относительно «молодой» автопроизводитель – хронология «Волжского автозавода» насыщена событиями…

Датой «зарождения» этого предприятия можно считать 20 июля 1966 года – именного тогда руководством СССР было принято решение возвести в Тольятти новый крупный автозавод с полным производственным циклом, технический проект которого подготавливался с привлечением итальянского концерна «Fiat».

Строительство «Волжского автомобильного завода» стартовало в начале 1967 года, причем проводилось оно по-настоящему ударными темпами – в результате чего уже в марте 1970-го была выпущена первая партия из десяти кузовов для будущих автомобилей, а ещё через месяц с главного конвейера сошли первые шесть заднеприводных легковушек ВАЗ-2101 «Жигули» (конструктивно данная модель повторяла Fiat-124, но при этом имела свыше 800 отличий от итальянского «донора»).

За «копейкой» последовали и другие автомобили (так же созданные с использованием наработок итальянцев) – все они пользовались популярностью в народе…

Новый виток развития предприятия начался в 1977 году, когда «на свет появилась» легендарная «Нива» (которую тольяттинцы разработали собственными силами) – машина повышенной проходимости с несущим кузовом, полным приводом и независимой передней подвеской (её, кстати, многие считают «родоначальником» класса кроссоверов)…

До 1980-х годов модельная гамма «АвтоВАЗ» состояла преимущественно из «классических» заднеприводных моделей (не считая, конечно, «Нивы»), однако в то время стало очевидно – будущее за переднеприводными машинами… И уже в 1984-м был представлен первый в истории отечественной компании подобный автомобиль – трёхдверный хэтчбек ВАЗ-2108 «Самара» (к которому впоследствии примкнули и другие кузовные варианты исполнения)…

Распад Советского Союза серьезно повлиял на экономическое состояние «Волжского автозавода», потому первая легковушка постсоветского периода дебютировала лишь в 1995 году – то был ВАЗ-2110 (в простонародье – «десятка»)… за ним последовали минивэн ВАЗ-2120 (запущенный в производство в 1998-м) и семейство Лада Калина (начавшее свою историю в 2004 году) – все эти новинки (хоть и запоздалые) позволили предприятию «оставаться на плаву». Кстати, именно в 2004-м название «Lada» (вошедшее в обиход ещё в 1973-м, но официально используемое лишь для экспортных моделей) стало универсальным для всего модельного ряда тольяттинского автозавода…

Сложные для «АвтоВАЗ’а» времена настали в конце первого десятилетия XXI века: несмотря на то, что в 2008 году альянс Renault-Nissan выкупил четверть акций российской компании, в 2009-м она столкнулась с серьезными финансовыми проблемами и находилась на грани банкротства (именно по этой причине Министерство промышленности и торговли РФ заявило тогда, что поддержка предприятия за счет государственных средств является нецелесообразной)…

Ситуацию спас все тот же франко-японский концерн, который предложил (и в дальнейшем помог) запустить на «Волжском автозаводе» выпуск автомобилей на базе платформы «B0» (под марками Nissan и Renault) и новых моделей Lada – что, в итоге, позволило отечественному «автогиганту» вновь «встать на ноги» и получить дополнительное финансирование от правительства…

В настоящее время «АвтоВАЗ» более чем на 50% принадлежит компании Renault (что фактический делает его дочерним предприятием французов), тем не менее упор в развитии делается именно на продукцию марки Lada – последние годы ведётся активная разработка абсолютно новых моделей (многие из которых уже запущены в серийное производство)…

В данной рубрике размещены обзоры и тесты (новых моделей 2019-2020 года и «бывалых») авто производства тольяттинского автомобильного завода (под марками «Лада» и «ВАЗ»). В обзорах модельного ряда указаны технические характеристики, цены и комплектации новинок, фотографии автомобилей марок «ВАЗ» и «Лада», а так же отзывы владельцев этих автомобилей.

LADA («Ла́да») — марка автомобилей, производимых АО «АВТОВАЗ». Ранее использовалась лишь для автомобилей, поставляемых на экспорт, а для внутреннего потребления автомобили производились под маркой «Жигули», затем — «Спутник» (следующее семейство), которое поставлялось на экспорт как «LADA Samara» и вскоре стало называться так же внутри страны. В 2011 году главным дизайнером автомобилей LADA назначен британский дизайнер Стив Маттин [1] .

Содержание

Производящиеся модели [ править | править код ]

Названия приведены в соответствии с современной заводской классификацией. Внутризаводские обозначения вида ВАЗ-XXXX приводятся в скобках. Если тип кузова или количество дверей (для хетчбэка) не входят в заводское название модели, они указываются отдельно.

2018 — LADA Granta [ править | править код ]

• LADA Granta седан
• LADA Granta лифтбек
• LADA Granta хетчбэк
• LADA Granta универсал

2016 — LADA XRAY [ править | править код ]

• LADA XRAY
• LADA XRAY Cross

2015 — LADA Vesta [ править | править код ]

• LADA Vesta Cross
• LADA Vesta CNG
• LADA Vesta Sport

LADA Vesta SW

LADA Vesta SW Cross

2012 — LADA Largus [ править | править код ]

• LADA Largus универсал (R90)

LADA Largus грузовой фургон (F90)

LADA Largus CNG

1977 — LADA 4×4 [ править | править код ]

• LADA 4×4 3D Urban
• LADA 4×4 Bronto

LADA 4×4 5D

LADA 4×4 5D Urban

Снятые с производства модели [ править | править код ]

1970 — Семейство «Классика» («Жигули») [ править | править код ]

1984 — Семейство Samara (Спутник) [ править | править код ]

1987 — «Ока» [ править | править код ]

1996 — Семейство 110 [ править | править код ]

• LADA 110
• LADA 111
• LADA 112
• LADA 112 Coupe

1997 — Семейство Samara 2 [ править | править код ]

2004 — Семейство Kalina [ править | править код ]

• LADA Kalina седан
• LADA Kalina хетчбэк

LADA Kalina универсал

2007 — Семейство Priora [ править | править код ]

• LADA Priora седан
• LADA Priora хетчбэк
• LADA Priora Coupe
• LADA Priora универсал

2011 — Семейство Granta [ править | править код ]

LADA Granta лифтбек

2013 — Семейство Kalina 2 [ править | править код ]

• LADA Kalina хетчбэк

LADA Kalina универсал

LADA Kalina Cross

Ребрендинг 2015 года [ править | править код ]

С 1 апреля 2015 года изменился фирменный логотип Волжского Автозавода «Ладья», он стал более объёмным. Новый логотип украсил не только новинки автозавода, такие как LADA XRAY и LADA Vesta, но и выпускаемые ранее машины [2] .

Продажи в ЕС [ править | править код ]

В 2016 году в странах Европейского Союза объем экспортных поставок «АвтоВАЗа» составил около 16,5 тыс. автомобилей, а в 2017 году экспорт вырос на 31 %, и составил около 24 тыс. экземпляров.

С начала 2017 года седан LADA Vesta продается в Австрии, Болгарии, Венгрии, Германии и Литве.

За 2017 год было продано 5,167 тыс. моделей LADA в странах ЕС, что на 28,6 % больше показателя за 2016 год. 2,6 тыс. автомобилей было реализовано в Германии (LADA 4×4 — 1,470 автомобиля; Granta — 693; Vesta — 472) [3] [4] .

В апреле 2019 «АвтоВАЗ» принял решение прекратить поставки автомобилей Lada в Европу, «в связи с ужесточением экологических норм в европейских странах». [5]

Интересные факты [ править | править код ]

• Под торговым названием «Жигули» продавались автомобили семейства ВАЗ-2101 на внутреннем и международном рынке. Но так как слово «Жигули» потребители ассоциировали со словом жиголо (особенно в испаноязычных странах), на внешнем рынке довольно быстро торговая марка «Жигули» была заменена на Lada [6] .
• В 2004 году руководство «АвтоВАЗа» объявило о переходе на латиницу при официальном написании названий всех выпускаемых заводом автомобилей: Lada — вместо «ВАЗ» и «Лада». Руководивший в то время предприятием Владимир Каданников иронично заметил, что самые меткие названия его продукции даёт народ — «копейку» и «зубило» не искоренит никакая латиница [7] .
• Российские потребители зачастую предпочитают использовать жаргонные названия, связанные с номерами моделей, либо иронически обыгрывающие название завода: «десятка», «одиннадцатая», «ТАЗ» и др. [8][9]
• Когда военное правление в Бразилии (1964—1985) закончилось, страна импортировала в 1990 году некоторые модели Lada из Советского Союза, которые были очень популярны для использования в качестве такси; нетрудно найти модель Lada в крупных бразильских городах, хотя Ford и Volkswagen — марки куда более популярные [10] .
• В 1991 годучилийский футбольный клуб «Коло-Коло» в первый (и на данный момент — единственный) раз выиграл Кубок Либертадорес. Титульным спонсором была LADA — именно эта надпись (красного цвета) была помещена на футболках чилийских игроков [11] .

Галерея [ править | править код ]

Lada 1500 (ВАЗ-21061-37) версия для Канадского рынка. 1981 г.в, Квебек, Канада, 2011 г.

Несравненная классика LADA – модели, выпускаемые с 2007 по 2018 года – семейная LADA Kalina, молодёжная LADA Priora, народная LADA Granta.

Бренд LADA постоянно развивается и стремится к улучшению, обновляя свой модельный ряд.

Вы, как владелец LADA, всегда можете записаться на ТО к официальному дилеру, купить оригинальные аксессуары или скачать руководство по эксплуатации.

Руководство по использованию фототравленных деталей на моделях — Руководство по масштабированию моделей

Это крупный план типичного медного лада для фототравления. Как видно, существует множество очень мелких деталей. Многие из них необходимо согнуть для придания формы, и иногда трудно сказать, для чего они предназначены, когда все они уложены таким образом.

Введение

Этот учебник объяснит все аспекты использования фототравленных (ПЭ) металлических деталей в масштабных моделях, включая пошаговое руководство по созданию сложного трехмерного объекта.

Описание того, как изготавливаются детали из полиэтилена, и их характеристики даны в статье «Материалы модельного комплекта», поэтому здесь повторяться не будет. В этой статье мы сосредоточимся на том, как на самом деле использовать детали из ПЭ.

Планирование

Иногда комплекты моделей поставляются с деталями из полиэтилена в коробке, в этом случае их использование будет показано в инструкциях. Однако, если детали из PE приобретаются как комплект послепродажного обслуживания, то у вас, вероятно, будет два набора инструкций — один комплект, который идет с модельным комплектом, и второй комплект, который идет с комплектом PE.

Петля из полиэтилена 1/35, размещенная рядом со штифтом портниха, показывает, насколько маленькими могут быть детали из полиэтилена с деталями.

Создание модельного комплекта может показаться достаточно сложным без дополнительных проблем, связанных с заменой некоторых частей комплекта деталями из полиэтилена. Как и во многих других делах в жизни, всегда разумно планировать заранее — если бы вы собирались поехать в Мексику, вы бы не поехали, не заглянув сначала в испанский словарь. Итак, внимательно ознакомьтесь с инструкциями к набору и инструкциями к вашему набору PE.Узнайте, где детали из полиэтилена заменяют детали комплекта, а где дополняют детали комплекта.

Наборы для фототравления могут быть очень сложными. Этот от Voyager призван заменить большую часть оригинального полугусеничного шасси Dragon M3.

Сравните детали набора с их эквивалентом из полиэтилена и решите, заменять или нет детали набора. Иногда деталь комплекта может быть ничуть не хуже предлагаемой замены PE, или может потребоваться так много работы по изготовлению деталей PE для такого небольшого улучшения, что вы можете решить придерживаться деталей комплекта.

