Характеристики джентра: Daewoo Gentra — обзор, цены, видео, технические характеристики Дэу Джентра

Содержание

Технические характеристики Chevrolet Gentra » Авто Узбекистан GM-UZBEKISTAN, Шевроле, Ман-авто, Исузу, Равон в Узбекистане

Chevrolet Gentra - это тот автомобиль, внешний вид которого не оставит равнодушным ни одного автолюбителя. Правильные пропорции, обтекаемые формы, рельефные линии гармонично сочетаются в этом автомобиле, имеющем респектабельный интерьер и экстерьер. Gentra с удобством вместит 5 человек в современном лаконичном салоне. Приборная панель отличается чувством меры и разнообразием вариантов. Расположение приборов с хромированными элементами тщательно продумано.Его ходовые качества тщательно протестированы и доведены до совершенства.

 

Обтекаемый современный дизайн кузова Chevrolet Gentra — заслуга знаменитого итальянского автомобильного ателье Pininfarina. 4-дверный Жентра с элегантным дизайном и просторным салоном — это не просто семейный седан,это наглядное подтверждение того, что практичный автомобиль не требует компромиссов. Это воплощение качества от и до, с массой дополнительных функций и великолепной управляемостью.

Внешний вид автомобиля создавался итальянскими специалистами, поэтому смотрится он довольно эффектно. Главной особенностью модели являются плавные, округлые линии, благодаря которым она кажется намного больше и более объемной, чем на самом деле. При этом во внешнем облике присутствуют динамичность и благородство, присущие автомобилям более дорогого класса. Все детали экстерьера, начиная с 15-дюймовых дисков и заканчивая оригинальным боковым остеклением, отличаются качеством и итальянской утонченностью.

Благодаря новой платформе J200, Шевроле Жентра получился просторным автомобилем, в котором будет комфортно себя чувствовать человек любой комплекции.

 

Например, у него самый широкий кузов среди седанов – 1,725 м и самый длинный кузов среди хетчбеков – 4,295 м.

Отличный обзор делает поездку более безопасной, а тихая работа двигателя и хорошая шумоизоляция - более комфортной.

Технические характеристики Chevrolet Gentra:

 

Технические характеристики автомобиля Gentra

 МОДЕЛЬ

Gentra

 

 МОДИФИКАЦИЯ

SX (MT,AT)

CDX (MT,AT)

 

 КУЗОВ

 

 

 

 Тип

 

4х-дверныйNotchback

 Конструкция/материал

несущая/сталь

 Количество посадочных мест

 РАЗМЕРЫ (мм)

 Внешние

длина

4515

 

ширина

1725

 

высота

1445 

 Колесная база

2600

 Колея (передняя/задняя)

1480/1480

 ДВИГАТЕЛЬ

 Тип

B15D2  DOHC   4-хтактный бензиновый впрыск топлива 

 Рабочий объем (см. куб)

1485 

 Количество цилиндров

4 в ряд

 Диаметр  цилиндра и ход поршня (мм)

74,7/84,7

 Степень сжатия

10.2

Максимальная мощность (кВт/об/мин)

79/5800

 Максимальный крутящий момент (Нм/мин -1)

141/3800

 ТРАНСМИССИЯ 

 Коробка передач

MT-5/AT-6

MT-5/AT-6

 Сцепление

сух, однодисковое. / -

сух, однодисковое. / - 

 Главное передаточное число

4.467 /4.11

4.467 /4.11 

 ОБЪЕМЫ и МАССЫ

 Объем топливного бака (л)

60

 Объем багажника (л)

405-1225 

 Аккумулятор 12V (A/ч)

55

 Снаряженная масса автомобиля (кг)

1245~ 1300 

 Полная масса автомобиля (кг)

1660

 ДИНАМИЧЕСКИЕ ХАРАТЕРИСТИКИ 

 Максимальная скорость (км/ч)

180 (на 5-ой передаче) / -

180 (на 5-ой передаче) / - 

 Разгон до 0 ~ 100 км/ч (сек.)

В процессе испытания

 РУЛЕВОЕ УПРАВЛЕНИЕ 

 Тип

шестерня и рейка

 Минимальный радиус поворота (м)

5. 2/5.5 

 ТОРМОЗА 

 Тип

X-тип 

 Передние/задние

дисковые/дисковые

 ПОДВЕСКА 

 Передняя

стойка Макферсона

 Задняя

Независимая с продольным рычагом

 КОЛЕСА и ШИНЫ

 Колесо

14 X 5.5, STEEL,. 15 X 6, STEEL

14 X 5.5, STEEL,.15 X 6, ALUMINUM (LMA)

Шина

185/65R14: 195/55R15

 КОНТРОЛЬНЫЙ РАСХОД ТОПЛИВА (Л/100 км)

 - 90 км/ч

В процессе испытания

 

 - 120 км/ч

 

 - в городском цикле

 

 

Поделитесь информацией с друзьями, нажав КЛАСС и ЛАЙК!

Равон Джентра (Ravon Gentra) характеристики в таблице

Бренд Ravon, ставший продолжателем традиций Daewoo и General Motors на отечественном рынке, активно занимается выпуском седанов, стремясь улучшить и расширить их функционал. Комплектующаяся на базе узбекского завода машина Равон Джентра характеристики которой соответствуют качеству GM-овских продуктов, ориентированных на бюджетный сегмент авторынка, является рестайлинговой версией Chevrolet Lacetti.

Эта модель была снята с производства в 2012 году, но благодаря стараниям GMUzbekistan вернулась в строй под другим именем и логотипом. Кузовная часть легковушки претерпела незначительные изменения, ориентированные на усовершенствование показателей аэродинамики автомобиля.

Поставки автомобиля на российский рынок прекращены.

Равон Джентра характеристики и преимущества

Под капотом железного коня прекрасно сосуществуют 4-х цилиндровый бензиновый двигатель объёмом 1,5 литра, коробка передач в 5-ти ступенчатом механическом варианте или 6-ти ступенчатом автоматическом и дисковая тормозная система ABS. Облегчению управления способствует механизм гидроусиления руля.

На сотню километров в условиях городских дорог он съедает около 9.5 литров, двигаясь на коробке автомат, механика снижает потребление топлива примерно на один литр.

  • Смотрите фото модели Ravon Gentra

Машина Равон Джентра характеристики которой демонстрируют её качество и надёжность, доступна для приобретения в официальных дилерских салонах в трёх различных комплектациях: Комфорт, Оптимум и Элегант.

Отличия компоновки не затрагивают техническую платформу автомобиля. В любой из комплектаций под капотом располагаются выше заявленные агрегаты. Вариативность представлена лишь набором дополнительных опций в салоне.

Ravon Gentra технические характеристики в таблице

Кузов
Количество дверей 4
Количество посадочных мест 5
Тип Седан
Размеры
Высота, мм 1445
Длина, мм 4515
Колесная база, мм 2600
Колея (передняя/задняя), мм 1480/1480
Ширина, мм 1725
Двигатель
Макс. крутящий момент, Нм/об. мин 141 при 3800
Максимальная мощность, кВт 107,4л.с./79 кВт при 5800 об/мин
Механизм газораспределения DOHC, с двумя распредвалами в головке цилиндров, 16 клапанный с цепным приводом
Модель B15D2
Рабочий объем, см.куб 1485
Система питания Распределенный впрыск топлива
Тип Бензиновый
Число и расположение цилиндров Четырехцилиндровый, рядный
Трансмиссия
Тип привода Передний
Тип сцепления сухое, однодисковое
Тип трансмиссии 5 МКПП/6 АКПП
Объем/Масса
Объем багажника, л 405/1225
Объем топливного бака, л 60
Разрешенная максимальная масса, кг 1660/1680
Снаряженная масса автомобиля, кг 1245/1300
Динамика
Максимальная скорость, км/ч 180
Разгон до 100 км/ч 13 с
Тормоза
Передние/Задние Дисковые вентилируемые/Дисковые
Расход топлива
Город 8. 5/9.5
Смешанный цикл 7/7.5

Daewoo Gentra - ДЭУ Джентра - Технические характеристики

Daewoo Gentra (c 2005 г.) — компактный переднеприводный автомобиль. В 2005—2011 годах выпускался южнокорейской компанией Daewoo. В 2013—2015 годах выпускался в Узбекистане компанией UzDaewooAuto. С 2016 года носит название Ravon Gentra.

Автомобиль Daewoo Gentra был разработан корейской компанией Daewoo на основе модели Daewoo Kalos. В 2005 году начался выпуск седана, в 2007 году — хэтчбека. Автомобили продавались только на рынке Южной Кореи, в другие страны модель экспортировалась под именем Chevrolet Aveo и другими названиями. В 2011 году Daewoo Gentra для корейского рынка также был переименован в Chevrolet Aveo.

В 2013 году на предприятии GM Uzbekistan началось производство седана Daewoo Gentra — модернизированного варианта модели Chevrolet Lacetti для рынков Узбекистана, России и других стран СНГ. От исходной модели автомобиль отличается оформлением передней части кузова (фары, передние крылья и капот заимствованы от Chevrolet Lacetti хетчбек, решетка радиатора и бампер - оригинальные), также у машины немного изменена конструкция подвески, что позволило увеличить дорожный просвет.

Daewoo Gentra оснащается 1,5-литровым бензиновым мотором мощностью 107 л. с., который выпускают на ташкентском моторном заводе GM Powertrain Uzbekistan. Коробки передач — механическая пятиступенчатая или автоматическая шестиступенчатая.

Продажи автомобиля Daewoo Gentra на российском рынке начались в сентябре 2013 года. На рынке Узбекистана модель продаётся под названием Chevrolet Lacetti.

С 2016 года автомобиль продается на российском рынке под именем Ravon Gentra.