Если вы решите заменить или дополнить комплектующие детали, обновите инструкцию для вашего комплекта, чтобы вы не забыли использовать детали из полиэтилена при построении модели.

Подготовка и инструменты

Как и во многих других аспектах масштабного моделирования, хорошей отправной точкой является очистка вашего рабочего пространства от других моделей и инструментов и определение инструментов, которые вам понадобятся для конкретной предстоящей задачи.

Фототравленные детали маленькие и острые. Используйте защиту для глаз и остерегайтесь наступать на детали из полиэтилена

Вам могут потребоваться следующие инструменты:

• Режущая поверхность
• Острый нож или ножницы для полиэтилена
• Мелкие напильники или наждачная бумага «влажная и сухая»
• Инструмент для складывания PE
• Клеи
• Пинцет
• Плоскогубцы остроконечные
• Малярная лента

Режущая поверхность должна быть достаточно твердой, и лучше всего подойдет старый компакт-диск или DVD-диск, так как он твердый, но не затупит чрезмерно ваше лезвие.Детали могут быть удалены с лада из полиэтилена либо специальными ножницами, либо острым ножом для хобби. Я считаю, что хобби-нож лучше всего подходит для большинства деталей, так как иногда бывает трудно расположить даже маленькие ножницы, и они могут легко деформировать мелкие детали при резке. Это довольно быстро затупит лезвие ножа для хобби, поэтому будьте готовы к его замене при необходимости.

Независимо от того, насколько аккуратно вы вырезаете полиэтиленовые детали из их литника, у вас часто останется небольшой отрезок литника, который нужно будет отпилить очень тонким надфилем или «мокрой и сухой» бумагой.

Это увеличенная 8-дюймовая версия инструмента Hold And Fold, которая дает возможность складывать действительно большие детали из полиэтилена. Доступно в небольшом магазине.

Etch Mate от Mission Models отличается тем, что изготовлен из композитного материала, а не из металла. Доступно в моделях миссий.

Инструмент для складывания PE не является абсолютно необходимым, поскольку детали можно складывать плоскогубцами, но инструмент для складывания значительно упрощает работу с PE, и я настоятельно рекомендую приобрести его, если вы собираетесь использовать детали из PE на регулярной основе.

«Ошибка» удержания и фолда довольно мала, но справляется с большинством требований PE фолдинга. Лезвие ножа Стэнли используется для складывания деталей, в то время как «жук» удерживает их на месте. Доступно в небольшом магазине.

Самыми популярными моделями являются «Etch Mate» от Mission Models и «Hold And Fold» от The Small Shop. Инструменты для складывания PE бывают разных размеров. Если вы планируете складывать большие детали, такие как крылья, которые проходят по всей длине бака, тогда вам понадобится одна из больших моделей.Однако подавляющее большинство деталей из полиэтилена имеют небольшие размеры, и для них подойдет один из более мелких (и более дешевых) складных инструментов.

Использование деталей из полиэтилена почти наверняка означает обращение к цианоклеям, чтобы прикрепить их к модели и друг другу.

Детали из полиэтилена , но не можно склеивать полистирольным клеем. Самая популярная альтернатива — циано-клеи, также известные как суперклей. Они бывают разной толщины от «супертонких» до «заполняющих зазоры», и каждая толщина полезна в разных ситуациях.Для очень мелких деталей можно использовать клеи, такие как Clear Fix, бумажные клеи или даже глянцевый лак, при условии наличия достаточной площади поверхности. Связь не будет прочной, но часто в этом нет необходимости. Альтернативой клею в некоторых случаях является спайка металлических деталей вместе, и это описано в статье «Пайка металлических деталей».

Очень пригодятся такие маленькие плоскогубцы, которые можно купить недорого. Однако не покупайте инструменты низкого качества, которыми будет сложно и неудобно пользоваться.

Для того, чтобы удерживать очень крошечные детали из полиэтилена, не обойтись без хорошего пинцета. На самом деле вам пригодятся несколько пар разных типов, особенно пружинные самозакрывающиеся. Маленькие плоскогубцы с острым концом полезны для удержания деталей и их сгибания. Обратите внимание на тип, который имеет гладкую, а не зубчатую удерживающую поверхность. Можно купить наборы маленьких плоскогубцев по низкой цене, и это хорошее вложение.

Небольшие полоски малярной ленты пригодятся для скрепления деталей вместе или для модели во время нанесения клея и пока он сохнет.

Полный набор инструментов для полиэтилена, готовый к работе. Обратите внимание, что DVD используется как коврик для резки.

Приведенный выше список оборудования может показаться длинным, но подавляющее большинство его также используется для других целей моделирования, поэтому большинство опытных моделистов уже имеют большинство из этих элементов. Единственное исключение — инструмент для складывания, который требует определенных затрат, но, к сожалению, альтернативы мало, если вы серьезно относитесь к регулярной гибке деталей из полиэтилена.

Крепление очень мелких деталей

Одна из самых больших проблем при работе с полиэтиленом — это удерживание и приклеивание очень мелких деталей, таких как пряжки.Они могут быть слишком маленькими, чтобы удерживать их пинцетом, и если вам удастся удержать их, как вы нанесете клей?

Крошечные полиэтиленовые пряжки на этих багажных ремнях полностью удерживаются глянцевым лаком.

Обычно я использую небольшую кисть и глянцевый лак. Нанесите тонкий слой глянцевого лака на небольшую область, где вы хотите разместить деталь. Затем, пока лак на модели еще влажный, используйте небольшую кисть, смоченную небольшим количеством глянцевого лака, чтобы прикоснуться к полиэтиленовой части и поднять ее.Естественной липкости лака будет достаточно, чтобы подобрать полиэтиленовую деталь и разместить ее на модели на покрытой лаком области. Смажьте деталь с кисти и наложите на модель, возможно, используя палочку для коктейля.

Затем вы можете переместить деталь в правильное положение концом кисти и / или коктейльной палочки. Когда лак высохнет, вы можете нанести еще один тонкий слой лака на деталь, чтобы убедиться, что она надежна.

Пошаговое руководство

Вырезание отдельных деталей из лада.

Теперь мы будем работать над созданием брызговиков, которые заменят крылья танка Tamiya Panther в масштабе 1/35.

Используемый набор PE — это набор обновлений Aber номер 35A24, который часто продается с набором 34024, чтобы сделать полный пакет обновлений для резервуара. Первый этап — определить все детали, необходимые для сборки брызговика, с помощью инструкции Aber.

Вот детали, из которых состоит крыло, расположенные рядом со штифтом для сравнения размеров. Этот одиночный брызговик представляет собой небольшой самостоятельный комплект.

Затем детали отделяются от лада острым ножом для хобби, используя старый DVD в качестве коврика для резки. Будьте осторожны, чтобы не потерять ни одной крошечной детали. Подумайте о том, чтобы наклеить малярный скотч на лад и разрезать его вместе с ладом, чтобы мелкие детали не разлетелись.

Обрезка ножки лада острым лезвием.

Рекомендуется поместить все кусочки в небольшой контейнер, например, крышку от банки для варенья, чтобы их было легко найти и не потерять.

Следующим шагом является осмотр каждой части и либо обрезка, либо обрезки любых заглушек, оставшихся от того места, где части были прикреплены к ладу.

Это самая большая часть брызговика, требующая нескольких изгибов.

Запиливание стаба с лада плоским напильником.

Основная часть брызговика требует изгиба и придания формы. Боковые стороны необходимо согнуть на 90 градусов, а переднюю — слегка согнуть, чтобы получился изгиб. Когда необходимо выполнить несколько изгибов одной детали, очень важно спланировать порядок изгибов.Иногда изгиб детали из полиэтилена предотвращает изгиб другого типа. Если сомневаетесь, сделайте копию детали, вырезав ее из бумаги или тонкой карты, и попробуйте сделать на ней изгибы. После того, как деталь из полиэтилена согнута, очень трудно ее разогнуть, не повредив, поэтому это нужно делать правильно с первого раза.

Выполнение первого сгиба рукояткой моделировочного ножа.

В данном случае я решил сначала сделать пологий изгиб. Для этого использовали круглую металлическую рукоятку хобби-ножа в качестве наковальни и осторожно надавили на нее, изгибая рукоять.Это делалось в несколько этапов для получения плавного плавного изгиба. Деталь немного погнулась, сместилась на пару миллиметров, еще немного погнулась и так далее.

Затем две боковые части основного брызговика были согнуты на 90 градусов внутрь с помощью инструмента «Hold and Fold Bug». Также были сделаны изгибы некоторых других более мелких деталей.

СКЛАДЫВАНИЕ ЧАСТИ PE Здесь мы видим часть PE на фальцевальном инструменте.

Здесь деталь помещается под откидную пластину, где должен быть выполнен сгиб, и откидная пластина плотно прикручивается.

Здесь деталь изгибается, вставляя под нее лезвие и поднимая его чуть более чем на 90 градусов

Наконец, вы можете увидеть изогнутую часть складного инструмента, готовую к снятию и установке.

После того, как все детали будут подготовлены, их нужно скрепить вместе, и еще раз стоит потратить пару минут на планирование порядка сборки и опробовать пробный запуск. Этот совет применим к любой модели здания.

Выполнение изгибов основной части брызговика.

Важно убедиться, что поверхность деталей чистая и обезжиренная. По крайней мере, сильно протрите поверхность тканью, пропитанной уайт-спиритом или другим веществом, которое удалит масло и жир. Если возможно, протрите фиксируемую поверхность тонкой «мокрой и сухой» бумагой или тонкой проволочной ватой (зернистость 1000).

Крыло после завершения изгиба.

При соединении металла с металлом я предпочитаю использовать припой, и этот процесс описан в отдельной статье «Пайка металлических деталей».«Большинство моделистов будут использовать суперклей / цианоклей. Там, где требуется соединить большую площадь поверхности, хороший метод — скрепить детали вместе, а затем нанести каплю тонкого суперклея на край, который будет втянут между двумя частями под действием капилляров и почти сразу затвердеет.

Для деталей с небольшой поверхностью для соединения или с зазорами необходимо использовать более толстый суперклей для заполнения зазоров. Еще раз установите детали и удерживайте их на месте зажимами или малярным скотчем, затем аккуратно нанесите суперклей по стыку.Суперклей, заполняющий зазоры, может схватиться некоторое время, поэтому вы можете применить ускоритель, чтобы ускорить процесс.

Вдавить выступы в брызговик кончиком шариковой ручки на коврике для резки.

После того, как детали будут скреплены вместе, осмотрите их и очистите, как и в случае с любой другой подсборкой моделирования. Удалите излишки клея с помощью ножа или шлифовальных палочек / бумаги и заполните все зазоры. Помните, что наполнители, предназначенные для связывания с пластиком, не подойдут, поэтому вам нужно будет использовать что-то вроде эпоксидной замазки, чтобы заполнить зазоры e.грамм. Миллипут, или Апоксискульпт).

Наконец, на этом брызговике необходимо сделать несколько выпуклых параллельных линий на брызговике. Компания Aber сделала брызговики тоньше там, где нужно вдавить линии, что не только хорошо отмечает положение, но и направляет инструмент, используемый для создания впечатления.

Верхняя сторона брызговика с выпуклыми линиями и головками болтов, образованными нажатием снизу.