Технические характеристики

Daewoo Gentra 1.5i R4 16V (106 Hp)
Тип кузоваСедан
Количество дверей4
Количество мест5
Расположение двигателя
Спереди, поперечно
Объем багажника максимальный1498 см3
Мощность106 л. с.
При оборотах5500
Крутящий момент137/4000 н*м
Система питанияРаспределенный впрыск
Наличие турбонадува-
Газораспределительный механизмdohc
Расположение цилиндровРядный
Количество цилиндров4
Диаметр цилиндра76.5 мм
Ход поршня81.5мм
Степень сжатия81.5
Количество клапанов на цилиндр4
ТопливоАИ-95
Кол-во передач (мех)5
Кол-во передач (авто)4
Передние тормозаДисковые
Задние тормозаБарабанные
АБСесть
Daewoo Gentra 1.6i R4 16V (109 Hp)
Тип кузоваСедан
Количество дверей4
Количество мест5
Расположение двигателяСпереди, поперечно
Объем багажника максимальный1598 см3
Мощность109 л.с.
При оборотах6200
Крутящий момент150/3500 н*м
Система питанияРаспределенный впрыск
Наличие турбонадува-
Газораспределительный механизмdohc
Расположение цилиндровРядный
Количество цилиндров4
Диаметр цилиндра79 мм
Ход поршня81. 5мм
Степень сжатия9
Количество клапанов на цилиндр4
ТопливоАИ-95
Кол-во передач (мех)5
Кол-во передач (авто)4
Передние тормозаДисковые
Задние тормозаБарабанные
АБСесть

Технические характеристики Шевроле Лачетти Chevrole Lachetti (Дэу Дженра)

М6 Х 1,0

4,1-8,1 Н•м (36-72 фунто-дюйма)

5,4-9,5 Н•м (48-84 фунто-дюйма)

-

М8 Х 1,25

8,1-17,6 Н•м (72-156 фунто-дюймов)

12,2-23,0 Н•м (108-204 фунто-дюйма)

16-30 Н•м (12-22 фунто-фута)

М10 Х 1,25

20-34 Н•м (15-25 фунто-футов)

27-46 Н•м (20-34 фунто-фута)

37-62 Н•м (27-46 фунто-футов)

М10 Х 1,5

19-34 Н•м (14-25 фунто-футов)

27-45 Н•м (20-33 фунто-фута)

37-60 Н•м (27-44 фунто-фута)

М12 Х 1,25

49-73 Н•м (36-54 фунто-фута)

61-91 Н•м (45-67 фунто-футов)

76-114 Н•м (56-84 фунто-фута)

М12 Х 1,75

45-69 Н•м (33-51 фунто-фут)

57-84 Н•м (42-62 фунто-фута)

72-107 Н•м (53-79 фунто-футов)

М14 Х 1,5

76-115 Н•м (56-85 фунто-футов)

94-140 Н•м (69-103 фунто-фута)

114-171 Н•м (84-126 фунто-футов)

М14 Х 2,0

72-107 Н•м (53-79 фунто-футов)

88-132 Н•м (65-97 фунто-футов)

107-160 Н•м (79-118 фунто-футов)

М16 Х 1,5

104-157 Н•м (77-116 фунто-футов)

136-203 Н•м (100-150 фунто-футов)

160-240 Н•м (118-177 фунто-футов)

М16 Х 2,0

100-149 Н•м (74-110 фунто-футов)

129-194 Н•м (95-143 фунто-фута)

153-229 Н•м (113-169 фунто-футов)

М18 Х 1,5

151-225 Н•м (111-166 фунто-футов)

195-293 Н•м (144-216 фунто-футов)

229-346 Н•м (169-255 фунто-футов)

М20 Х 1,5

206-311 Н•м (152-229 фунто-футов)

270-405 Н•м (199-299 фунто-футов)

317-476 Н•м (234-351 фунто-фут)

М22 Х 1,5

251-414 Н•м (185-305 фунто-футов)

363-544 Н•м (268-401 фунто-фут)

424-636 Н•м (313-469 фунто-футов)

М24 Х 2,0

359-540 Н•м (265-398 фунто-футов)

431-710 Н•м (318-524 фунто-фута)

555-831 Н•м (409-613 фунто-футов)

* Диаметр Х шаг в миллиметрах

Lacetti/Gentra цена, видео-обзор, характеристики и фотографии 2021 • Автострада

Реклама

Дизайн - 9

Комфорт - 9

Оснащение - 8.
7

Обслуживание и ремонт - 9.5

Цена/качество - 8

8.8

Комфортный и практичный автомобиль на морально устаревшей платформе.

User Rating: 3.61 ( 57 votes)

Джентру начали производить на заводе GM Uzbekistan в 2013 году. Новая модель пришла на смену Chevrolet Lacetti, которая собиралась в Узбекистане с 2008 года. Обновленная Ласетти – Жентра получила гибридный кузов – передняя часть ей досталась от хэтчбэка Lacetti, а корма от стандартного седана. Такой рестайлинг обошелся заводу GM в 23,4 млн. долларов США.

Реклама

Двигатель был заменен на локализованный в Ташкенте четырехцилиндровый силовой агрегат S‑TEC III L2C B15D2 мощностью 107 лошадиных сил. Точно такой же мотор устанавливается на Chevrolet Cobalt и новую Nexia R3.

Недавно UzAuto Motors (GM Uzbekistan) объявил о выпуске автомобилей в новом цвете за доплату в 5 млн. сумов. Теперь Nexia, Cobalt и Lacetti можно приобрести в матово-черном цвете.

Заключить договор можно во вех автосалонах Chevrolet в Узбекистане.

Chevrolet Lacetti в топовой комплектации L-ELEGANT AT PLUS матово-черного цвета.

Также, для контрактации доступны улучшенные PLUS комплектации автомобиля, куда входит кожаная отделка руля, обогрев сидений, а также обогрев лобового стекла.

Chevrolet Lacetti / GentraНовая цена
Lacetti SX L3-15 (1 позиция)
МКПП, Кондиционер, электрические стеклоподъемники, ABS, подушка безопасности водителя, стальные диски R15
Опции: C60 RRL JL9 UPX
114 449 000 сум

пакеты опций:
L-COMFORT PLUS (115  607  000 сўм)

Lacetti SX CNG L3-15G (1 позиция с ГБО)
Кондиционер, электрические стеклоподъемники, ABS, подушка безопасности водителя, стальные диски R15 (Переоборудована для работы на сжатом природном газе (ГБО метан)
123 287 000 сум
Lacetti CDX/AT L15-15(3 позиция) - видео обзор
Комплектация SX/AT, а также подушка безопасности водителя и пассажира, сиденье водителя с дополнительными регулировками по высоте и наклону, отделка салона «дерево», алюминиевые диски R15;
Опции: C60 CF5 MH9 RRK JL9 AJ3 B18 UK3 T3U DL7 UPX UW6

136  728  000 сум
Lacetti L-ELEGANT/AT PLUS (Топовая комплектация позиция) - видео обзор
Комплектация CDX/AT L15-15, а также кожаная отделка руля, подогрев сидений, подогрев лобового стекла.

За доплату в 5 млн. можно заказать матовый черный цвет.

138 126 000 сум

Вместе с новым двигателем Ласетти получила новую автоматическую коробку переключения передач (АКПП) 6T30 производства GM Korea. Механическая коробка осталась прежней, и из-за неверно подобранных передаточных чисел здесь наблюдается «провал» между второй и третьей передачей.

Ходовая часть и салон остались без изменений. Материалы салона напоминают о том, что когда-то Lacetti относилась к С-классу – здесь используется «мягкий пластик», который не дребезжит на ухабах.

Gentra может похвастаться задними дисковыми тормозами и независимой подвеской. Такая компоновка положительно сказывается на управляемости, но подвеска «жесткая» и подходит для хороших дорог. На разбитой дороге водитель и пассажиры сполна почувствуют рельеф асфальта.

В остальном техническая платформа напоминает о том, что автомобиль разрабатывался в начале двухтысячных. На Джентре/Лачетти отсутствует CAN-шина (интерфейс подключения к электронике автомобиля, например, для сигнализации).

Обновленная панель приборов с бортовым компьютером устанавливается на Lacetti/Gentra с июня 2017 года

До июня 2017 на Chevrolet Gentra/Lacetti не устанавливался бортовой (маршрутный) компьютер. Тогда же начался выпуск автомобилей обновленной панелью и приборов и аудиосистемой с USB и Bluetooth.

Технические характеристики Lacetti/Gentra

Двигатель
Количество цилиндров 4, в ряд
Рабочий объем, см3 1485
Максимальная мощность, кВт/л.с. 107 при 5800 об/мин
Крутящий момент, Н*м 141 при 3800 об/мин
Трансмиссия
Тип привода Передний
Тип трансмиссии 5 МКПП / 6 АКПП
Подвеска
Передняя тип Макферсон
Задняя Независимая многорычажная
Тормозная система
Передние/задние тормоза Дисковые/Дисковые
Размеры
Длина, мм 4515
Ширина, мм 1725
Высота, мм 1445
Колесная база, мм 2600
Минимальный радиус разворота, мм 5020
Внутренные размеры
Объем багажного отделения при поднятых/сложенных задних сиденьях, л 405/1225
Масса
Снаряженная масса, кг 1245/1300
Максимально разрешенная масса, кг 1660/1680
Динамика
Максимальная скорость, км/ч 180/179
Разгон 0-100 км/ч, секунд 13/13,1
Расход топлива
Городской цикл, л 8,5/10
Смешанный цикл, л 7/7,5
Тип и марка топлива АИ — 91
Объем топливного бака, л 60

Chevrolet Lacetti обладает гармоничным дизайном и хорошо проработанным салоном, также к немаловажным достоинствам Жентры относится удобное водительское кресло.

Lacetti с ГБО 4 поколения (метан)

На заводе АО «Дженерал Моторс Узбекистан» выпускается Chevrolet Lacetti адаптированная для использования двух видов топлива – бензина и сжатого природного газа – метана. В автомобиле используется специально модифицированная версия двигателя с измененной цилиндропоршневой группой, впускными и выпускными клапанами, седлами клапанов и кольцами.

Задняя подвеска усилена для того чтобы выдержать дополнительную нагрузку. В частности, применяются усиленные амортизаторные стойки, стабилизаторы поперечной устойчивости, буферы хода сжатия и пружины.

Для обеспечения жесткости крепления рамы баллона к кузову автомобиля применяется специальная конструкция лонжеронов.

Все технологические отверстия подготавливаются на этапе производства кузова и проходят заводскую антикоррозийную обработку. Система управления двигателем адаптирована под местные условия, включая качество топлива.

Сколько стоит новая Лачетти-Джентра?

Chevrolet Lacetti / GentraНовая цена
Lacetti SX L3-15 (1 позиция)
МКПП, Кондиционер, электрические стеклоподъемники, ABS, подушка безопасности водителя, стальные диски R15
Опции: C60 RRL JL9 UPX
114 449 000 сум

пакеты опций:
L-COMFORT PLUS (115  607  000 сўм)

Lacetti SX CNG L3-15G (1 позиция с ГБО)
Кондиционер, электрические стеклоподъемники, ABS, подушка безопасности водителя, стальные диски R15 (Переоборудована для работы на сжатом природном газе (ГБО метан)
123 287 000 сум
Lacetti CDX/AT L15-15(3 позиция) - видео обзор
Комплектация SX/AT, а также подушка безопасности водителя и пассажира, сиденье водителя с дополнительными регулировками по высоте и наклону, отделка салона «дерево», алюминиевые диски R15;
Опции: C60 CF5 MH9 RRK JL9 AJ3 B18 UK3 T3U DL7 UPX UW6

136  728  000 сум
Lacetti L-ELEGANT/AT PLUS (Топовая комплектация позиция) - видео обзор
Комплектация CDX/AT L15-15, а также кожаная отделка руля, подогрев сидений, подогрев лобового стекла.

За доплату в 5 млн. можно заказать матовый черный цвет.