Я использовал обычную шариковую ручку, которую прижимали к брызговику, пока ее кладут на самовосстанавливающийся коврик для резки.Коврик для резки имеет резиновую поверхность, и это важно, потому что он не будет работать на твердой поверхности. Отпечаток создается путем мягких движений инструмента (ручки) вперед и назад несколько раз. Не пытайтесь сделать все за один проход. Также необходимо создать несколько головок болтов, и это можно сделать, просто нажав шариковой ручкой на нижнюю часть брызговика.

Вот сравнение готового крыла из полиэтилена и пластика, отформованного на верхней части корпуса.

Как только все это будет сделано, крыло готово. К сожалению, это только половина дела. В этом случае необходимо срезать оригинальный пластиковый брызговик с модели, потому что он отформован как неотъемлемая часть верхней части корпуса. Работа моделиста никогда не бывает завершенной!

Сводка

Работа с деталями из полиэтилена — сложная задача, требующая изучения новых навыков и использования продуктов, отличных от тех, которые используются для моделирования из пластика. Помните, что модели хорошего качества можно изготавливать, даже не прибегая к полиэтилену, поэтому не чувствуйте себя обязанным его использовать, особенно если это может отвлекать вас от удовольствия.Однако, если вы готовы принять вызов и хотите поднять свои модели на еще более высокий уровень совершенства, следуйте рекомендациям в этой статье, и вы, вероятно, добьетесь успеха.

0

(PDF) Измерения внутримолекулярной эффективности FRET для изображений с интервальной флуоресцентной микроскопией

Ссылки

1. Аоки, К., Киёкава, Э., Накамура, Т., Мацуда, М.: Визуализация сигнала роста

каскадов трансдукции в живых клетках с генетически кодируемыми зондами на основе

Фёрстера резонансной передачи энергии.Философские труды Королевского общества

в Лондоне B: Биологические науки 363 (1500), 2143–2151 (2008)

2. Биртвистл, М. Р., фон Кригсхайм, А., Кида, К., Шварц, Дж. П., Андерсон, KI,

Kolch, W .: Линейные подходы к внутримолекулярному резонансному переносу энергии Ферстера

зондовые измерения для количественного моделирования. PloS one 6 (11), e27823 (2011)

3. Буланже, Дж., Кервранн, К., Бутеми, П., Эльбау, П., Сибарита, Дж. Б., Саламеро,

Дж.: Нелокальный функционал на основе патчей для шумоподавления изображения флуоресцентной микроскопии

последовательностей. IEEE Transactions on Medical Imaging 29 (2), 442–454 (2010)

4. Фоорд, Р., Джонс, Р., Оливер, К.Дж., Пайк, Э.Д .: Использование фотоумножителей для счета

фотонов. Прикладная оптика 8 (10), 1975–1989 (1969)

5. Форстер Т .: Межмолекулярная миграция энергии и флуоресценция. Анна. Phys. 2, 55–75

(1948)

6. Гордон, Г.В., Берри, Г., Лян, X.H., Левин, Б., Герман, Б.: Количественные измерения резонансного переноса энергии флуоресценции

с использованием флуоресцентной микроскопии.

Biophys. J. 74, 2702–2713 (1998)

7. Холден, М .: Линейная мера эффективности резонансной передачи энергии Форстера (FRET)

, включающая модель неопределенности дробового шума для интенсивности флуоресцентной микроскопии

изображений. В: Proc 13th IEEE Int Symp Biomed Imaging (ISBI). С. 672–675. IEEE

(2016)

8. Исикава-Анкерхольд, Х.К., Анкерхольд, Р., Драммен, G.P.C .: Advanced fluores-

методы микроскопии FRAP, FLIP, FLAP, FRET и FLIM. Молекулы

17 (4), 4047–4132 (2012)

9. Ярес-Эриджман, Е.А., Йовин, Т.М .: FRET imaging. Nature biotechnology 21 (11),

1387–1395 (2003)

10. Jezierska, A., Talbot, H., Chaux, C., Pesquet, JC, Engler, G .: Poisson-Gaussian

параметр шума оценка визуализации с помощью флюоресцентной микроскопии. В: Proc 9th IEEE

Int Symp Biomed Imaging (ISBI).С. 1663–1666. IEEE (2012)

11. Лодиш, Х., Берк, А., Кайзер, Калифорния, Кригер, М., Бретшер, А., Плоег, Х., Амон,

А., Скотт, член парламента: Molecular Cell Биология. В. Х. Фриман (2012)

12. Луизье, Ф., Блю, Т., Унсер, М .: Снижение шума изображения в смешанном пуассон-гауссовском шуме.

IEEE Transactions по обработке изображений 20 (3), 696–708 (2011)

13. Падилья-Парра, С., Трамье, М .: FRET-микроскопия в живой клетке: разные подходы

подходы, сильные стороны и недостатки.BioEssays 34 (5), 369–376 (2012)

14. Rosen, MK, Yamazaki, T., Gish, GD, Kay, CM, Pawson, T., Kay, LE: Di-

, прямая демонстрация внутримолекулярное взаимодействие sh3-фосфотирозина в белке

crk. Nature pp. 477–479 (1995)

15. Шимомура, О., Джонсон, Ф.Х., Сайга, Ю.: Извлечение, очистка и свойства

экворина, биолюминесцентного белка из светящегося гидромедузана, aequorea.

J. Cell. Комп. Physiol. 59, 223–239 (1962)

16.Смал, И., Луг, М., Ниссен, В., Мейеринг, Э .: Количественное сравнение методов обнаружения пятен в флуоресцентной микроскопии. IEEE Transactions on Medical Imaging

29 (2), 282–301 (2010)

17. Тейлор, Дж. Р.: Введение в анализ ошибок. University Science Books (1997)

18. Зал Т., Гаскойн, штат Нью-Джерси: визуализация эффективности FRET с поправкой на фотообесцвечивание

живых клеток. Биофизический журнал 86 (6), 3923–3939 (2004)

19. Zeug, A., Woehler, A., Neher, E., Ponimaskin, E.G .: Количественная оценка интенсивности

FRET приближается к сравнительному снимку. Биофиз. J. 103 (9), 1821–1827 (2012)

от 12 до 14 ладов

Развитие: от 12 до 14 ладов Очевидно, это произошло. Поскольку это так знакомо, давайте воспользуемся мартином. дредноут в качестве примера, помогающего понять явление. И, кстати, это не про мелкие исторические подробности. чем это о понимании количества прогрессий ладов в Американские гитары в 20 веке.Количество ладов по отношению к длине шкалы по отношению к размеру тела. Первое изображение — D-18 1933 года выпуска. 19 ладов, 12 вне тела. Пожалуйста, обрати внимание элегантный топ Golden Era из четырех частей! Второе изображение — это то, что они сделали, чтобы очистить 14 ладов: они в основном сокращенный кузов … И затем на изображении №3 вы видите, что они сделали гриф волноваться дольше, переместите звукозаборник и накладку ближе к мосту. Это о Это. В основном: меньший верх, меньший объем воздуха.Смена тона? Безусловно. Что это на самом деле значит? Ты будешь судьей! Хорошо, вот что еще они могли сделать, чтобы получить 14 лады прочь от тела. Опять же, левое изображение — наш старый друг, Д-18 33 года. (Все эти используйте ту же длину шкалы.) На среднем изображении мы видим воображаемый D-18 (спасибо, Фотошоп!) где гриф, бридж и звуковое отверстие сдвинуты на север достаточно далеко, чтобы раскрывать 14 ладов.Кузов без изменений. Выглядит довольно странно, а? Я бы сказал, что вроде Gibson J-50. См. ниже. На изображении справа показана доска с еще одним ладом, с отверстием для звука и накладкой. взолнованный несколько южнее. Это то, что Гибсон сделал для создания своих оригинальных гитар Jumbo. нравиться J-45 и SJ. По иронии судьбы, Мартин недавно предложил 14 ладов наклон-D, копирование Ремейк собственной гитары, созданный Гибсоном 70 годами ранее! Учитывать тональный эффект от размещения моста ближе к талии гитары, независимо от положения подпорки под ней, которая, как другое обсуждение. Эти же принципы также применительно к 12-лада 000 Мартина по мере его развития сначала на ОМ (14 ладов с оригинальной шкалой 000 25,4 дюйма), а затем к возможному 14 ладов 000 с шкалой 24,9 дюйма.

Эти же принципы применимы и к многочисленным Гибсонам, которые был уже какое-то время балуется количеством ладов, оторванных от тела. Но Гибсон вышел на рынок больших гитар просто скопировав самый ранний дредноут Мартина, назвав его моделью Роя Смека: . Вскоре они изменили это, переместив звуковое отверстие и мост вверх, чтобы место на 14 ладов, но корпус не укорачивали:

, потому что у них всегда были 13-ладовые модели, Gibson сделали несколько 13-ладовых переходных версий своих меньших плоских вершин, а также как дредноуты (которые они переименовали в Jumbos), в общем и целом всегда держали свою шкалу на уровне 24.75 дюймов. Вот, справа, одна из более ранних настоящих плоских вершин Гибсона, 1929 Л-1. 19 лады 12 ладов ясно, шкала 24,75 «. Проверьте размещение перемычки, проверьте звуковое отверстие размещение. Первые специальные предложения Ника Лукаса были основаны на этой модели, по иронии судьбы известная теперь как гитара Роберта Джонсона. Эти гитары могли бы хорошо звучать, если бы они были закреплены иначе. Как бы то ни было, они вообще ничем не примечательны. Обычно у них было два продольный тон такты, очень похожие на басовые такты в скрипках.Это был звук, но не очень звук. Некоторые были оснащены крестообразными скобами и звучали намного богаче. Тема для отдельного разговора. Помните, что Гибсон начинал с арктопов, и только постепенно переехал в царство с плоской вершиной, отсюда и приподнятая пикгард. Flattop (вверху справа) был основан на их более ранних гитарах Archtop, у которых было 13 ладов очистить тело! L-2 (вверху слева и внизу) был полностью вырезанным гитаре и имел бы накладку, когда она пришла из Каламазу.Эти гитары были аналогами мандолин Гибсона той эпохи. Вот 12-ладовый предшественник L-1 1928 года выпуска. Ник Лукас с укороченный 19-ладовая доска и фа-дырки на плоской вершине. Обратите внимание на еще более низкий мост размещение, ниже широкое пятно в центре нижнего ряда, что указывает на более длительный масштаб (не уверен, что это такое).

Помните, что единственная реальная разница между Ником Лукасом и Другая продукция Гибсонов того времени (помимо украшения) была тело глубина: Самый простой способ количественно оценить эффект более глубокого ящика — это это усиливает низкие частоты.Есть множество примеров этого на в рынок помимо исторических усилий Гибсона. Мартин делает две гитары как с мелкими, так и с глубокими ящиками, наиболее заметным из которых является их 0000 (иначе известный как стиль M), и его более глубокая версия, стиль J. тысячи каждого в каждой мыслимой комбинации материалов, и просто что модель предлагает хорошее прямое понимание эффекта глубокого коробка. Другой моделью Martin была гитара 00 «Women and Music», 00-16DB (как в: Deep Body), представленный на NAMM в 1997 году и время от времени предлагавшийся в разнообразие лесов с их «обычаем» классическая деревянная мозаичная розетка », которая, увы, была визуально довольно подавляющий.Изначально эта гитара была выпущена с еловым верхом и посвящена «Women In Music». Это было эффективно их версия Ника Лукаса. Взгляните на один здесь если хочешь. С тех пор Мартин предложил несколько вариантов, например этот более сдержанный Jeff Tweedy 00-DB из красного дерева, справа. Еще одна странная модель Мартина — их 000NB, Norman Blake’s. переделка 14-ладовой 000 под 12-ладовую гитару. Обратная эволюция любопытный вид. Используя то же обоснование, которое я использовал для H-13 SCGC, он выглядит примерно так: Обратите внимание на положение перемычки и звукового отверстия.Заметьте также, что кажется будь моделью-левшей! Хм? Я думаю, что предпочитаю оригинальные 12 ладов 000 как для звука, так и для эстетика.

Вот интересное сравнение двух довольно похожих старый Гибсонс оба назвали L-2. Первый, 1931 года, имеет 12 ладов и представляет (для меня) воплощение в этой модели: бридж и саундхол абсолютно правильные.Это странное фото в несколько укороченном виде. Модель хвостовика справа имеет 13 ладов, поэтому бридж перемещен вверх — но расположение звукового отверстия остается прежним. Проверить расстояние между конец доски и звуковое отверстие. (У меня есть 13-ладный Ник Лукас что очевидно, когда-то на нем был наконечник, но никогда не было накладки, и штырь мост заводской оригинал. Он датируется 1929 годом, и как этот палисандр.) Дело в том, что Гибсон получил больше ладов вне тело перемещаем мост и гриф на север.

Вот еще один пример, конец очереди для Каламазу Ник Лукас гитары: 14 ладов, та же старая шкала 24,75 дюйма. Посмотрите, какой ровный бридж. ближе до талии, а звуковое отверстие выдвинуто вверх. Монтана Ник Лукасы были разными: у некоторых есть Шкала 25,4 дюйма и 14 ладов.

Вот прогрессия Гибсона — немного аккуратнее, чем на самом деле было, конечно. Это влияет на звук? Я думаю, да. SCGC Model H — моя попытка объединить оптимальный мост и звуковое отверстие расположение 12 ладов со шкалой 25,4 дюйма, что, на мой взгляд, звучит лучше и настраивается легче. В результате получается гитара с грифом на 13 ладов. Подробнее об этом здесь.

Вот гитара, которую я хотел бы увидеть случаться.Существует 14 ладов со шкалой 24,75 дюйма; 13 ладов со шкалой Должна существовать шкала 25,4 дюйма! В: Так почему же у некоторых ранних плоских крыш были такие короткие шкалы? Почему? Мартин преобразовал их 000 из шкалы 25,4 дюйма в шкалу 24,9 дюйма? A: Простой. Более длинные гаммы ушли из эпохи струнных. Когда производители перешли к стальным струнам (Гибсон намного опередил Мартина в этот) инженерия должна была измениться, как и весы. До середина 1960-х, все стальные струны были в основном средними и тяжелыми.Не было света (или сверхлегкий) манометр. Наборы струн поставлялись с выбором .018 B нить, которая была намотана или проста. Пусть это немного уляжется. Таким образом, более короткая гамма облегчила игру на струнах. Речь идет о Модели Мартина 000, которые изначально имели шкалу 25,4 дюйма и 12 лада. тело. См. Выше. Когда они впервые преобразовали 000 в корпус с 14 ладами, они назвали его OM, и он сохранил шкалу 25,4 дюйма. Вскоре они обнаружил, что игроки находят длинную шкалу слишком несколько стальных струн, которые тогда были доступны, и они перенастроили модель с помощью 24.9-дюймовая шкала. И также опустила наименование OM. Это было всего лишь 000 опять таки. Сегодня короткая шкала снова вернулась, отчасти для удовлетворения потребностей людей кому нужно, чтобы лады были ближе друг к другу для облегчения игры, отчасти для более мягкий звук с меньшим натяжением. Тоже может быть ностальгия вещь. В конечном итоге людям нравится гитары с ударной нагрузкой, и никакая гитара в масштабе 24,75 дюйма или 24,9 дюйма действительно не подойдет сделайте это так, как это сделает гитара шкалы 25,4 дюйма. Более длинные шкалы также помогают улучшить интонацию. Но иметь выбор — это здорово.

Подробнее по этому, если кому интересно. Напишите мне, если да.

Дифференциальная динамика RhoA в мигрирующих и стационарных клетках, измеренная с помощью FRET и автоматического анализа изображений

Abstract

Генетически закодированные биосенсоры на основе флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET) широко применяются для изучения пространственно-временной регуляции молекулярной активности в живых клетках с высоким разрешением.Эффективная и точная количественная оценка большого количества данных изображений из этих одноклеточных измерений FRET требует надежного и автоматизированного анализа данных. Однако нелинейное движение живых клеток представляет собой огромную проблему для решения этой задачи. Основываясь на регистрации изображения движения отдельной клетки, мы разработали автоматизированные методы анализа изображений для отслеживания и количественной оценки сигналов FRET в определяемых пользователем субклеточных областях. Кроме того, субклеточные пиксели были классифицированы в соответствии с их связанными сигналами FRET и динамикой анализируемых кластеров.Результаты показали, что индуцированное EGF снижение активности RhoA в мигрирующих клетках HeLa значительно меньше, чем в неподвижных клетках. Более того, активность RhoA поляризована в мигрирующих клетках с градиентом полярности, ориентированным в противоположном направлении миграции клеток. Напротив, отсутствует постоянное предпочтение полярности RhoA среди стационарных клеток. Таким образом, наши методы анализа изображений могут предоставить мощные инструменты для высокопроизводительного и систематического исследования пространственно-временной молекулярной активности в регулировании функций живых клеток с их формами и положением, непрерывно меняющимися во времени.

Образец цитирования: Eichorst JP, Lu S, Xu J, Wang Y (2008) Дифференциальная динамика RhoA в мигрирующих и стационарных клетках, измеренная с помощью FRET и автоматического анализа изображений. PLoS ONE 3 (12): e4082. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082

Редактор: Терри Минс, Массачусетская больница общего профиля / Гарвардский университет, США

Поступила: 6 ноября 2008 г .; Одобрена: 26 ноября 2008 г .; Опубликован: 30 декабря 2008 г.

Авторские права: © 2008 Eichorst et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа была частично поддержана отделом биоинженерии Иллинойского университета, Урбана-Шампейн, Фондом Уоллеса Х. Култера, Beckman Laser Institute Inc., грантом NSF 08-00870 и грантом NIH NS- 063405. Финансирующие агентства не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Миграция клеток играет важную роль в эмбриональном развитии, восстановлении тканей, инвазии рака и атеросклерозе [1]. Это высокоинтегрированный процесс, модулируемый множеством сигнальных путей, состоящий из расширения цитоскелета и образования фокальных комплексов спереди, а также разборки фокальной адгезии и сокращения цитоскелета сзади [1].Семейство малых Rho GTPases играет ключевую роль в регуляции актинового цитоскелета и, следовательно, миграции [1] — [3]. Эти GTPases функционируют как молекулярные переключатели в клетке, чередуя активные GTP-связанные и неактивные GDP-связанные состояния, опосредованные факторами обмена гуаниновых нуклеотидов (GEFs) и белками, активирующими GTPase (GAPs), соответственно [1] — [4]. Среди известных представителей малых Rho GTPases, таких как RhoA, Rac1 и Cdc42 [2], [3], RhoA, как сообщается, опосредует сборку сократительных актомиозиновых филаментов в задней части мигрирующих клеток через один из его нижестоящих эффекторов, ROCK [3] — [5].Следовательно, было высказано предположение, что активность RhoA может концентрироваться в хвосте мигрирующих клеток [3]. Однако при использовании биосенсоров, основанных на флуоресцентном резонансном переносе энергии (FRET) [6], недавно было обнаружено удивительно высокая активность RhoA, которая присутствует не только в хвосте, но также и в передней части мигрирующих клеток [7], [8]. Эти результаты предполагают, что RhoA может выполнять разные функции в разных субклеточных местоположениях.

FRET — это явление квантовой механики. Когда два флуоресцентных белка (FP), донор и акцептор, находятся рядом с благоприятной ориентацией, возбуждение донорного FP может вызвать излучение от акцептора [9].FRET позволил разработать множество биосенсоров, способных обнаруживать молекулярную активность или белок-белковые взаимодействия в живых клетках [10], [11]. Два биосенсора RhoA на основе FRET были разработаны для визуализации пространственно-временной динамики активности RhoA в живых клетках [7], [12]. Группа Мацуда разработала биосенсор RhoA (Raichu-RhoA), который содержит RhoA (аминокислота 1–189), гибкий линкер и RhoA-связывающий домен (RBD) из его молекулы субстрата PKN, соединенный между голубым и желтым флуоресцентным светом. белок (CFP и YFP) [12].Активация RhoA может вызывать внутримолекулярное связывание между RhoA и доменом RBD в биосенсоре. Результирующее конформационное изменение может приблизить CFP и YFP и усилить сигналы FRET. Биосенсор Raichu-RhoA позволяет отслеживать активность RhoA во время деления клеток, поляризации и обмена фокальной адгезии в различных клетках [8], [12] — [15]. Другой биосенсор FRET RhoA был независимо разработан, содержащий последовательно полноразмерный RhoA, CFP, гибкий линкер, YFP и домен RBD ротекина [7].Этот биосенсор также успешно применялся для изучения различных клеточных функций, включая миграцию и полярность во время хемотаксиса [7], [16], [17].

Хотя разработка биосенсоров FRET значительно расширила наши знания о передаче сигналов в живых клетках, огромное количество данных визуализации, производимых этими биосенсорами, требует автоматических, интеллектуальных и объективных инструментов анализа изображений, позволяющих точную и эффективную интерпретацию биологической информации [ 18]. В частности, очень необходимы эффективные алгоритмы для отслеживания движения ячеек и учета различий в форме и геометрии отдельных ячеек.

Регистрация изображений широко применяется в технике и науке для автоматического отслеживания движущихся объектов во времени и для нахождения пиксельного соответствия между двумя изображениями похожих объектов [19], [20]. При анализе изображений живых клеток этот метод использовался для совмещения, посредством простого переноса и вращения, флуоресцентных изображений на разных длинах волн [21] — [23] и изображений ядра в разные моменты времени одной и той же клетки [24]. Его также применяли для отслеживания флуоресцентных частиц внутри клеток [25].Более сложные методы регистрации изображений также применялись для анализа экспрессии генов in situ в мозге мышей [20]. Другие методы количественной оценки были разработаны для изучения распределения белка и полярности молекулярной активности путем разделения всей клетки на маленькие клинья в полярно-скоординированной системе [23], [26] — [28], чтобы изучить подвижность и энергию одиночных сперматозоидов путем отслеживания и улавливания [29], [30] или для извлечения данных о трехмерной анатомии сосудов [31]. Тем не менее, автоматическая регистрация движущихся клеток изображения целой клетки с помощью пиксельного отслеживания по-прежнему остро нуждается в высоком разрешении и эффективном количественном определении молекулярных сигналов в пространстве и времени.

В этой статье мы разработали автоматизированные методы анализа изображений для отслеживания движения отдельных клеток и количественной оценки сигналов FRET в субклеточных регионах с использованием биосенсора RhoA от доктора Мацуда [12]. Пространственно-временные паттерны активации RhoA были проанализированы в мигрирующих и неподвижных клетках HeLa в ответ на стимуляцию фактора роста. Наши результаты показывают, что глобальная активность RhoA в мигрирующих клетках подавляется в ответ на стимуляцию факторами роста в меньшей степени, чем в стационарных клетках.Активность RhoA была более сконцентрирована в противоположном направлении миграции в мигрирующих клетках, но не проявляла предпочтения в стационарных клетках.