138 126 000 сум

Что выбрать, Ласетти или Кобальт?

4.2 5 votes

Рейтинг статьи

Дэу Джентра - технические характеристики, комплектации, фото, видео, обзор


Сидение водителя с первого взгляда кажется небольшим, однако данный промах перекрывает больше количество разнообразных его настроек. Перед водителем предстает четырехспицевое рулевое колесо, обод которого выглядит дэу джентра характеристики, поэтому его не сильно удобно держать в руках.

Приборная панель также не отличается новшествами, и обладает простым и приятным дизайном — вся информация считывается без особых трудностей, что не позволит запутаться в. Слева, в круглом обрамлении стоит тахометр, а справа также в круге — остальные датчики. Кнопки для управления электрическими стеклоподъемниками были удобно установлены в подлокотнике со стороны двери водителя.

Задний диван не такой огромный, однако, дает пассажирам достаточно свободного пространства, что позволит без особых трудностей перемещаться в дальние дэу джентра характеристики на Джентре. Из-за низко установленного заднего дивана, дэу джентра характеристики хватает места и они не упираются в спинки передних сидений, а рослые люди также смогут чувствовать себя удобно.

Багажное отделение располагает собой литрами свободного пространства, которое при необходимости можно увеличить, если сложить задние сидения — получится литров.

В целом, дэу джентра характеристики посмотреть на фото салона новой Джентры, то он немного превосходит своих конкурентов. Говоря о Chevrolet Lacetti, перемен не так много, но это и радует, вед салон Lacetti был хорошим.

Благодаря вставкам из красного дерева в топовых исполнениях, салон смотрится дорогим и стильным. Приятно смогла удивить панель, установленная впереди, которая имеет обшивку из мягкого пластика. Подобного не было ни в одной бюджетной модели класса С. Негатив вносит наличие пластмассовых кнопок и переключателей.

Тот же руль получился сильно тонким и не имеет утолщения в местах захвата. Вообще, изменений в салоне не так много и затрагивают они в основном центральную консоль.

Ткань, дэу джентра характеристики в обивке салоне, выбирали с добротным качеством. Исходя из Дэу Джентра отзывы, модель стала первой бюджетной машиной за последнее время, в которой легко и быстро получилось отыскать удобную посадку.

Каких-то козырей тут не найти, но конструкторы предусмотрели не только продольную регулировку дэу джентра характеристики водителя, а и его настройку по высоте. Более того, конструкторский состав установил двухуровневую настройку, позволяющую регулировать переднюю и заднюю сторону подушки. Не забыли установить регулировку поясничного подпора.

Технические характеристики автомобиля Daewoo Gentra 1.5 (2013)

Даже в базовой версии, руль можно настроить по высоте, а в более топовой версии даже по вылету. Однако не стоит себя утешать, ведь даже если Вы добьетесь комфортной посадки, одновременно хорошая обзорность вряд ли. Модель выделяется довольно свежим внешним видом, хорошим оснащением и приемлемой ценой. К сожалению, нельзя сказать, что свободного пространства на заднем ряду чересчур.

В том случае, когда впереди сидят дэу джентра характеристики пассажиры, на заднем ряду свободного места остается не так много, но для подавляющего числа пассажиров, его дэу джентра характеристики хватать. В более дэу джентра характеристики комплектациях для владельцев Daewoo Gentra предусмотрели удобный центральный подлокотник, фиксирующийся горизонтально и который не падает на подушку, как зачастую происходит. Сложенный задний диван для увеличения багажного объема Большинство водителей порадует присутствие всяких ниш, карманчиков и прочего.

Daewoo Gentra

Самой большой емкостью является перчаточный ящик, получившийся действительно вместительным. Он получил съемную перегородку, подсветку и охлаждение. Как упоминалось дэу джентра характеристики, топовая версия имеет подлокотник, под каким также есть небольшое отделение.

В левой части от рулевого колеса, можно найти также небольшой ящик.

Под консолью, установленной в центре, можно положить смартфон, не боясь при этом, что он поцарапается, так как днище сделано из ткани. Для сидящих впереди и сзади предусмотрели по два подстаканника. Помимо всего прочего, есть отделение на торце пассажирского кресла, а также карманчики на спинках передних сидений и дверных картах. Приятно, что даже задние двери получили дополнительный дэу джентра характеристики. Хочется сказать, что уже в штатном исполнении, новая Джентра получила хорошую оснастку.

Приборный щиток, аскетично смотрится до сих пор и не получил бортовой компьютер. Однако нет проблем со считыванием информации, а кондиционер дэу джентра характеристики все свои функции, охлаждая и прогревая салон, когда это необходимо. Среди нового, в Джентре можно выделить аудиосистему с 6 колонками, доступную в 2 самых топовых версиях.

Топовая комплектация может похвастаться вынесенными на рулевое колесо кнопками управления музыкальной системой. В комфортабельность интерьера автомобиля Daewoo Gentra можно отнести следующее: Салон у Daewoo Gentra пятиместный, достаточно дэу джентра характеристики и вполне комфортный, ничем не уступающий основным конкурентам бюджетного сегмента.

Технические характеристики. Агрегироваться силовая установка может либо дэу джентра характеристики пятиступенчатой механической КПП, либо с шеститупенчатой коробкой-автоматом. Несмотря на применение современных подходов к разработке и производству мотора, назвать его экономичным весьма затруднительно, особенно учитывая не очень-то и высокую мощность.

В плане динамических характеристик Gentra ни чем не удивит но и не огорчит. Комплектации и цены.

Изоляция шума автомобиля на уровне среднего. В машине хорошо слышна работа двигателя и других компонентов дэу джентра характеристики. Двигатель работает на бензине с октановым числом Автомобиль обладает передними независимыми пружинами классификации МакФерсон и задними независимыми пружинами с продольными рычагами.

Передние и задние тормозные диски оснащены вентилируемой функцией. Особое внимание стоит уделить переднему виду автомобиля.

Daewoo Gentra 2013-2015: цена, фото

Передние фары имеют красивую каплевидную форму. Бампер, окрашивающийся под цвет всего корпуса автомобиля, привлекательная радиаторная решетка и гладкая дэу джентра характеристики кромка, которую дополняют нижние противотуманные фары. Все это идеально сочетается и подчеркивает красоту всего автомобиля в целом.

Внутри все просто и элегантно. Ничего лишнего.

★ Дэу джентра характеристики | Информация

Дэу Джентра история модели, фото, цены. Дэу Джентра комплектации и цены, фото. Подробно расписан модельный ряд Daewoo Gentra 2014: технические характеристики, полная. .. Технические характеристики Daewoo Gentra Дэу Джентра. 11 июл 2014 Обзор внешности, салона и технических характеристик. Optra, Buick Excelle HRV, продается как Ravon Gentra Равон Джентра.. .. цены, отзывы, характеристики Gentra от Daewoo. Технические характеристики автомобиля Дэу Джентра Daewoo Gentra. Доступные комплектации. Актуальные данные.. .. Дэу Джентра 2014 технические характеристики. Daewoo Gentra. Все поколения и кузова Daewoo Gentra, а также: средняя цена, комплектации, фото Возможность сравнения комплектаций Дэу Джентра на Авто.ру.. .. Daewoo Gentra обзор, цены, видео, технические. по русски Дэу Джентра автомобиль, выпускающийся с 2013 года. Он производится в Технические характеристики Daewoo Gentra. .. Технические характеристики Daewoo Gentra.6 MT, 1. Описание, технические характеристики, фотографии Daewoo Gentra 1.5 2013 Салон Дэу Джентра продолжает точное копирование аналогичного на. .. Daewoo Gentra Дэу Джентра Продажа, Цены, Отзывы, Фото. SX, CDX MT,AT Кузов Тип Седан дверей 4 Количество посадочных мест 5 Размеры Длина, мм 4515 Ширина, м.. .. Daewoo Gentra: технические характеристики, поколения, фото. Отзывы реальных владельцев об автомобилях Дэу Джентра на Авто.ру. Оценки авторов, их опыт эксплуатации обслуживания, плюсы и минусы. .. Чем удивила узбекская Daewoo Gentra 2015? YouTube. Ravon Gentra: особенности характеристики двигателя данной модели автомобиля. Преимущества и недостатки мотора Равон Джентра на фоне хорошо известного отечественным автолюбителям UZ Daewoo.. .. Технические характеристики Daewoo Gentra 1.5 2013, 107 л.с. Daewoo Gentra.6 MT, 1 поколение 2005 – 2011, Седан технические характеристики на сайте Авто.ру: сравнение моделей, описание. Daewoo Gentra характеристики автомобиля. Технические характеристики автомобиля Дэу Джентра указаны по данным производителя. В таблице приведены основные параметры: размеры,. .. Отзывы владельцев об автомобилях Daewoo Gentra Дэу Джентра. Перечень технических характеристик Дэу Джентра и стоимость в России. Обзор бюджетного седана UZ Daewoo Gentra с фото.. .. Технические характеристики Дэу Джентра Daewoo Gentra 2015. Daewoo Дэу Джентра переднеприводный седан класса C. Производство и продажи модели стартовали летом 2013 года. Gentra нельзя. .. Gentra Тех. характеристики Автомобили Uz Daewoo. Все об автомобиле Daewoo Gentra: цены, характеристики, фотографии, подробная информация.. .. Двигатель Равон Джентра: характеристики, преимущества и. Подробное описание комплектации автомобиля Daewoo Optimum 1.5 MT седан, конфигуратор Дэу Gentra 2013 2015 для выбора требуемых. .. Daewoo Gentra цена характеристики, фотографии и обзор. Обзор новой Джентра 2014 2015. Технические характеристики, фото и цены на Daewoo Gentra II Дэу Гентра 2.. .. Технические характеристики Дэу Джентра 2013 2015 Optimum. Дэу Джентра комплектации и цены, фото. Подробно расписан модельный ряд Daewoo Gentra: технические характеристики, полная комплектация. .. Дэу Джентра 2017 2018 фото, цена, характеристики новой. Габариты, расход топлива, двигатель, подвеска, кузов и другие техническиие характеристики Daewoo Gentra Дэу в каталоге автомобилей.. .. Дэу Джентра технические характеристики. Daewoo Gentra. Daewoo Gentra в России: объявления о продаже, цены, Характеристики Отзывы владельцев. Конкуренты. Запчасти на Дэу Джентра.. .. Технические характеристики Daewoo Gentra Дэу. Подробные технические характеристики всех когда либо выпускавшихся модификаций Daewoo Gentra. Габариты. Двигатели для автомобилей Дэу.
Рено Логан

или Дэу Джентра Что лучше. По динамическим характеристикам обе модели практически не отличаются друг от друга.

Подробнее Отзывы владельцев Рено Логан, 2 поколение,

Обзор передней фары на Chevrolet Lacetti, Daewoo Gentra


Это подтверждают цифры: и с регистрацией в Узбекистане.

Верх. Daewoo Gentra Optimum Plus> Бортжурнал> О комплектации Daewoo Gentra Body Options.Для визуального ...

По ощущениям крыша здесь заметно выше. Салон не тесный, но высоты для высоких водителей не хватает.

Перешел с Рено Логан на Рено Дастер, так как ему нравится качество Рено и хочется ездить на полном приводе. Сегодня мы рассмотрим основные достоинства и недостатки двух автомобилей одного класса. Экономичный и простой двигатель, приятный внешний вид и добрый салон.

Просто забавно ощущение, будто подушка меняет угол наклона, а не привычные движения вверх-вниз. Однако это был как предшественник.

Ой, есть настройка поясничной опоры! В максимальном положении он получился довольно плотным. Регулировка ступицы руля не только по углу наклона, но и по вылету, осмотр.

Кабина не едет в плечах, а ругает в области головы, - высокие водители часто сталкиваются с этим в машинах с люком. По ощущениям крыша здесь заметно выше. Это подтверждают цифры: и за это прощай сиденье с практичной тканевой обивкой, табличной посадкой и отсутствием поясничного упора.

Не согласен с расположением кнопки звукового сигнала в торце подрулевого переключателя, клавиш электростеклоподъемников на центральной консоли, джойстика регулировки зеркал на туннеле пола. Зимой двигатель быстро прогревается и греет салон в маме.

Ночью свет отличный, дорогу видно отлично. Короче машина для обычных людей, язык кабриолет не поворачивается называть, потому что намного лучше старого доброго в одиночку, но такой же простой и огромный потенциал для творчества минусов нет, я их не нашел.

Так выразился, лучше будет блеска из салона за тройную переплату. То же самое и с музыкой, и с туманом и ковриками, все это можно купить само, лучше и в три-четыре раза дешевле.

Не сравнивайте эту машину с другими, просто берите ту или иную машину.

Я лично доволен тем, что выбрал его, ни о чем не жалею, ни грамма не было. Обновленная решетка радиатора, передний бампер и форма капота - основные изменения по сравнению с базовой моделью.

Daewoo Gentra 2013, 107 л. из. - наблюдение

В задней части почти не осталось особых изменений. У Логана постоянная внешность с того года, когда ему сделали рестайлинг. Дизайнеры Renault Logan более консервативны в отношении внешнего вида автомобиля, концептуальные отличия во внутреннем дизайне, когда мы попадаем внутрь DEU, мы чувствуем, что однажды уже здесь.

«Наши тесты» Renault Logan VS Chevrolet Lanos vs BYD F3

Чувства знакомы людям, бросившимся на Лачетти. Зайти только блок мультимедийной системы и процесс регулировки сиденья.

Произошла конфигурация поясничной опоры.

Автолюбитель, указавшая сумма денег, начинает думать. Сегодня мы рассмотрим основные достоинства и недостатки двух автомобилей одного класса. Давайте проанализируем их слабые и сильные стороны и решим, какую машину лучше купить джентресс или логан?

Эволюция внешнего вида

Предшественника нежного без тени смущения можно назвать всем известным.Человек, не разбирающийся в машине, может не заметить особых отличий, но они явно присутствуют. Внешний вид нежных отличается, но по профилю они очень похожи друг на друга. Обновленная решетка радиатора, передний бампер и форма капота - основные изменения по сравнению с базовой моделью. В задней части почти не осталось особых изменений. Логан имеет неизменную внешность с 2009 года, когда он прошел рестайлинг.

Концептуальные различия во внутреннем дизайне

Когда я попадаю внутрь DEU, мы чувствуем, что когда-то здесь были.Ощущения знакомы людям, бросившимся на Лачетти. Зайти только блок мультимедийной системы и процесс регулировки сиденья. Появилась конфигурация поясничной опоры. Восточная традиция отделки и декора отражена пластиком на лицевой панели и дверце, выполненной под дерево. Не близко, но высоты для высоких водителей не хватает. Переходя к Логану, сразу чувствуется, что салон чуть выше, чем у соперника. Подтвердите эту запись в документах, где написано, что кабина более чем на 5 сантиметров выше, чем у жанра.От сиденья до потолка 101 сантиметр. Но поясничной опоры нет. Руль регулируется только по углу наклона, а в узбекской машине его можно вытащить на себя. Не очень впечатляет решение французских дизайнеров разместить джойстик регулировки под «манипулятором», а клавиши стекол - в центральной консоли.

Удовлетворительное качество внутренней отделки и эргономика позволяют поставить обе модели твердой четвертой. Кому отдать чемпионство по внутреннему оснащению Daewoo Gentra или Renault Logan? Небольшое преимущество есть у genth.

Спинка, багажник и комфорт пассажира на заднем сиденье

Если анализировать автомобиль из расчета на диван на заднем сиденье, стоит отметить, что для жанра характерно наличие места внизу, и Логан в топе, хотя высота от подушки сиденья до потолка одинаковая. Еще одно преимущество Daewoo - возможность разобрать спинку заднего дивана для перевозки габаритного груза. Владельцы французской машины не смогут воспользоваться такой привилегией, ведь там спинка заднего дивана прикручена на болты.Но объем багажника у «француза» все же больше. Здесь также установлен паритет, у каждой машины есть свои небольшие достоинства и недостатки, но никаких явных отклонений или феерических «миссий» ни у одной из сопоставимых машин нет. Следует отметить, что для высоких автолюбителей будет Logan, у которого обзор получше во всем остальном. Климат-контроль в обеих моделях стандартный и не вызовет сложностей с адаптацией к управлению.

Технические характеристики Рено Логан и Дэу Джентра 1.5
Модель автомобиля: RENAULT LOGAN 1.6 MT Daewoo Gentra 1.5
Страна-производитель: Франция (сборка Россия) Южная Корея (сборка Узбекистан)
Тип кузова: седан седан
Кол-во мест: 5 5
Кол-во дверей: 4 4
Объем двигателя, куб.см: 1598 1485
Мощность, л. п. / о. Мин .: 102/5750 107/5800
Максимальная скорость, км / ч: 180 180
Разгон до 100 км / ч, с: 10,5 (MCPP) 11,9 (MCPP)
Тип привода: передний передний
КПП: 5 MCPP / 6 АКПП 5 MCPP
Вид топлива: бензин АИ - 92-95 бензин АИ-95
Расход на 100 км: город 9. 4; Маршрут 5,8. город 8.5; Маршрут 7.
Длина, мм: 4500 4515
Ширина, мм: 1742 1725
Высота, мм: 1525 1445
Клиренс, мм: 160 155
Размер шин: 185/65 R15 185/55 R15
Снаряженная масса, кг: 1075 1240
Полная масса, кг: 1600 1660
Объем топливного бака: 50 60

По динамическим характеристикам обе модели практически не отличаются друг от друга.

Обе модели обладают практически одинаковыми спринтерскими качествами. До ста километров разгоняется за десять с половиной секунд. Это, конечно, не выдающиеся динамические характеристики, но для длительного старта со светофора и удобных обгонов на проселочных трассах вполне достаточно. В обеих моделях они эффективны и надежны, что гарантирует полную безопасность водителя и пассажиров в экстремальных ситуациях. Но одно существенное отличие все же присутствует. Логану сложно привыкнуть к педали сцепления и коробке передач.Быстро и уверенно получить сразу не получается, нужен определенный период адаптации, но у Gentra таких проблем нет.

Поведение на дороге

Тест-драйв автомобиля Рено Логан:

Автомобили похожи друг на друга по плавности хода. Они не идеальны, потому что на наших «качественных» дорогах немного трясутся. По управляемости нареканий нет, так как выдающимися техническими характеристиками не отличается. Огромным преимуществом французского седана является наличие штатной защиты двигателя и большой дорожный просвет.Если вы покупаете Daewoo Gentra или Renault Logan для поездок за город или загородных поездок, пальму первенства нужно отдать Renault, потому что у него больше багажника и клиренс.

Тест-драйв автомобиля Daewoo Gentra:

Что можно сказать в заключение сравнительного анализа? Если автомобилист не может решить, что обзавестись новым Логаном или Джентрессом, ему необходимо принимать решения, исходя из своих индивидуальных взглядов и пожеланий. Renault Logan давно занимает почетное место на отечественном авторынке.В его практичности сомневаться нет смысла, но Daewoo Gentra появилась сравнительно недавно и не смогла укрепить первичный рынок мототехники, хотя для оснащения Logan она лучше, а ее базовая комплектация предусматривает автоматическую трансмиссию, чем может логан. не хвастаться.

Помните анекдот про Тольятти - мол, проклятое место: что собираете, все жигули делают? Внимание, барабанная дробь: Новый Renault Logan тольяттинской сборки вызван на асфальт Дмитровского полигона! Насколько лучше он бывший Логан, который до сих пор продолжают делать на московских автофрамах? И на гарнире - два седана по схожей цене: Chevrolet Cobalt и Daewoo Gentra.Хотя у кого здесь получается овощной гарнир, а кто главное блюдо?

Лобовое стекло с подогревом, климат-контроль, мультимедийная система ... Берёшься за ручку клавиатуры, сидишь в двухцветном салоне топовой версии Lux Privilege - и кажется, что это не Логан!

Правда запах в салоне такой же, уплотнители дверей остались одинарными, потолок освещения салона по-прежнему одинокий, любовно сохранился фирменный люфт водительского сиденья в салазках - благо спинка стала выше и теперь нет упираться в лезвие.Блестки упакованы, еще чуть-чуть стал лоток для мелочей. Но все равно сидишь за рулем с сильно согнутыми ногами - регулировка по вылету не появилась.

Сзади просторно, а большой багажник стал даже больше! Замерили объемы пластиковыми шариками - и если в старый Логан вошло 544 «шаровых» литра, то в новый целых 601!

Логан для Loganov Famil - При заказе не пропустите опциональную систему стабилизации


Булыжник до сих пор остается оружием Логана в борьбе с конкурентами. Но седан прошлого поколения на неровностях ехал более плавно

.

0 / 0

Силовой агрегат у обоих Логанов одинаковый: самый мощный 16-клапанный 1.6 (102 л.с.) и пятиступенчатая «механика». На холостом ходу идёт, от вибраций "чешутся" педали и рычаг КПП ... Но новый газ - это педаль газа с тросовым приводом, но "электронная". Результат? Представляете, в этом смысле старый Логан лучше - он отзывчивее!

Видимо французы не попали в настройки электронного ускорителя.Мало того, что отклики предугадать сложно, так и при разгоне с малых оборотов возник сбой - сначала мотор как бы патроны, как будто в карбюратор прорвался насос-ускоритель. А поскольку педаль сцепления по-прежнему легкая и малоинформативная, то новый Логан еще сложнее трогать, чем старый.