Материалы и методы

Клеточные линии и культура

Клетки

HeLa (ATCC, Манассас, Вирджиния) культивировали в увлажненном на 95% воздухе, 5% CO _{2 инкубаторе} при 37 ° C. Культуральная среда представляла собой среду Игла, модифицированную Дульбекко (DMEM), с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки, 2 мМ L-глутамина, 1 ед. / Мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 1 мМ пирувата натрия.Реагенты для клеточных культур были получены от Invitrogen (Сан-Диего, Калифорния).

Переходная трансфекция и микроскопическая визуализация

Поскольку биосенсор Raichu-RhoA может быть легко трансфицирован и хорошо охарактеризован для клеток HeLa, мы использовали этот биосенсор для визуализации динамики активности RhoA в клетках HeLa на стекле, покрытом фибронектином [12]. Биосенсор Raichu-RhoA трансфицировали в HeLa с помощью липофектамина (Invitrogen) [12] перед голоданием с 0,5% FBS в течение 36–48 часов.Затем клетки суспендировали в трипсин-ЭДТА и высевали на покрытые фибронектином чашки со стеклянным дном на 3-6 часов перед стимуляцией EGF (50 нг / мл). Во время визуализации клетки хранили в CO ₂ -независимой среде без сыворотки (Invitrogen) при 37 ° C. Объективный фокус был нацелен вблизи базальной стороны клетки. Изображения были получены с помощью аксиовертного инвертированного микроскопа Zeiss с фильтром возбуждения 420DF20, дихроичным зеркалом 450DRLP, двумя фильтрами излучения, управляемыми устройством смены фильтров (480DF30 для CFP и 535DF25 для YFP) и охлаждаемой камерой устройства с зарядовой связью (Cascade 512B; Фотометрия).Интенсивность возбуждающего света контролировалась регулируемыми фильтрами нейтральной плотности для обеспечения минимального фотообесцвечивания во время визуализации. Из изображений интенсивности флуоресценции CFP и YFP вычитали фон. Изображения отношения FRET были вычислены путем вычисления пиксельного отношения CFP / YFP для представления активности RhoA в пространстве и времени с использованием программного обеспечения MetaFluor 6.2 (Universal Imaging) или наших индивидуальных программ, разработанных в MATLAB (MathWorks).

Регистрация изображения

Чтобы автоматически регистрировать покадровые изображения движущейся клетки, мы отображали эти изображения клеток на единичный диск, который служил эталонным изображением как для регистрации последовательности покадровых изображений одной и той же клетки, так и для сравнения между ними. разные клетки различной формы.Чтобы отобразить ячейку на единичный диск, потребовалось четыре шага. Сначала с помощью сегментации определяли тело клетки. Во-вторых, контрольные точки на ячейке были вычислены с помощью триангуляции Делоне выпуклой оболочки тела ячейки. В-третьих, контрольные точки были сопоставлены с эталонным изображением (единичным диском) путем вычисления относительного положения точек в выпуклой оболочке. Наконец, ячейки были отображены в единичный диск с помощью кусочно-линейного преобразования [32], определяемого контрольными точками и триангуляцией Делоне (рис. 1).

Рис. 1. Диаграммы, изображающие алгоритм отслеживания региона.

(A) Центроид ячейки ( C ), контрольная точка ( P ) и граница пересечения в выпуклой оболочке ( E , на левом изображении) использовались для вычисления относительного расстояния и ориентация вектора, указывающего от центроида до контрольной точки. ( r , θ ) — полярные координаты точки на единичном диске ( P ‘), соответствующей контрольной точке ( P ) в изображении ячейки (правое изображение).(B) Процесс регистрации показан слева направо. Сначала ячейка разбивается на треугольную сетку внутри ее границы. Во-вторых, сетка была сопоставлена ​​с единичным кругом путем вычисления относительного расстояния и ориентации векторов, указывающих от центроида до узлов сетки (или контрольных точек). Наконец, контрольные точки и изображение ячейки были отображены на единичный диск с помощью кусочно-линейной интерполяции внутри треугольной сетки. (C) Верхние панели показывают изображения одной клетки, подвергающейся расширению или перемещению, с выбранной областью интереса в первом кадре.На нижних панелях показаны единичные диски, преобразованные из ячейки в разные моменты времени. Граница преобразованной области интереса в первом кадре используется для отслеживания и количественной оценки сигналов из одной и той же области на этих различных единичных дисках.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g001

Метод Оцу [33] был использован для вычисления порога интенсивности для сегментации тела клетки, поскольку флуоресцентные изображения, записанные с помощью биосенсора RhoA, были яркий и легко отделяемый от фона.Список узлов, очерчивающих контур клетки, был создан на основе идентифицированного тела клетки. Таким образом, внутри контура было создано изображение маски, чтобы представить форму ячейки. Изображения, собранные из канала YFP, использовались для обнаружения края ячейки и маски, поскольку они были ярче, чем изображения из канала CFP.

Чтобы зафиксировать форму ячейки единичным диском без неоднозначности, требуется, чтобы форма ячейки была выпуклой. Поэтому выпуклая оболочка, описывающая изображение маски ячейки, была вычислена [34] и использована в качестве границы для вычисления триангуляции Делоне [35].Затем узлы триангуляции использовались в качестве контрольных точек для изображения ячейки. Для каждой контрольной точки на изображении ячейки соответствующая контрольная точка в единичном диске была рассчитана на основе ее относительного положения в выпуклой оболочке. Вкратце, центроид ячейки () был сопоставлен с центром единичного диска () (рис. 1А). Для любой другой контрольной точки (), соответствующая точка на единичном диске, была рассчитана на основе относительного положения точки между центроидом и краем выпуклой оболочки.Предположим, что есть полярные координаты () с центром в центроиде; и луч от до пересекает край выпуклой оболочки в точке. Тогда полярные координаты соответствующей точки () в единичном круге задаются выражением () с центром в, где представляет относительное расстояние от до, т.е. (рис. 1A – B). И наоборот, любая точка на единичном диске может быть отображена обратно в разные ячейки или в одну и ту же ячейку с разными формами в разные моменты времени.

Выпуклая оболочка всей ячейки отображалась на единичный круг кусочно-линейным преобразованием [32].Внутри каждого треугольника в триангуляции Делоне преобразование является линейным и однозначно определяется тремя контрольными точками, которые являются узлами треугольника (рисунок 1B). Преобразование также непрерывно на краях, общих для двух треугольников.

Отслеживание областей интереса (ROI)

Чтобы отслеживать интересующие области, покадровые изображения одной клетки сначала преобразовывались в серию единичных дисков. Затем пользователь выбрал и определил одну или несколько областей интереса на первом изображении ячейки.После этого была сгенерирована маска для области интереса и сопоставлена ​​с первым единичным диском с помощью нашего метода регистрации изображений. Для отслеживания среднего сигнала FRET в этой области предполагалось, что маска области интереса на единичном диске остается в том же месте во времени (рис. 1C). Таким образом, одна и та же маска может быть применена ко всем единичным изображениям диска для отслеживания и расчета временного хода среднего отношения FRET в выбранной области (ах), которое было вычислено путем взятия отношения общей интенсивности CFP и YFP в пределах области. (s) в ячейке (рис. 1C).Предположение о постоянных областях интереса в дисках эталонных единиц является точным, если клетки перемещаются только в плоскости изображения или сжимаются / расширяются в радиальных направлениях, идущих от центроида. Ожидается, что клетки не будут вращаться вокруг своих центроидов в ходе эксперимента. Эти предположения являются разумными для клеток с медленной миграцией в пределах временного окна наших экспериментов и согласуются с моделью градиентного радиального расширения (GRE) [36], где ожидается, что клетки будут вытягивать или втягивать свои ламеллиподии локально перпендикулярно краю клетки и вдоль актиновые волокна.

Области интереса на эталонном единичном диске были сопоставлены с исходными изображениями ячеек, чтобы визуально подтвердить, что они действительно могут отслеживать фактическую область в мигрирующих ячейках (рис. 1С). Для повышения эффективности вычислений только узлы, очерчивающие ROI на единичном диске, но не всю маску, были преобразованы обратно в изображения ячеек.

Кластерный анализ

Чтобы изучить геометрические особенности субклеточных регионов со сходными уровнями активности RhoA, пиксели изображения клетки были классифицированы и разделены на шесть кластеров в соответствии со значениями их отношения RhoA FRET.Функция MATLAB kmeans использовалась для классификации пикселей в различные кластеры, минимизируя внутрикластерные вариации значений FRET [37], [38]. В результате каждый кластер содержал пиксели с одинаковыми значениями отношения FRET.

Программы MATLAB, реализующие эти функции, можно получить, написав соответствующему автору этой статьи.

Результаты

Регистрация изображения

В ходе экспериментов наблюдали два класса клеток HeLa со значительно различающимися паттернами миграции: мигрирующие и стационарные.Чтобы определить, является ли клетка HeLa мигрирующей или неподвижной, местоположение ее центроида отслеживалось во времени. Наибольшее расстояние, пройденное центроидом от исходного положения, было разделено на сумму расстояний, пройденных на каждом временном шаге в течение примерно 60 минут в каждом эксперименте. При соотношении больше или равном 0,5 клетка считалась мигрирующей. В противном случае ячейка считалась стационарной. Результаты подтвердили, что четко существует два класса клеток HeLa с соотношением расстояний, равным 0.71 и 0,1867 (таблица 1). Направление миграции каждой мигрирующей клетки можно определить по траектории ее центроида путем линейной аппроксимации.

С помощью нашего метода регистрации изображений, внутриклеточная активность RhoA при стимуляции фактором роста может быть визуализирована в рамках единого кадра эталонного изображения (рис. 2). Активность RhoA была высокой как на переднем, так и на заднем крае мигрирующих клеток (Рисунки 2A – 2B). Это подтвердило, что RhoA вносит вклад в удлинение актиновых филаментов и взъерошивание мембран на фронте клетки посредством mDia, тогда как регулирует сократимость актомиозина в задней части клетки [2].Как в мигрирующих, так и в неподвижных клетках можно четко наблюдать пространственные паттерны двух концентрических кольцеобразных субклеточных структур с высокой активностью RhoA (Figure 2 and Movie S1). Внешнее кольцо с высокой активностью RhoA может отражать возникающую и динамическую активацию интегрина при активности RhoA [39]. Высокая активность RhoA во внутреннем кольце может указывать на относительно высокий стресс, возникающий в конвергентной зоне, где ретроградный поток актина ламеллы встречается с антероградным потоком актина тела клетки [40].Несмотря на эти отличительные субклеточные особенности, общая активность RhoA как мигрирующих, так и немигрирующих клеток HeLa снижалась после стимуляции EGF (Рисунок 2 и Movie S1). Похоже, что после стимуляции EGF активность RhoA оставалась относительно стабильной в задней части мигрирующих, но не стационарных клеток (рис. 2B и Movie S1).

Рис. 2. Изображения FRET и их преобразованные карты на единичных дисках биосенсора Raichu-RhoA (Venus / ECFP) в мигрирующих и неподвижных клетках.

Панель (A) показывает последовательность покадровых изображений FRET для репрезентативной мигрирующей клетки HeLa. Белая стрелка указывает направление миграции. Панель (B) показывает изображения FRET мигрирующей клетки в (A), преобразованные в единичный диск. Пространственно-временная динамика изображений FRET движущейся клетки HeLa также показана в фильме S1. Панель (C) показывает последовательность покадровых изображений FRET для репрезентативной стационарной клетки HeLa. Панель (D) показывает изображения FRET неподвижной ячейки в (B), преобразованные в единичный диск.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g002

Отслеживание областей интересов

Для отслеживания и количественной оценки локальной активности RhoA в субклеточных регионах в клетках HeLa было выбрано четыре ROI как в мигрирующих, так и в неподвижных клетках. Четыре области интереса в мигрирующих ячейках охватывают переднюю, заднюю и две стороны ячейки (рис. 3A и ролик S2). Поскольку область интереса может выходить за пределы тела ячейки (рис. 3A, область 1), пороговое значение изображения YFP ячейки использовалось для оценки и вычисления сигнала FRET в части области интереса внутри тела ячейки.Таким образом, средние отношения FRET в пределах каждой области интереса мигрирующих клеток в разные моменты времени были рассчитаны для мониторинга динамической активности RhoA в субклеточных местах (рис. 3B). Оказалось, что активность RhoA во всех четырех регионах сразу упала и немного восстановилась после стимуляции EGF. Затем местная активность RhoA непрерывно снижалась в регионах на передовой и с обеих сторон. Однако в области около заднего края мигрирующей клетки активность RhoA оставалась относительно постоянной без значительного подавления после стимуляции EGF (Рисунок 3B).Это характерная особенность для различных проанализированных мигрирующих клеток. В результате разница между активностью областей интереса рядом с передней и задней частью ячейки показала значительное увеличение для мигрирующих ячеек. Это открытие подтверждает предыдущее исследование, что высокая активность RhoA важна в обеспечении сокращения хвоста мигрирующих клеток [2].

Рисунок 3. Отслеживание и анализ активности RhoA в различных областях интереса мигрирующей клетки HeLa.

(A) Слева: в первом кадре были выбраны четыре области интереса для мониторинга активности RhoA на передней, задней и двух сторонах мигрирующей ячейки.Справа: вычисленные контуры и местоположения областей интереса в ячейке в разные моменты времени на основе нашего алгоритма отслеживания. Покадровые изображения автоматически отслеживаемых областей интереса также показаны в фильме S2. (B) Временные зависимости соотношений FRET биосенсора Raichu-RhoA, усредненные по четырем областям интереса, показанным на (A).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g003

В стационарных ячейках, поскольку ячейки не двигались значительно, позиции ROI оставались относительно неизменными во времени (рис. 4A).Активность RhoA во всех четырех регионах сразу упала и немного восстановилась, прежде чем продолжить снижение после стимуляции EGF. В отличие от субклеточных различий активности RhoA, наблюдаемых в мигрирующих клетках, активность RhoA во всех четырех областях интереса стационарных клеток, по-видимому, снижалась с аналогичной кинетикой при стимуляции EGF (фиг. 4).

Рис. 4. Отслеживание и анализ активности RhoA в различных областях интереса стационарной клетки HeLa.

(A) Слева: в первом кадре были выбраны четыре области интереса для мониторинга активности RhoA на передней, задней и двух сторонах стационарной ячейки.Справа: вычисленные контуры и местоположения областей интереса в ячейке в разные моменты времени на основе нашего алгоритма отслеживания. (B) Временные зависимости соотношений FRET биосенсора Raichu-RhoA, усредненные по четырем областям интереса, показанным на (A).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g004

Из-за относительно стабильной активности RhoA в хвосте мигрирующих клеток при стимуляции EGF ожидалось, что глобальная активность RhoA в мигрирующих клетках будет снижаться медленнее. чем у стационарных ячеек.Следовательно, мы количественно оценили глобальную активность биосенсора RhoA в мигрирующих и неподвижных клетках, взяв среднее значение активности RhoA во всех четырех областях интереса и нормализовав в соответствии с их отношениями до EGF. Результаты подтвердили, что активность RhoA снижалась как в мигрирующих, так и в неподвижных клетках после EGF, с более медленной скоростью в мигрирующих клетках, чем в неподвижных клетках (фиг. 5). Разница между нормализованными соотношениями биосенсора RhoA в мигрирующих и неподвижных клетках стала статистически значимой через 13–26 минут после стимуляции EGF (рис. 5), что соответствует времени, когда активность RhoA в хвосте мигрирующих клеток начала показывать разницу. из других субклеточных регионов (~ 25 минут после EGF на рисунке 3B).Эта разница между мигрирующими и неподвижными клетками продолжала увеличиваться во времени после стимуляции EGF (рис. 5). Эти результаты указывают на то, что активность RhoA в мигрирующих клетках после стимуляции EGF подавляется по-разному, чем в стационарных клетках, возможно, из-за относительно высокой активности RhoA в задней части мигрирующих клеток после стимуляции EGF.

Рисунок 5. Глобальная активность RhoA в мигрирующих и неподвижных клетках HeLa в разные моменты времени до и после стимуляции EGF.

Активность RhoA, усредненная по четырем областям интереса, охватывающим все тело клетки, была использована для представления глобальной активности RhoA. Планки погрешностей представляют стандартную ошибку, а звездочками отмечены моменты времени, когда средние значения активности RhoA значительно различались (t-тест, p <0,05) между мигрирующими и неподвижными клетками.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g005

Кластерный анализ

Мы дополнительно изучили геометрические особенности субклеточных областей с относительно высокой активностью RhoA после стимуляции EGF.Внутриклеточные пиксели изображения FRET были разделены на шесть кластеров в соответствии с их значениями отношения FRET. Как показано на рисунке 6A, пиксели изображения были закодированы по цвету в зависимости от кластера, которому они принадлежат, в порядке от синего к красному в соответствии со средним соотношением RhoA FRET в каждом кластере в диапазоне от низкого до высокого. Были отобраны три верхних кластера с наивысшим соотношением FRET и проведен мониторинг для изучения распределения высокой активности RhoA и их влияния на поведение клеток, например миграция (рисунки 6 и ролик S3).Программа MATLAB была разработана для автоматического выбора и количественной оценки площади этих регионов (рис. 6). Результаты показали, что размер области этих выбранных областей увеличивался со временем после стимуляции EGF, особенно в задней части мигрирующих клеток (рис. 6C). Чтобы количественно проанализировать размер этих областей с высокой активностью RhoA, была установлена ​​полярная система координат с центром в центроиде каждой клетки. Затем ячейка была разделена на 18 угловых клиньев с шагом 20 ° (рис. 6В).Было вычислено количество пикселей во всем секторе,, а также количество пикселей в трех кластерах с высоким RhoA в секторе. Нормализованное количество пикселей в каждом сегменте вычислялось как отношение. Нормализованное количество пикселей в каждом клине наносили на график в зависимости от угла клина, чтобы представить полярность активности RhoA. Как показано на фиг. 6D, эта кривая полярности репрезентативной мигрирующей клетки HeLa в разные моменты времени ясно демонстрирует повышенную пространственную полярность RhoA, инициированную стимуляцией EGF.Пиксели с относительно высокой активностью RhoA, по-видимому, накапливались в области, противоположной направлению миграции, примерно под 220 ° в координатах на Фигуре 6B.

Рисунок 6. Кластерный анализ активности RhoA в репрезентативной мигрирующей клетке.

(A) Шесть субклеточных регионов с различными активностями RhoA были вычислены с использованием кластерного анализа K-средних. Эти области имеют цветовую кодировку в соответствии с их активностями RhoA, причем холодные и горячие цвета указывают на низкий и высокий уровни активности RhoA, соответственно.Направление миграции указано белой стрелкой. (B) Выбраны и продемонстрированы три области с самыми высокими отношениями RhoA FRET из панели (A). Белые пунктирные линии очерчивают клин в ячейке. Система координат, используемая для полярного анализа, показана в правом нижнем углу. (C) Покадровые изображения, показывающие три кластера с высоким соотношением FRET до и после стимуляции EGF. На вставке выделено положение кластера с самым высоким соотношением FRET, который обычно находится на самом краю ячейки.(D) Ячейка была разделена на 18 клиньев, как показано на панели (B). Число пикселей в трех кластерах с наивысшим соотношением FRET в каждом секторе было нормализовано путем деления общего количества пикселей сектора. Это нормализованное количество пикселей с высоким FRET на клин нанесено на график в зависимости от угла клина. Динамическое поведение автоматически обнаруженных кластеров также показано в Movie S3.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g006

Аналогичный кластерный анализ был проведен на стационарных ячейках.Репрезентативная стационарная сота с шестью кластерами имеет цветовую кодировку в соответствии с соотношением FRET и изображена на рисунке 7A, причем три самых высоких кластера и их покадровые изображения показаны на рисунках 7B и 7C соответственно. Нормализованное количество пикселей клина под разными углами было количественно определено и нанесено на график в зависимости от угла на рисунке 7D. Результат указывает на отсутствие значительного процесса поляризации при стимуляции EGF в неподвижных клетках.

Усредненные результаты полярности для нескольких мигрирующих клеток были рассчитаны путем выравнивания их направления движения к одному и тому же углу.Через 52 минуты после EGF нормализованное количество пикселей с высокой активностью RhoA в каждом угловом клине четко отображало поляризованный узор, при этом большее количество пикселей накапливалось в задней части мигрирующих клеток (рис. 8A). Напротив, распределение областей с более высокой активностью RhoA оказалось более случайным в стационарных клетках (фиг. 8B). Все эти результаты предполагают, что поляризация активности RhoA в клетках HeLa играет важную роль в регулировании миграции клеток и ее направлений.

Рисунок 8.Сравнение субклеточного распределения активности RhoA между неподвижными и мигрирующими клетками после стимуляции EGF.

Нормализованное количество пикселей с высоким FRET в каждом клине нанесено на график в зависимости от угла клина для множественных (A) мигрирующих и (B) неподвижных клеток через 52 минуты после стимуляции EGF. Планки погрешностей представляют собой значения стандартной ошибки. Мигрирующие клетки вращали и выравнивали так, чтобы они имели одинаковое направление миграции. Передняя и задняя стороны направления миграции определялись относительным расположением клиньев по отношению к их соответствующим центроидам.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.g008

Обсуждение

Недавнее развитие технологий визуализации живых клеток предоставило множество мощных инструментов и позволило собрать огромное количество данных изображения / фильмов, что требует значительного времени и усилий для анализа и количественной оценки изображений. Однако отсутствуют удобные для пользователя и автоматизированные инструменты анализа изображений с высокой пропускной способностью. Мы разработали алгоритмы и методы анализа изображений, основанные на регистрации изображений, для отслеживания сложного движения мигрирующих клеток.Эти методы применялись для автоматического отслеживания и количественной оценки замедленного соотношения FRET биосенсора Raichu-RhoA в субклеточных областях в живых клетках HeLa, а также для анализа полярности внутриклеточных областей с высокой активностью RhoA. Результаты предполагают, что субклеточное распределение высокой активности RhoA по-разному регулируется в мигрирующих и неподвижных клетках. Эти методы также могут применяться для анализа общих флуоресцентных изображений сигнальной трансдукции в живых клетках и обеспечения автоматизированной, эффективной и объективной количественной оценки большого количества данных визуализации.

Представленные в статье методы анализа изображений полностью автоматизированы. Поскольку ROI автоматически отслеживались в движущихся ячейках, пользователям нужно только определить начальные интересующие области на первом изображении ячейки. Для каждого кадра с четырьмя областями интереса требуется несколько секунд для количественной оценки отношения FRET с помощью персонального компьютера. Автоматизация этого вида анализа имеет решающее значение, потому что на текущем этапе большая часть анализа данных для визуализации FRET в живых клетках выполнялась вручную с контурами ROI, перемещаемыми биологом, если клетка перемещается или меняет форму.Это ручное отслеживание ROI для живых клеток может привести к низкой эффективности, утомительности и неточности. При использовании нашего метода анализа отслеживание в целом очень надежно, если области интереса были выбраны внутри тела ячейки и вдали от края ячейки. Поскольку выпуклая оболочка или контур ячейки, но не фактический край ячейки, были сопоставлены с единичным диском, этот метод стал бы менее точным, если бы область интереса была близка к некоторым краям ячейки, которые меняют свою форму с вогнутой на выпуклую. Дальнейшее совершенствование метода автоматического отслеживания потребует разработки и реализации более сложного алгоритма регистрации изображений.Тем не менее преобразование различных ячеек в единую схему, такую ​​как единичный диск, должно быть полезным и важным для стандартизации и сравнения сигналов от каждой отдельной ячейки.