А разгон, разгон лучше? Ведь у нового седана коробка передач с более «короткой» главной передачей - 4,5: 1 против 4.21: 1. Теоретически это должно улучшить эластичность, то есть способность ускоряться в пределах одной передачи. Смотрим на результаты наших замеров - и ... М-да. На четвертой и пятой передачах новый Логан чуть эластичнее, но лишь на долю секунды. На третьем при разгоне с 60 до 100км / ч выигрыша вообще нет. А при старте с места до сотни новый Logan набирает на полторы секунды больше, чем старый: 13,5 с вместо 12,0 с. Ну а разгон до 150км / ч и вовсе удлинили на 5.4 шт.

Давайте рассмотрим преимущества и недостатки двух соперников. Постараемся определить сильные и слабые стороны противоборствующих машин. Хотя сразу скажу, что это всего лишь констатация общеизвестных фактов.

Решать, какой из автомобилей самый надежный, что приобрести, исключительное право потенциальных покупателей.

Внешний вид

Если рассматривать обе машины в профиль, то у них много общего .. у «джентльменов» оригинальная форма только спереди.Хорошо смотрится передний бампер с решеткой радиатора. Про нововведения в «Одежде» «Логана» и отметить нечего. Все тот же «Макинтош» Raistaling 2009. Авто может похвастаться разве что сборником дисков «Зима-Лето 2013».

Интерьер

Сравнивая интерьер машин, отметим очень скромную обивку (материалы) от «ДЭУ». Но сборка получше, чем у конкурента. По оснащению первое место занимает Daewoo. В этой составляющей Логан явно отстает.

Салон «Дэу» в сдержанных тонах. Отделана пластиком под «елку» переднюю панель. Салон просторный. Только высоким пассажирам будет не комфортно. Отсутствие высоты. Салон 55 мм имеет конкурента выше. Салон француза без лишнего пафоса и изысков. Качество сборки. Лицевая панель собрана со знаком плюс.

Регулировка сидений в обоих "предметах" практически на одном уровне. Ну, может, сиденья узбекской машины регулируются чуть длиннее. Зеркала от «Джентра» регулируются лучше, чем у Renault.Дело в том, что джойстик регулировки зеркал Рено Логан замаскирован на центральный тоннель. Что касается багажника. Здесь силы примерно равны. Конкуренты «заложили» в грузовой отсек полноразмерные запчасти. Хотя багажник Рено будет несколько больше.

Узлы и автоустановки

Шестнадцатая плавка силовой агрегат «Логан» лучше работает на «малой». Веселая на средней оборачиваемости. Принимается до 60 км / ч, у узбеков падает 1,3 секунды. Отключение до 100 км / ч, отрыв 2.1 секунда. Вроде мелочь, но в городских условиях «Рено» смотрится солидно.

«Джентра» разыгралась в скоростных показателях. Максимальная скорость 9,1 км / ч. Torkemose : Разницы практически нет. Незначительное преимущество у Daewoo. Может, тормозной путь меньше из-за установленных шин «Conny Premium Contact 2»?

Вызовы машин одинаковые. Обе машины «трясутся» в неровностях. Несколько меньше суетятся пассажиры «Рено». Но мы аплодируем «Джентру» в этом номере! Почему ты спрашиваешь? Как! Французы всегда считались образцом в плане «сглаживания» дефектов дорожного покрытия! И тут их практически догнали.Оба «испытуемых» не отличаются реактивностью и способностями. Надежные, предсказуемые автомобили. Ну не интересно просто! А может так и должно быть? А может быть, надежность главной тяги народных седанов?

Итак, «Дэу Джентра» - амбиций не бери! Изо всех сил стараюсь не разочаровать компанию-конкурента: ни цена, ни качество. «ДЭУ» привлекает достойным оснащением. Какие плюсы можно отметить от «Логана»? Прежде всего: просторный салон и клиренс. Именно эти два показателя позволяют опередить конкурента.Может не много, но все же!

Поклонники «Дэу . » Могут возразить: все-таки те, кто хочет обзавестись автомобилем с АКПП в базовой комплектации. Об этом говорят плюсы. Действительно, французы отстают. Ведь машина с АКПП они идут в моделях полной комплектации.Подводя итог можно сказать, что перспективы Daewoo Gentra очень хорошие.

Особенности узбекской кухни Daewoo Gentra Reasons

Реальные отзывы владельцев о Дэу Джентра (Daewoo Gentra):
Daewoo Gentra.

  • Летом купил Дэу Джентра, машина устроила полностью. Дорога сохраняет динамику и мощный двигатель, управление только радует, освещение салона отличное. Расход топлива пока не думал, но если не обращать внимание, как деньги из кошелька исчезают, рискну предположить, что все в порядке. Единственный минус - это низкий клиренс при загруженной машине, и, наверное, для многих это может стать проблемой, особенно при поездках в деревню, но в моем случае меня это устраивает, так как машина постоянно пуста и только один раз взял несколько сумок только один раз, из-за чего заметил.
  • Он долгое время работал в такси, а также имел машину бизнес-класса, но это так для присоединения, чтобы доказать, что мы разбираемся в автомобилях. Приобрел Daewoo Gentra, и говорят, что корейские производители отличаются качеством от европейских. Порадовала коробка передач, которая тянет на нехватку мощности двигателя. Задние тормоза отлично реагируют, и машина спокойно останавливается даже на бездорожье. Я очень люблю находить недостатки и в этой машине они есть. Минусов много, особенно по фарам. Производители забыли продумать и поставить на фары би линзы вместо ксенона, который просто слепит в дороге.Тут придется за свои деньги доработать эту проблему и поменять ксенон или галоген или придумывать, как исправить этот минус, ведь вы можете мешать встречным водителям и мало кому рискуете.
  • После покупки Дэу Джентра у меня сплошное восхищение и дело не только в этом. Машина меня устраивает даже больше, чем предполагалось. О преимуществах он знал задолго до покупки, так как она ехала у друга и ехала, он прислушивался ко всем положительным качествам. Для тех, кто не в курсе, машина стоит достаточно дешево и если посмотреть на отличный внешний вид, не уступающий элитному автомобилю, легко просто не поверить.Понравилось и даже удивило то, что в отличие от других моделей и марок Дэу Джентра экономится только при расходе 92 бензина, а вот уже на 95 начинается лишний расход топлива. Почему так, даже представить не могу, потому что обычно складывается как раз наоборот, но расход топлива все равно средний на уровне 10 литров, а с не самым мощным двигателем объемом 1.5 - это много. Коробка передач резко реагирует на переключатель, поэтому лучше сразу прошить, но если привыкнуть, с этой небольшой проблемой можно ездить.
  • Жена устроилась на работу, а так как город был достаточно большим, чтобы купить машину. Слишком много денег хотелось потратить, потому что сам езжу, мягко говоря, на машине среднего класса, поэтому выбор пал на Daewoo Gentra. Автомобиль и по внешнему виду, и по характеристикам больше напоминал мужской вариант, но супруга хотела, да и делать было нечего. Об этом и желать не приходилось, так как покупка себя оправдала на все 100%. Вместительность, освещение салона и дороги, динамики, комфорт и внешний вид, практически отрабатывают каждый потраченный при покупке рубль.Проехав не один десяток километров, я понял, что двигатель слабоват, расход топлива завышен, коробка передач иногда перекручивается, но для девушек, которые едут на малой скорости, это практически незаметные вещи. Автомобиль можно сказать, золотая середина между китайской некачественной продукцией и отечественным концерном, то есть качеством и ценой полностью устраивает.
  • Купить Дэу Джентра только дороже и я это на себе ощутил. Почему многие пишут о преимуществах этой машины, я не понимаю, но ничего хорошего здесь нет.Клиренс настолько низкий, что кажется, что скоро можно будет цеплять асфальт. Зимой или на плохой дороге с таким клиренсом делать просто нечего, поэтому большую часть времени я в гараже. Салон да просторный, но это все же машина, а не грузовик, поэтому в нем нет смысла, так как главное преимущество не имеет смысла. Аджант коробка передач начинает надоедать уже через несколько дней, причем действует на нервы и приходится постоянно бояться и ездить только на малых скоростях, чтобы не попасть в аварию.Если вы оцениваете от 0 до 10, он упадет не более чем на 3, и то только за счет низкой стоимости и емкости.

«Деу-гентра», от 399 000 руб., Машина от 5,07 руб / км

Знакомый незнакомец

Вот что значит рука Мастера! Итого и бизнес - глазки немного, поменьше, изящнее, теперь решетка радиатора, с которой убрали добрую порцию хрома, капот стал немного рельефнее, нижняя губа бампера капризно изогнута и украшена сердито " шрифты », а верхние пачки светятся.Но в целом «нежный» выглядит намного современнее.

Однако эффектным фейслифтом корпуса и ограничился. С какого другого ракурса новинка не известна никому, кроме «Лачетти». Тот, кто 9 лет назад рисовал для южнокорейского Daew мастера итальянского Pinin Farins. Он не выглядел модно, достаточно удачно сочетая плавные линии, характерные для 90-х, и новую резкую грань XXI века, и теперь уже не выглядит устаревшим. И название машине дало звонкое: от латинского lacertus - молодой, энергичный, сильный.В середине 2003 года мы писали об этой машине: готова замена «Нексии», в августе новинка попадет на конвейер завода «Заццвто».

Привет, старик! Давно не виделись…

Интерьер «Джентерс» - точная копия салона Лачетти. Его безошибочно узнают по замечательному съемнику зеркал с электроприводом в углу двери

Вид изнутри

Отличий в интерьере даже меньше, чем во внешнем виде. Мы уже не раз писали о приятно оформленном салоне «Лачетти» - темная мягкая передняя панель из пластика, очень приличные сиденья, обтянутые практичной тканью (и фактура, и двухцветная в них гамма, и большие повороты регулировки подушки остались), удобный подлокотник, простой , но вполне понятный и достаточно эффективный кондиционер.

Десять лет назад этот салон практически не регистрировали. Теперь, как вы понимаете, в «гольф-классе» машины больше подходят. Тем не менее, «джентра» очень приветствуется пассажирами - можно путешествовать на диване и втроем, «на себя» водитель в 185 см оштукатурен без проблем. В просторном багажнике, крышка которого по-прежнему открывается кнопкой на водительской двери, все два больших чемодана по-прежнему сложены друг на друга - и даже место остается. Однако есть небольшие изменения.Итак, мы раньше хвалили заметность «Лачетти». А теперь наружных зеркал заднего вида стало еще немного больше.

А на «Джентре» ездить во всем нравится «Лачетти». Идентичная конструкция подвески замечательно глотает не только мелкие, но и большие дорожные неприятности - особенно хорошо в этом плане. Ну и, конечно же, повышенный комфорт превращается в значительные крены, если вдруг захочется потянуть на «джентре» по извилистой трассе.

Центральный подлокотник с подстаканниками - привилегия топовой версии.А вот третий подголовник есть какая-то "шляхта"

Что-то новенькое

С самого начала знакомства "Дэу" меня приятно удивил. Звукоизоляция практически плотно перекрывает шум мотора на холостом ходу - даже пару раз пробовал запустить рабочий двигатель! Но просто мотор у новой узбекской машины совсем другой. Если «Лачетти» полагается аж три - разного объема и от 95 до 121 литра. С., Тогда «Джентр» из всего разнообразия «Шевроле» достался единственной рядной 1,5-литровой «четверке» в 105 сил.

Кстати, это тот самый мотор, что установлен на Cobalt. Правда, с некоторыми изменениями - другая катушка зажигания, электронный блок управления, каталитический нейтрализатор. Вдобавок пришлось поставить еще одно сцепление - ведь 5-ступенчатая МКПП тоже досталась авто от Лачетти. Кстати, он также устанавливался на 16-клапанную «Нексию». А на «джентре» она, как и в «лачетти», раздражает рычагом длинными ходами.

В принципе этого двигателя "Джентр" вполне хватит. Шестьсот верст по московским пробкам и проселочная дорога с двумя пассажирами и багажом не выявили больших проблем.Правда, сразу выяснилось, что «нежный» предназначен исключительно для законопослушных водителей. До 60 км / ч в городе его динамики хватает, а тут двухлитровый мотор быстро точит. А по трассе можно комфортно передвигаться на разрешенных скоростях, а после 110 км / ч в салоне становится шумно, а обгоны даются «ДЭУ» с большим напряжением.

Особенно отчетливо я ощутил неспешный характер «джентльменов», воссозданный с него на 2-литровый «Дастер» - полноприводный «Рено» показался мне настоящим ураганом!

Пожалуй, единственный недостаток просторного и аккуратно отделанного багажника - это отсутствие петель, способных танцевать.Под полом прячется полноценная запаска - правда на стальном диске

Вкусная

Тем не менее, за все пять дней знакомства с машиной я, как ни старался, не смог найти в ней серьезных недостатков. И пластиковый псевдо-душ на передней панели не раздражал, да и сонное управление никак не могло оторваться от себя. А все потому, что я с самого начала, еще до того, как сел за руль, изучил прайс-лист. Итак, базовый «нежный» на 28 тысяч дешевле 1,4-литрового «Лачетти» трехлетней давности! И в то же время он лучше оборудован.А за полмиллиона вы получите машину в топовой комплектации, разве что без кожи, да «Автомат» для «Джентро-Элегант» дороже - целых 52 тысячи. Тем не менее, такая машина останется однозначно лучшим предложением в гольф-классе.

Конечно, если оно должно появиться в списке оборудования, можно обнаружить полное отсутствие ESP, боковых и оконных подушек безопасности и кожаного салона. И все же, похоже, ни тот, ни другой, ни более одной трети не смогут перечеркнуть главное преимущество «господа»: «Здвеу» предложили нам много автомобилей за очень небольшие деньги.

Насчет замены "Нексии" ... Похоже, она все равно останется на конвейере - ведь старушка все равно дешевле тысяч тысяч.

Богаче и дешевле

Базовую комплектацию «Комфорт» можно назвать прожиточным минимумом. У такой «шляхты» есть достойный электромобиль, регулировка водительского сиденья по высоте, раскладывающийся диван, центральный замок, иммобилайзер, крепления isofix. Причем в оснащении автомобиля на 399 тысяч богаче базовые «латети» на кондиционер, вторая подушка безопасности, голос, центральный подлокотник спереди, противотуманные фары, а также зеркала и ручки дверей были окрашены в цвет кузова.АКП добавит в базу 50 тысяч рублей, АБС (это оборудование называется «Оптимум») - 17 тысяч или всего 5 тысяч рублей. с «автоматом».

«Оптимум плюс» включает подогрев передних сидений и «музыку», и стоит 423 и 460 тысяч - как видите, АКП в этом случае намного дешевле. Наконец, топ «Элегант» за 490 тыс. Означает отделку псевдо-формы, регулируемую не только по углу наклона, но и по длине руля, центрального подлокотника за спиной и аудиосистемы на руле. руль и даже люк в крыше.

Выбирали на весь мир

Дебютировал «Дэу Лачетти» осенью 2002 года на автосалоне в Сеуле. С тех пор автомобиль продавался под разными именами по всему миру. В Канаде и Мексике автомобиль получил название «Ultra», в Европе - «Nision», в Индии - SRV. Более того, он поменял машину и фамилии: в Китае он был известен как Biak-Excel, в США - Suzuki-Forens, в Австралии - Holden-Viva.

Нынешнее название выбрали маркетологи. Побеседовав с вами у энного количества наших соотечественников, они остановились на энергичных «джентрах». Такое название одобрило большинство респондентов.

Просторный салон с удобными передними креслами; лучшая в своем классе цена; хорошая видимость; Комфортная энергоемкая подвеска

Очень длинные и нечеткие движения рычага МКП; Большие рулоны по очереди; Отсутствие ESP, боковых и оконных подушек безопасности

➖ Динамика
➖ Качество сборки
➖ Шумоизоляция

плюсы

➕ Богатая комплектация
➕ Надежность
➕ Просторный салон

Преимущества и недостатки Ravon Gentra 2017-2018 раскрыты на основании отзывов реальных владельцев.Более подробные плюсы и минусы Ravon Gentra 1.5 с механикой и автоматами можно узнать из рассказов ниже:

Отзывы о собственности

Техника и сегодня неплохая. Есть полный электромобиль, кондиционер, люк на крыше, зона подогрева дворников. К сожалению сборка не очень качественная, либо уже износились штампы кузова. Зазоры между частями кузова неровные, все двери закрываются с разным усилием. Пытался подстроиться, ничего не вышло.

При этом кабина собрана аккуратно, хотя пластик везде жесткий. Эргономика неплохая, салон просторный, на заднем сиденье даже тройке не тесно. Багажник большой, отдельно складываются спинки задних сидений.

Пожалуй, единственное, что придает автомобилю солидный возраст, это мультимедийная система. Даже в топовой комплектации тут простая магнитола, тачскрина нет, даже разъема USB нет. Аналоговые приборы хорошо читаются, но при этом маршрутный компьютер показывает только общий и суточный пробег.

В целом Равон Джентра хороший, просторный и достаточно комфортный автомобиль за свои деньги, но уже видно, что жить на конвейере недолго.

Не знаю, отнесите это к достоинствам или минусам, но дилерская сеть Равона слабая. При этом машина проста по конструкции, много частных мастерских, специализирующихся на ремонте и обслуживании автомобилей этой марки, и проблем с запчастями нет.

Вячеслав, отзыв о Ravon Gentra 1. 5 (107 л.с.) в 2015 г.

Видео тест

Оборудован авто в стиле дешево и сердито, но есть необходимый минимум. Это кондиционер, электро и обогрев зеркал (зимой без него патрубок), полный комплект электростеклоподъемников, центральный замок. Магнитола, правда, нет, только подготовка. Но это неважно. В "состоянии" в таких машинах часто бывает, что потом сам хочешь поставить свою музыку.

Что еще подкупило: простой бензиновый мотор с цепным приводом.Мощность чуть больше, чем у базовых Вестей - 107 л.с. По ощущениям тащит примерно столько же. Не быстро, но вполне уверенно. Правда, во время обкатки топливного бачка напугал меня заказом - до 15 литров на сотню. Потом все нормализовалось, сейчас по городу (а я в основном езжу) берет около 10 литров. Лью аи-92. Топливный бак - 60 литров, норм.

Салон не плохой за свои деньги. Сборка местами кривая, но непритязательная. Вот и все заработало. И так ... касание в кнопке регулировки зеркал пройдено примерно пятую тысячу километров (ремонтировал по гарантии).К тому же глючил кондиционер, как выяснилось, от него не отказали. Остальное в порядке.

Иван, отзыв о Ravon Gentra с автоматом 2016 г.

Дизайн задней части от Шевроле Лачетти Седан вполне подходит, хотя хэтчбек Лачетти никогда не нравился, но они удачно изменили лицо и стали выглядеть вполне прилично.

Зазоры частей тела в норме, больших царапин нет. Бамперы висят на своих местах, без перекосов, плотно прилегают к кузову.Передние двери закрываются легко, с хорошим звуком. Сзади надо еще что-то воткнуть, но звук тоже неплохой.

Салон

, как известно, тоже от Лачетти. Дверные панели в верхней части мягкие, панель торпеды полуфантическая (с отражением яркого солнца в лобовом стекле). Сиденья хорошей формы, их можно вполне удобно расположить.

Кто-то еще писал в отзывах о Daewoo Gentra о запахе в салоне - да, запах немного (кажется, пахнет сиденьем), но запаха пластика практически нет. Но попробуйте посидеть в любом новом Рено, две минуты и выскочить хочется (теперь даже китайские машины не воняют). В целом салон собран хорошо, все плотно подогнано и выглядит вполне достойно. Шумоизоляция в машине, конечно, не супер, но лучше, чем в Ларгусе или Сандеро.

Что касается АКПП: коробка передач включается вовремя и быстро. При этом происходят небольшие толчки, и при падении скорости коробка переключает передачу вниз, что тоже заметно, но всегда включена правильная передача.А если нужно разогнаться - переключает передачу вниз по нажатию педали газа. Небольшое НО происходит после динамичной езды. Удерживает пониженную передачу, видимо, пока комп не адаптируется. И да - коробка немного слышна.

По поводу мотора: тихий, заводится не по плану, но вроде нормально. Особо сказать больше не работает, при обкатке, хотя двигатель крутится легко, не напрягаясь, и не кричит как на урода. Греет правда не быстро, но на ходу нормально.

Отзыв о новой АКПП Ravon Gentra 1.5 (107 л.с.) 2017 г.в.

В плюсы возьмет просторный салон, невысокую стоимость по сравнению с конкурентами, хорошую комплектацию за такую ​​цену.

Из минусов - короткие передачи с задержкой при переключении между 1 и 2, а также между 2 и 3 - к этому сложно привыкнуть. Эту механическую коробку считают главным недостатком.

Из других минусов - слабоватый двигатель и вялая динамика.Большой расход по городу - 12-15 литров, по трассе - 7-7,5 литров. Долго греться в тепле. Долго оттаивает лобовое стекло, когда двигатель уже прогрет. Средний свет горит достаточно.

Дворники сначала начинают тереть по сухому стеклу и потом, через 1 секунду полива водой, лучше бы сначала полили, а потом включились дворники.

Небольшой клиренс, скажем так, чуть меньше среднего для таких машин. Недостаточная шумоизоляция. Зимой в салоне быстро остывает, но когда печка не холодная, эксплуатируется с минус 25.

Андрей, отзыв о Gentru with Mechanics 2017

Купил Gentru Daew летом 2016 года, с тех пор езжу. Пробег сейчас 39900 км.