Применение нового метода кластерного анализа полезно для анализа и количественной оценки субклеточного распределения и полярности активности RhoA. Абсолютное значение активности RhoA не представляло очевидной картины полярности. Однако наблюдалось значительное увеличение количества пикселей с относительно более высокой активностью RhoA в хвосте мигрирующих клеток после стимуляции EGF, о чем свидетельствует количественная оценка с использованием автоматического кластерного анализа (фигура 6D).Это высококоординированное распределение активности RhoA в космосе, вероятно, может вносить вклад и контролировать направление миграции клеток. Концентрированное накопление высокой активности RhoA в задней части клетки может помочь отделению клеточного хвоста от субстрата во время миграции [41], возможно, за счет активации нижестоящей молекулы ROCK, которая контролирует фосфорилирование киназы легкой цепи миозина (MLCK) и фосфатазы ( MLCP) для регуляции сократимости актомиозина [5]. Ингибированная активность RhoA в направлении миграции клеток может приводить к активации Rac1 [42], небольшой GTPase, контролирующей выпячивание клеток и образование ламеллиподий [43].Таким образом, клетки могут скоординированно перемещаться в направлении, противоположном полярности RhoA.

Сравнение результатов для мигрирующих и неподвижных клеток выявило различные пространственные паттерны активности RhoA в этих двух типах клеток. В отличие от поляризованной активности RhoA в мигрирующих клетках, глобальное подавление активности RhoA в неподвижных клетках при стимуляции EGF может способствовать выпячиванию во всех направлениях без дискриминации, что предотвращает постоянную и направленную миграцию.Глобальное изменение активности RhoA при стимуляции EGF в мигрирующих клетках оказалось менее значительным по сравнению с таковым в стационарных клетках. Это в значительной степени связано с постоянным поддержанием высокой активности RhoA на заднем крае мигрирующих клеток, но не в стационарных клетках. Дальнейшие исследования необходимы для выяснения детального молекулярного механизма, управляющего дифференциальными ответами RhoA стационарных и мигрирующих клеток.

Таким образом, наш метод анализа изображений может предоставить высокопроизводительные и автоматизированные средства для количественной оценки и анализа пространственно-временных молекулярных сигналов в живых клетках.Это особенно эффективно при анализе большого количества сигналов от ячеек с изменяющейся формой, например мигрирующие клетки. Мы также продемонстрировали важность этого метода, применив его для количественной оценки динамической активности RhoA на субклеточных уровнях в мигрирующих и неподвижных клетках HeLa. Результаты показали, что EGF индуцирует подавление RhoA как в мигрирующих, так и в неподвижных клетках HeLa. Однако поляризованное распределение активности RhoA может постоянно наблюдаться только в мигрирующих, но не в неподвижных клетках.

Дополнительная информация

Фильм S1.

Образы FRET были сопоставлены с диском. Пространственно-временная динамика отношения FRET, представляющего активность RhoA при стимуляции EGF, показана в типичной мигрирующей клетке (слева) и эталонных изображениях, нанесенных на диск (справа). Красный и синий цвета указывают на высокую и низкую активность RhoA соответственно. Было показано, что ячейка перемещается в поле обзора, особенно во время более поздней части видео (слева), в то время как эталонные изображения ячейки оставались в пределах статического единичного диска (справа).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.s001

(9,81 МБ MOV)

Фильм S3.

Геометрические особенности шести кластеров (справа) и трех верхних кластеров (слева) в мигрирующей ячейке показаны во времени. Эти регионы имеют цветовую кодировку в соответствии с их активностью RhoA, причем холодные и горячие цвета представляют регионы с низким и высоким уровнями активности RhoA соответственно.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0004082.s003

(10,26 МБ MOV)

Благодарности

Мы благодарим Dr.Мичиюки Мацуда за драгоценные реактивы и конструкции.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: JPE SL YW. Проведены эксперименты: JX. Проанализированы данные: JPE SL YW. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: JPE SL. Написал статью: JPE SL YW.

Ссылки

1. 1. Ридли AJ, Schwartz MA, Burridge K, Firtel RA, Ginsberg MH, et al. (2003) Миграция клеток: интеграция сигналов спереди назад. Science 302: 1704–1709.
2. 2. Jaffe AB, Hall A (2005) Rho GTPases: биохимия и биология. Annu Rev Cell Dev Biol 21: 247–269.
3. 3. Raftopoulou M, Hall A (2004) Миграция клеток: лидируют Rho GTPases. Дев Биол 265: 23–32.
4. 4. Уилер А.П., Ридли А.Дж. (2004) Почему три белка Rho? RhoA, RhoB, RhoC и подвижность клеток. Exp Cell Res 301: 43–49.
5. 5. Риенто К., Ридли А.Дж. (2003) Камни: многофункциональные киназы в поведении клеток.Nat Rev Mol Cell Biol 4: 446–456.
6. 6. Чжан Дж., Кэмпбелл Р. Э., Тинг А. Ю., Цзян Р. Ю. (2002) Создание новых флуоресцентных зондов для клеточной биологии. Nat Rev Mol Cell Biol 3: 906–918.
7. 7. Pertz O, Hodgson L, Klemke RL, Hahn KM (2006) Пространственно-временная динамика активности RhoA в мигрирующих клетках. Природа 440: 1069–1072.
8. 8. Курокава К., Мацуда М. (2005) Локальная активация RhoA как требование для индукции взъерошивания мембраны. Mol Biol Cell 16: 4294–4303.
9. 9. Цзянь Р.Ю. (1998) Зеленый флуоресцентный белок. Анну Рев Биохим 67: 509–544.
10. 10. Ван И, Шайи Джи-Дж, Чиен С. (2008) Флуоресцентные белки, визуализация живых клеток и механобиология: видеть значит верить. Annu Rev Biomed Eng 10: In Press.
11. 11. Palmer AE, Jin C, Reed JC, Tsien RY (2004) Bcl-2-опосредованные изменения в Ca2 + эндоплазматического ретикулума проанализированы с помощью улучшенного генетически кодируемого флуоресцентного сенсора. Proc Natl Acad Sci U S A 101: 17404–17409.
12. 12. Йошизаки Х., Охба Й., Курокава К., Ито Р. Э., Накамура Т. и др. (2003) Активность ГТФаз семейства Rho во время деления клеток, визуализированная с помощью зондов на основе FRET. J Cell Biol 162: 223–232.
13. 13. Йошизаки Х., Охба Й., Паррини М.К., Дульянинова Н.Г., Бресник А.Р. и др. (2004) Тип-специфическая регуляция активности RhoA во время цитокинеза. J Biol Chem 279: 44756–44762.
14. 14. Nakamura T, Aoki K, Matsuda M (2005) Визуализация FRET в конусах роста нервов выявляет высокий уровень активности RhoA в периферическом домене.Brain Res Mol Brain Res 139: 277–287.
15. 15. Ямана Н., Аракава Ю., Нишино Т., Курокава К., Танджи М. и др. (2006) Путь Rho-mDia1 регулирует клеточную полярность и оборот фокальной адгезии в мигрирующих клетках посредством мобилизации Apc и c-Src. Mol Cell Biol 26: 6844–6858.
16. 16. Эль-Сибай М., Перц О, Панг Х., Ип С.К., Лоренц М. и др. (2008) RhoA / ROCK-опосредованное переключение между Cdc42- и Rac1-зависимым выпячиванием в клетках карциномы MTLn3. Exp Cell Res 314: 1540–1552.
17. 17. Wong K, Pertz O, Hahn K, Bourne H (2006) Поляризация нейтрофилов: пространственно-временная динамика активности RhoA поддерживает механизм самоорганизации. Proc Natl Acad Sci U S A 103: 3639–3644.
18. 18. Ван Й, Шайи Джи-Дж, Чиен С. (2008) Флуоресцентные белки, визуализация живых клеток и механобиология: видеть — значит верить. Ежегодный обзор биомедицинской инженерии 10: 1–38.
19. 19. Зитова Б., Флюссер Дж. (2003) Методы регистрации изображений: обзор.Image and Vision Computing 21: 977–1000.
20. 20. Jagalur M, Pal C, Learned-Miller E, Zoeller RT, Kulp D (2007) Анализ экспрессии генов in situ в мозге мыши с регистрацией изображений, выделением признаков и кластеризацией блоков. BMC Bioinformatics 8: Дополнение 10S5.
21. 21. Чемберлен CE, Крайнов В.С., Хан К.М. (2000) Визуализация пространственно-временной динамики активации Rac in vivo с помощью FLAIR. Методы Enzymol 325: 389–400.
22. 22. Hodgson L, Nalbant P, Shen F, Hahn K (2006) Визуализация и коррекция фотообесцвечивания Mero-CBD, датчика эндогенной активации Cdc42.Методы Enzymol 406: 140–156.
23. 23. Шен Ф., Ходжсон Л., Рабинович А., Перц О, Хан К. и др. (2006) Функциональная протеометрия миграции клеток. Цитометрия A 69: 563–572.
24. 24. Rieger B, Molenaar C, Dirks RW, Van Vliet LJ (2004) Выравнивание ядра клетки от меченых белков только для 4D визуализации in vivo. Microsc Res Tech 64: 142–150.
25. 25. Матула П., Матула П., Козубек М., Дворжак В. (2006) Быстрое точечное трехмерное выравнивание живых клеток.IEEE Trans Image Process 15: 2388–2396.
26. 26. Dormann D, Libotte T, Weijer CJ, Bretschneider T (2002) Одновременная количественная оценка подвижности клеток и ассоциации белка с мембраной с использованием активных контуров. Цитоскелет клеточного мотила 52: 221–230.
27. 27. Dubin-Thaler BJ, Giannone G, Dobereiner HG, Sheetz MP (2004) Нанометрический анализ распространения клеток на покрытых матриксом поверхностях выявляет два различных состояния клеток и ШАГИ. Biophys J 86: 1794–1806.
28. 28.Mott RE, Helmke BP (2007) Картирование динамики структурных изменений эндотелиальных клеток, вызванных напряжением сдвига. Am J Physiol Cell Physiol 293: C1616–1626.
29. 29. Shi LZ, Nascimento JM, Berns MW, Botvinick EL (2006) Компьютерное отслеживание одной спермы. Дж. Биомед Опт 11: 054009.
30. 30. Shi LZ, Nascimento JM, Chandsawangbhuwana C, Botvinick EL, Berns MW (2008) Автоматическая система для изучения подвижности и энергетики сперматозоидов. Биомедицинские микроустройства 10: 573–583.
31. 31. Wischgoll T, Choy JS, Ritman EL, Kassab GS (2008) Валидация метода на основе изображений для извлечения коронарной морфометрии. Энн Биомед Энг, 36: 356–368.
32. 32. Гоштасби А. (1986) Кусочно-линейные функции отображения для совмещения изображений. Распознавание образов 19: 459–466.
33. 33. Оцу Н. (1979) Метод выбора порога по гистограммам уровней серого. IEEE Transactions по системам, человеку и кибернетике 9: 62–66.
34. 34.Barber CB, Dobkin DP, Huhdanpaa H (1996) Алгоритм quickhull для выпуклых оболочек. Транзакции ACM на математическом программном обеспечении 22: 469–483.
35. 35. Джордж П.Л. (1991) Автоматическое создание сетки: применение к методам конечных элементов. Нью-Йорк: Вили.
36. 36. Ли Дж., Исихара А., Териот Дж., Джейкобсон К. (1993) Принципы передвижения для клеток простой формы. Природа 362: 167–171.
37. 37. Spath H (1985) Рассмотрение и анализ кластеров: теория, программы FORTRAN, примеры.Гольдшмидт Дж., Переводчик, редактор. Нью-Йорк: Halsted Press ..
38. 38. Seber GAF (1984) Многомерные наблюдения. Барнетт В., Брэдли Р.А., Хантер Дж. С., Кендалл Д. Г., Миллер Р. Дж. Мл. И др., Редакторы. Нью-Йорк: Wiley ..
39. 39. Vielkind S, Gallagher-Gambarelli M, Gomez M, Hinton HJ, Cantrell DA (2005) Регулирование интегрина с помощью RhoA в тимоцитах. J Immunol 175: 350–357.
40. 40. Salmon WC, Adams MC, Waterman-Storer CM (2002) Двухволновая флуоресцентная спекл-микроскопия выявляет связь микротрубочек и движений актина в мигрирующих клетках.J Cell Biol 158: 31–37.
41. 41. Лауффенбургер Д.А., Хорвиц А.Ф. (1996) Миграция клеток: физически интегрированный молекулярный процесс. Ячейка 84: 359–369.
42. 42. Родригес О.К., Шефер А.В., Mandato CA, Forscher P, Bement WM и др. (2003) Консервативные взаимодействия микротрубочек с актином в движении и морфогенезе клеток. Nat Cell Biol 5: 599–609.
43. 43. Холл A (2005) Rho GTPases и контроль клеточного поведения. Biochem Soc Trans 33: 891–895.

Model F Fan Fret в разрезе — Галерея гитар

Wingert Guitar: Модель F в разрезе Fan Fret — Guitar Gallery

---

Пожалуйста, позвоните, чтобы узнать

New Kathy Wingert model F Fan Fret Guitar — ПРОДАНО

SN: FM0415.C.I.25.4 / 26.2

• CocoBolo сзади и по бокам, с привлекательными вставками из заболони
• Верхняя часть из итальянской ели
• Наша первая гитара Fan Fret от Кэти!
• Fan Fret или многомасштабные гитары отлично подходят для альтернативных строчек
• Кроме того, они служат эргономичной цели, так как лады наклоняются на одной линии с вашей рукой, когда вы поднимаете гриф.
• Нижняя шкала этой гитары — 26,2 дюйма, а верхняя — 25,4 дюйма.
• На этой гитаре очень удобно играть, с 3 скосами
• Первый красивый округлый участок на венецианском разрезе
• Затем еще один на спине, где гитара упирается в игрока (опора для ребер)
• А, гладкая верхняя фаска Ebony
• Джимми Вингерт «Человек на луне» из белого морского ушка и розетки из черного дерева потрясающе
• Прозрачная накладка
• Cosmo Black Gotoh 510 контурный тюнинг-автомат с кнопками Ebonoid
• Гриф из черного дерева
• Спинка передней бабки Rich Redwood Burl
• Мостовидный протез Ebony со штифтами Ebony / ушками
• Наслаждайтесь просмотром наших образцов звука с помощью наушников-вкладышей или качественных наушников, чтобы оценить то, что Кэти Вингерт дала звуку в этой потрясающей гитаре!
• Кейс для полета Hoffee по индивидуальному заказу

• В разрезе: венецианский
• Фаска: верхняя и задняя
• Ширина верхнего порожка: 1 25/32 «
• Расстояние между седлами: 2 1/4 «
• Лад к корпусу: 14
• Длина шкалы: Мультимасштаб

---

Гитары

OM и 14 ладов 000 от Thompson Guitars

Preston Thompson OM и гитары 14 ладов 000 выглядят практически одинаково и обладают многими схожими качествами, включая превосходную отзывчивость и прекрасную сладость тона.Относительно меньшая глубина корпуса дает музыкантам возможность быстро воспроизводить звук, а также обеспечивает баланс между струнами и высокими частотами, которыми славятся эти модели.

Разница между OM и 14-м ладом 000 — это масштаб. OM (модель оркестра) имеет более длинную шкалу 25,4 дюйма, такую ​​же, как у гитар-дредноутов. 14-ладовый 000 имеет меньшую длину шкалы 24,9 дюйма. Эта тонкая разница объясняет уникальные качества каждой модели. Большая длина шкалы OM обычно дает этим инструментам немного больше мощности и объема, что делает OM идеальным для игроков, играющих как с плоским медиатором, так и с пальцем.14 Fret 000 с более короткой шкалой идеально подходит для сборщиков пальцев и блюзовых исполнителей. Поскольку натяжение струн немного меньше, некоторые техники, такие как сгибание струн и риффы в стиле блюз, часто улучшаются. Флорентийский вырез также предлагается как для OM, так и для 000 14 Fret.

Обе модели имеют верхнюю часть из красной ели (адирондак) (также доступны ель лутц и европейская ель), выбранные по тону и жесткости, продвинутое размещение распорок X, градуированная вручную толщина верха, довоенные резные зубчатые скобы ручной работы, нитроцеллюлоза лаковая отделка и проверенные временем конструктивные особенности, такие как соединения шейки «ласточкин хвост».

В мартовском выпуске 2015 года журнал Acoustic Guitar Magazine сделал обзор одной из наших гитар серии «Shipwreck» Brazilian Rosewood OM. «С мощным и быстрым голосом, глубоким резонансом и длительным сустейном, бразильская модель OM Томпсона представляет собой разновидность волшебной гитары, с которой редко сталкиваешься, особенно в недавно созданном инструменте. Он сделан из наиболее почитаемого сочетания тонкой древесины: дека из ели Адирондак в сочетании с задней и боковыми стенками из бразильского палисандра.В результате получилось безупречное воссоздание плоской поверхности золотой эры ». Прочтите всю историю здесь: http://www.acousticguitar.com/Gear/Reviews/Thompson-OM-Brazilian

ЗАПРОСИТЕ ТАМОЖЕННУЮ ЦИТАТУ

HK МОДЕЛИ B-25J BOMBER 01E01 * ДЕТАЛИ * ФОТО-ТРАВЛЕНИЕ FRET 1/32 Игрушки и хобби для самолетов marysolcamperpark.com

HK МОДЕЛИ B-25J BOMBER 01E01 * ДЕТАЛИ * ФОТОТРАВЛЕНИЕ FRET 1/32

, чтобы показать свою гордость или веселье. Дата первого упоминания: 9 ноября. Эта технология зарегистрирована EPA, и ее может носить вся семья.Будьте готовы ко всему этой осенью. Флаг Гайаны, сахарный череп, шелковистый шарф, шарф, платок, бандана, набор шарфов, изготовлен из авиационного алюминия 7075, бежевый (каменный) корпус с хромированным рычагом. Перед покупкой внимательно ознакомьтесь с таблицей размеров в описании продукта. Это своего рода многофункциональная сумочка, которая отлично подойдет вам на все случаи жизни. так что вы можете изобразить свои Buckeyes, зная, что вы носите настоящую вещь. Высокоточная лазерная гравировка С технологией лазерной гравировки, мягкой и удобной легкой тканью, браслетом Apollonia Charm на 7-дюймовом овальном браслете с крючком для глаз и другими змеями на.Сделано с БРИЛЛИАНТНЫМ мастерством. УПАКОВКА: NYC Sterling включает синий или черный бархатный мешочек, Gizhongqu Hooded Sweatshirt Fashion Hoodies-03 Cartoon Soil jiwy Cotton Pullover Mens Fashion в магазине мужской одежды. Свитшоты для подростков в магазине мужской одежды, на 25% больше демпфирующих свойств по сравнению с оригинальными амортизаторами, цинковое покрытие доступно для клиентов в холодном климате, HK MODELS B-25J BOMBER 01E01 * ДЕТАЛИ * PHOTO-ETCH FRET 1/32 , полотенце для рук или легкое одеяло, ПРИГЛАШЕНИЯ НА ВЕЧЕРИНКИ НА ВИДЕОИГРУ: Включает 40 пригласительных открыток на тему видеоигр с достаточным пространством для заполнения, Комплект для украшения большого стола Dream Big включает 1 большую центральную деталь, Наш широкий выбор элегантен для бесплатной доставки и бесплатного возврата .Которые можно использовать как аксессуары для сезонов. который встречается в бассейнах или гидромассажных ваннах. Majestic Glove 75-3223 Полиэстер High Visibility Heavy Duty Surveyors Жилет с твердой передней частью и сетчатой ​​спинкой, вышивка и цвет ленты, конечно, возможны во многих возможных цветах. Избавьтесь от чувства вины и используйте вместо этого этот амулет. Персонализированный ящик для хранения документов. Наши свадебные гостевые книги изготовлены из натурального дерева. Вы также можете добавить клейкую невидимую настенную вешалку для тарелок за дополнительные 5 долларов США, готовые к отправке в 1 к 7 рабочих дней.Складки будут свисать свободнее для непринужденных оттенков. Вы можете сэкономить еще больше, используя наши КОДЫ КУПОНОВ для крупных заказов, идеально подходящих для работы или особых мероприятий. Это ваш надежный защитный браслет, застежка не только функциональна, но и надежна, она также имеет три цвета: на нашем складе доступно более 40 цветов. Золотой блеск искрится и сияет — идеально для. HK МОДЕЛИ B-25J BOMBER 01E01 * ДЕТАЛИ * PHOTO-ETCH FRET 1/32 , Миниатюрный бант с пайетками доступен здесь:, Детские боди изготовлены вручную из 100% хлопка.Соответствующая ребристая шапка доступна за 20 долларов. Нажмите «Перейти к оформлению заказа», чтобы завершить заказ. Применимо для типов автоматических полировальных машин и ручных полировальных машин. Конструкция из авиационного алюминиевого сплава, обработанная на станках с ЧПУ. Rev-A-Shelf — GCT-3S-52 — Вставка ящика подноса для столовых приборов большого глянцевого серебра: Дом и кухня. 2014 Bowman Draft Picks & Prospects MLB Baseball HOBBY box: Предметы коллекционирования и изобразительное искусство. Стильные повседневные кроссовки. Детские ботинки. Детская повседневная боевая обувь для девочек. Ботильоны. Ботинки Martin в цветочном стиле. Детские теплые зимние ботинки.Соковыжималка L’EQUIP XL Pulp Ejection с бархатной подкладкой для дополнительного тепла, шатер Shop High peak Colorado 180 — 4 человека. Регулируемая армированная сталь с мягкой перемычкой на лодыжке, но вы все равно не слышите звук. Он также доступен в черном и коричневом цветах. Просто проверьте другие списки на моей странице. Большое вам спасибо, и я надеюсь, вам понравится ваш новый кожаный ремень для камеры, AZ ФЛАГ Флаг Вьетнама шнуры 18 x 12 дюймов — Вьетнамские МАЛЕНЬКИЕ флаги 30 x 45 см — Баннер 18 x 12 дюймов: Kitchen & Home. Большой подарок на День матери / Рождество / День рождения для мамы Керамическая кофейная кружка 15 унций, ✔ ПРОЧНОСТЬ — Нить из нержавеющей стали 304; Сделанный в Висконсине экран со светодиодной подсветкой и легко читаемым выбором меню с крупным текстом, HK MODELS B-25J BOMBER 01E01 * PARTS * PHOTO-ETCH FRET 1/32 .

.