Что сказать о машине? Что ж, опыт, как всем известно, по факту это сравнение. Возможность сравнивать, так сказать. У меня до гентха была одна нексия - шестицилиндровая, на которой ездил 3,5 года, до пробега 153000 км, тогда уже была 16-клапанная, а не 8-клапанная нексия, тоже б / у, но с меньшим пробегом , - не 72 000, как на первом, а всего 40 000 км.Поездил 1,5 года и продал - по электрике она была хуже, хотя вроде новее. Потом у меня был Polo Folks, новый, на котором я езжу почти два года и пробег 44 000 км. Поло остался очень доволен после обоих нексов. Потом моя гентра, на которой езжу почти 1,5 года. Сейчас пробег около 40 000 км.

Ну в поломке, главное наверное. Никаких поломок, кроме того, которые касались авто с автомобилем, зависло - отключите и включите клеммы АКБ.И все? Ну пока!

Да, кстати, у меня максимальная комплектация на механике с люком. Люк, правда, с такой погодой в Питере мне хрен не надо. В любом случае. Уже купил. Люк в России не нужен. В Майами нужно, но не в России. Способствовать. Первые впечатления. Одним словом первые две недели в джентльме по сравнению с поло неописуемы. Поло - табурет, на котором постоянно болит спина. Джентра в этом смысле классом выше. Ну она и тд на класс выше!

Очень мягкий.Гладкий. Но, конечно, не такой маневренный и резкий, как поло. Поло куда больше нравится Вуурт такой. Так что гент для тех, кто не любит резкости и любит комфортные и спокойные движения.

Минусы. Они есть. Первый - это ящик. Я уже на скорости 60-65 км / ч, всегда двигаюсь на последней - 5-й передаче. ВСЕГДА! Это чушь, но это так. А на скорости 110 км / ч у меня не 3,3 тысячи валют, как на поло, так и на ерунду, а в не менее 4 тысяч. Ну, на скорости 80 км / ч не 2000, а 3000 оборотов.Мне не совсем это понятно. Некоторые говорят, что коробка там старая. Кстати, в коробке сразу после покупки залита хорошая синтетика. Читал отзывы - мол там что-то страшное плавание, вместо масла и оно черное. Не знаю, не видел, но перестраховался.

Второй минус - лакокрасочное покрытие. Низкий. Два кровельщика уже убрали. Квадраты не одни, двое. Говорят, у всех Daewoo беда.

С другой стороны первый мой нексиан был уже весь с ржавчиной внизу дверей первого передка, но ничего - проехал 3.5 лет, хотя ей уже было 6 лет. Некрасивая, конечно, но зато надежная машина.

Что еще из минусов? Отсутствие USB? Да, но я купил на Алиэкспресс FM-модулятор за 440 руб. И в целом проблем нет.

Лично всех остальных доволен. Иногда могу развивать скорость до 160 км / ч, но не чувствую, хотя в поло, конечно, шумоизоляция лучше. Но особо не переживаю, хотя из жидкой резины сделал на задний шип болтун - с шумоизоляцией стало чуть лучше.

Руль жесткий по джентльмену, и мне это нравится. В отличие от поло, его можно повернуть. Мне это нравится. Некоторые считают это минусом, но у меня тут ваши тараканы - и это психологически плюс - особенно при скорости более 120 км / ч.

Планирую проехать на нем не менее 150 000 км. Если в Нексии это действительно получилось, то в нежной, тем более удачно. Наверное.

Кушает больше поло, но в поло лил 95-й бензин, а потом 92-й. В среднем 7.8-8,0 л. По трассе - менее 7,0 л. В пробках - до 12 литров. Пишу как есть. Это плохо или хорошо, но это так.

Негра нельзя винить в том, что он черный. Есть эбеновое дерево эбеновое дерево, а гент - гент.

Резюме таково, что я мечтала об Октавии, но ... пока есть гент в таком нормальном состоянии - не мечтаю. Тем более что в Октавиа только Простабасов с электрикой подключал побольше, а все остальное вроде кроме стоимости.Кстати, купил за 489000 руб. Напомню в полной комплектации, но механика мне не нравится. А Октавия нова столько? Нет, ну если будет бабло - куплю квартиру. Никто никого не удивит.

Наследники Chevrolet. Lacetti - W. Gentra Другой мотор! Ну почти ... - Косяки и оправка - отличная управляемость и динамика - не противоречили. Спасибо.

До того, как стать Chevrolet, Lacetti продавалась под маркой Daewoo.Вообще у него, как и у Саваофа, много имён (Chevrolet Optra и Nubira, Suzuki Forenza, Buick Excelle - в зависимости от рынков), но среди них нет Tagaz Vega (мир ее пыли), который тоже является суть Лачетти, правда с измененным дизайном и задней подвеской.


Chevrolet Lacetti и Tagaz Vega

Vega - машина практически полностью китайская. Лачетти - кореец. Это хоть и не два полюса мирового автомобилестроения, но все же крайне далекие друг от друга величины.Узбекистан, где собирают нежных, находится в стороне как географически, так и технологически. Интересно будет сравнить три градации серой одиночной машины, не находите? По крайней мере, заочно.

Подарив мне машину, представитель Uz-Daewoo предупредил: только не пишите, что на джентльском моторе от Cobalt! Это еще один мотор!

Ну и еще ... Гентровский агрегат имеет индекс J200, Кобальт - БСВ.У них разные блоки управления, соответственно разные калибровки.


Блок управления Cobalt (слева) установлен в автомобиле, а блок управления Gentra находится в моторном отсеке.

Двигатель jenter формально мощнее (107,4 л.с. против 105), но эта разница находится в пределах естественного разброса. Оба мотора производятся в Узбекистане на заводе GM PowerTrain Uzbekistan.

Помимо мотора, силовые агрегаты этих двух автомобилей отличаются сцеплением, маховиком, кронштейнами крепления, катушками зажигания и катаколлекторами.

Ощущения в салоне: Лачетти оказалась не такой уж "деревянной".

Дело даже не в безвкусных накладках под елку. Сам пластик оставляет впечатление такой абсолютно вызывающей «дубляжки». И уж точно не смейтесь: накладки на «торпеду» и верх обшивки дверей на ощупь мягкие. Но визуально - как в тюремном душе. Еще неприятнее выглядит жесткий пластик, из которого сделаны все остальные панели.



Сопряжение пластика от идеала тоже далеко:

На рукоятках видны головки саморезов:

«Магнитол» (пишу это слово в кавычках, потому что это вовсе не радио) - откровенно китайский дизайн, плохо сочетающийся с общей стилистикой салона:

Скажем так: Лачетти не лучший образец для копирования.Но не самое страшное. Простые штрихи можно было бы нанести нежному или более интересному, чем Лачетти, как выяснил Тагазов.

Узбекам, как мне кажется, стало хуже.

Ну хоть чтоб не поддались китайской моде на синие лампочки и оставили подсветку приборной панели зеленой:

Компоновка салона при адаптации к производственным возможностям Uz-Daewoo не пострадала. Места для задних пассажиров солидного класса:



Нормальный багажник на 405 литров




Багажник открывается кнопкой на двери:

Есть даже ящики под сиденьем переднего пассажира:

И полка под «Бардачок»:

Узбеки, судя по всему, очень любят визитки.В джентре я обнаружил уже три отделения для визиток: одно в солнцезащитных козырьках:

И два в нише подлокотника. У последних острые края, я даже поранил, небрежно засунув пальцы внутрь веселого:



В данной комплектации обогрев передних кресел:

Сиденье приличное,

водитель имеет даже трехступенчатую нижнюю позицию:

Но отсутствует боковая поддержка в плечах, где она наиболее вероятна.

Подушка регулируется по наклону:

И круто: механизмы управления передними сиденьями справа и слева разные!


Еще досадные мелочи: «АВТОМАТ» оператора водительских стеклоподъемников срабатывает только на открывание, индикатор температуры двигателя надежно лежит (после 15 минут езды он еще «на нуле»), принудительно заблокированные двери не отпираются при открывая, нужно нажать специальную кнопку.

Нет индикации включения головного света, нет, только по бесшумной подсветке приборки и можно понять включены ли фары.Это настоящий косяк. Нравится кнопки звукового сигнала на хабах.


И задняя левая дверь плохая (привет Лифан Солано!). Пломба поставлена ​​правильно, посмотрел. Судя по всему, штампы сильно потрепаны.

Управляемость пологая, что называется, «чистая»: понятные и хорошо прогнозируемые скольжения в поворотах, умеренные крены, отсутствие продольного крена.

Он стабилен для прямой, но после начала занятий со скоростью 140 км / ч динамический коридор расширяется до устрашающих величин.Вы должны собрать. В этом заслуга не столько подвески, сколько крепких сербских шипованных шин TIGAR SIGURA STUD 195 / 65R15.



Похоже, завод принадлежит Michelin, а качество шин очень среднее. Боковины излишне мягкие, из-за чего возникают маломощные ирсестеры. Хотя в целом приличная управляемость Лачетти никуда не делась, думаю, на летней резине Джентра будет вести себя гораздо благороднее.

А вот с ощущением авто - полный порядок.Гидравлический привод и умеренно острый руль (3,1 оборота) дают отличную обратную связь. Уединенный и переключаемый редуктор, настроен просто образцово. Единственная проблема - рычаг немного смещен вправо и у третьего есть третий, у других автомобилей - пятый. Вы должны уйти на пенсию.

Tagaz-Veja, я помню, с ощущением движения было полно и стопроцентно швы, легчайший руль не только не информирует водителя, но даже дезинформирует! Лачетти также был более сдержан в обратной реакции.

Мотор - восторг. Не ожидал от такого скромного объема такого драйва! Он моментально разматывает его и очень убедительно ускоряет нежное. Была влажная погода и динамику не замерил. Но я уверен, что по паспортам 11,9 секунды можно заблокировать.

Я дал мне новый, около квадратной мили:

Допускаю, что после тщательной пробежки она еще лучше себя поведет.

Надо привыкнуть к джентру. Первое впечатление от нее: блин, очередная дешевая подборка.И сохраняется надолго, особенно если на улице дождь, машина «потеет» даже с включенным кондиционером, а дешевый пластик не трясется изящно на каждом асфальтовом стыке. По мере привыкания и адаптации к мелочам и нюансам начинаешь видеть главное: машина едет.


У

Gentre много локализованных деталей.

Однозначно машина лучше Тагазовской, но Лачетти по точности не дотягивает.

Daewoo Gentra - машина с множеством недостатков.Многие из них копируют те, что у Лачетти, и я не понимаю, почему они не были исправлены. Но главное - в шасси - узбеков не запихнуть.



SX (MT, AT) CDX (MT, AT)
Тип Седан
Кол-во дверей 4
Количество мест 5
Размеры
Длина, мм. 4515
Ширина, мм. 1725
Высота, мм. 1445
Колесная база, мм 2600
Шаг (перед / зад), мм 1480/1480
Двигатель
Тип Бензин / Эко-класс EURO 5
Модель B15D2.
Рабочий объем (см. Куб) 1485
Количество и расположение цилиндров Четырехцилиндровый рядный
Газораспределительный механизм DOHC, с двумя распредвалами в головке цилиндров,
16 клапанов с цепным приводом
Максимальная мощность (кВт / л. с.) 79/107.4 по адресу 5800
Макс. крутящий момент (нм / об / мин) 141 при 3800.
Система снабжения Распределенный впрыск топлива
Тип и марка топлива АИ-95
Трансмиссия
тип привода Передний
Трансмиссия Механическая пятиступенчатая / шестиступенчатая автоматическая
Тип сцепления сухое, неразъемное
Объемы и массы
Объем топливного бака, л 60
Объем багажника, л 405-1225
Аккумулятор 12В, (а / ч) 55
Снаряженная масса автомобиля, кг 1245 ~ 1300
Полная масса автомобиля, кг 1660
Динамические характеристики
Разгон до 100 км / ч с места 11,9
Максимальная скорость, км / ч 180
Тормозная система
Тормоза передние Диск вентилируемый
Тормоза задние Диск
Подвеска
Передняя подвеска Независимый, как McPherson
Задняя подвеска Независимая, многопозиционная
Рулевое управление Рулевой усилитель
Расход топлива (литр / 100км)
Маршрут 6,97 / 6,52 *
Город 8,46 / 9,46 *

Нравится (30 ) Мне не нравится (2 )

Заклинило коробку передач на Дэу Джентра.

Равон Джентра автомат: технические характеристики

Доброго времени суток! Два дня назад начала пинать АКПП при переключении с 3 на 2 или с 4 на 3 только в одном положении, при снижении скорости. Что могло быть? После этого поменял масло, залил Дикстр-6, уровень, все проверили - норма! Но когда старое было слито, масло было черным, запах горелым, а консистенция масла была похожа на воду. Пожалуйста, посоветуйте что-нибудь. Авто 2014 - Дэу Гентра (Daewoo Gentra).(Аскар)

Здравствуйте, Аскар. АКПП более чувствительна к работе агрегата, чем традиционная «механика». Соответственно, проблемы с его использованием возникают чаще. Сегодня мы постараемся помочь вам решить эту проблему.

[Скрыть]

Почему толкает АКПП?

Первая и самая частая причина того, почему АКПП некорректно работает, то есть дергается и пинает, это масло. Плохая смазка или недостаточная смазка в коробке - основная проблема.Но если вы уверены, что с уровнем все в норме, то подумайте - качественное масло заливали? Проанализировав вашу информацию, мы также можем сделать вывод, что вы раньше использовали некачественные расходные материалы.

Поэтому первое, что вам нужно сделать, это провести диагностику работы агрегата. Вам понадобится компьютер с необходимым ПО для диагностики Daewoo Gentra, диагностический кабель и сам адаптер. Ноутбук подключается к адаптеру, а последний подключается к специализированному разъему для диагностики.В моделях Gentra, как правило, этот разъем устанавливается со стороны водителя, под торпедой, и он скрыт пластиковой крышкой.

Подключив компьютер к разъему через кабель и адаптер, вы можете прочитать все коды ошибок, которые будут указывать на определенные неисправности. Если есть возможность, запустите утилиту проверки в режиме АКПП, тогда все проблемы в трансмиссии будут показаны. В результате коды нужно расшифровать, после чего можно будет понять, что произошло и как решить проблему.

Основными причинами вылета коробки передач являются:

  • износ каких-либо элементов агрегата;
  • неправильная эксплуатация автомобиля с автоматической коробкой передач;
  • неправильное обслуживание машины;
  • неисправность устройства блокировки гидротрансформатора;
  • недостаточный прогрев станка перед использованием;
  • некорректная работа каких-либо датчиков в системе.

Как вы понимаете, причин, по которым АКПП работает некорректно, может быть множество.И каждая из этих неисправностей требует особого подхода к устранению. Вы также можете узнать больше о поломках и способах их устранения на нашем веб-сайте, в этом.

Замени масло вовремя, залейте оригинальное и проблем не будет!

Видео "Почему пинает агрегат и как это исправить"

Подробнее о кайфах коробки передач и способах устранения проблемы смотрите в видео.

Наша автомастерская оказывает услуги по восстановлению механических коробок передач.Автосервис находится в г. Видное, на Каширском шоссе ... Удобные подъездные пути позволят вам без проблем добраться до нас. Ремонтируем иномарки много лет. Мы делаем работу качественно и предлагаем конкурентоспособные цены, поэтому вы обязательно останетесь довольны.

О поломках МКПП на Daewoo Gentra

Daewoo Gentra - компактный автомобиль, выпускавшийся с 2005 по 2011 год и оснащенный 5-ступенчатой ​​механической коробкой передач. Несмотря на качественную сборку, детали трансмиссии со временем изнашиваются, что делает невозможным нормальное вождение.Кроме того, неправильное использование может ускорить износ.

Чтобы определить причину выхода из строя агрегата, нужно обратить внимание на поведение автомобиля. Например, если во время движения трансмиссия издает гул или другой шум. посторонние звуки, то это может свидетельствовать о следующем:

  • Подшипник приводного вала изношен.
  • Использовано неподходящее или низкосортное трансмиссионное масло.
  • Ослаблены резьбовые соединения.
  • Сцепление повреждено.

Если проблема проявляется в том, что вы не можете включить или выключить трансмиссию, то это может указывать на необходимость замены:

  • Шестерни.
  • Вилы.
  • Шток.
  • Шлицевое соединение муфт синхронизатора.
  • Веревка.
  • Подшипник промежуточного вала.

Если масло протекает, необходимо заменить сальники и сальники.

Почему бы не игнорировать поломки МКПП?

Механическая коробка передач - сложный агрегат, работа частей которого тесно взаимосвязана. Из этого следует простой вывод: одни поломки провоцируют появление других.Поэтому, если вы хотите отремонтировать МКПП по доступной стоимости, обращайтесь в автосервис при первых признаках неисправности.

Почему стоит обращаться в СТО «Ремонт МКПП»?

В Москве и Подмосковье очень много компаний, у которых можно заказать ремонт МКПП для Daewoo Gentra. В чем наши преимущества перед ними? Все просто:

  • Качество ремонта - наш главный приоритет (включая гарантии).
  • Мы Вам четко объясним принцип ценообразования на наши услуги, Вас не обманут!
  • Дадим полезные советы по эксплуатации, следуя которым вы значительно продляете срок службы трансмиссии.

Гудит ли МКПП? Передача не выключается или не включается? А может, после парковки под автомобилем образуется масляная лужа? Решим любую проблему! Звоните менеджеру и договаривайтесь о ремонте прямо сейчас! Контакты указаны на сайте.

Ремонт КПП Дэу Джентра
МЕХАН ПРОМЫШЛЕННЫЕ КОРОБКИ ПЕРЕДАЧ GENTRA DEU
установка замена купить все модификации
ремонт и восстановление валов аргонной сваркой корпуса МКПП
г. Москва

Артем 8965126 13 83 Вадим 8925675 78 75

Полная диагностика автомобиля при ремонте - бесплатно!

Обладая высоким уровнем профессионализма, большим опытом ремонта механических трансмиссий, а также собственным складом запчастей, мы осуществляем диагностику, продажу, замену и ремонт всех типов механических трансмиссий для dEU car Gentra.Ремонт коробки начинается с первичной, обязательной бесплатной диагностики.

Стоимость ремонта КПП DEU Gentra:

Комплекс услуг по ремонту механической коробки передач DEU Gentra:

  • консультация мастера по ремонту / по телефону бесплатно /
  • сдача автомобиля в ремонт / по городу Москве 3000 руб. Из Московской области и других регионов РФ - по договоренности /
  • комплексная диагностика автомобиля / определение наличия неисправности двигателя, МКПП, АБС, тормозной системы; проверка электрических цепей автомобиля на предмет коррозии, проверка кинематического разрушения агрегата, проверка уровня трансмиссионного масла, проверка работоспособности гидросистемы сцепления / - при ремонте бесплатно
  • визуальный осмотр, проверка целостности корпуса
  • проверка содержания трансмиссионного масла на стальную, алюминиевую или бронзовую стружку
  • открытие поддона / при необходимости /
  • снятие с машины
  • разборка, промывка деталей и узлов
  • устранение неисправностей / присутствие автовладельца - обязательно /
  • договор с автовладельцем о стоимости полного ремонта и дате окончания ремонта
  • получение запчастей со склада / рем.комплект, расходные материалы, шт. /
  • ремонт / аргонная сварка / корпус КПП при необходимости
  • сборка
  • замена сцепления / по желанию автовладельца /
  • Установка
  • на авто
  • заправка трансмиссионным маслом
  • Диагностика вывода
  • и проверенный привод автомобиля

Гарантия от 3 до 24 месяцев или 60 000 км. пробег.

У нас в фонде отремонтированных и б / у коробок передач МКПП Daewoo Gentra / см. Замену артикула / ... По желанию автовладельца мы можем заменить неисправный на перенесенный из обменного фонда, что зачастую экономически более выгодно.

Цены на дополнительные работы


Запасные части для ремонта МКПП:

  • эконом - от 3000 до 8000 руб. / использовать по желанию автовладельца только б / у запчасти для удешевления ремонта /
  • бизнес - от 8000 до 28000 руб. / замена только непосредственно поврежденных деталей в установке /
  • представитель - от 28000 до 60000 руб. / замена вне зависимости от поломки с комплектом: сальники, подшипники подшипников, игольчатые подшипники, синхронизаторы, стопоры, замки ступиц муфт - плюс непосредственно затронутые детали /

Собственный склад запчастей, необходимых для ремонта МКПП. Подшипники, сальники, шестерни, синхронизаторы, зубчатые муфты, валы, дифференциалы, корпуса МКПП в наличии и под заказ для всех марок автомобилей.

Цех по ремонту КПП готова к выполнению следующих работ:

  • замена и ремонт коробки дЭУ шестерни Gentra
  • замена и ремонт МКПП DEU Gentra
  • замена и ремонт КПП DEU Gentra
  • замена трансмиссионных масел dEU Gentra
  • замена сцепления DEU Gentra
  • замена выжимного подшипника DEU Gentra
  • замена заднего сальника и подшипника коленвала DEU Gentra
  • замена сальника первичного вала и сальника привода DEU Gentra
  • замена первичного вала МКПП DEU Gentra
  • замена вторичного вала МКПП DEU Gentra
  • ремонт кулисного редуктора ДЭУ Gentra
  • ремонт (аргонная сварка) картера КПП DEU Gentra
  • ремонт вторичного вала КПП DEU Gentra
  • замена пятой передачи МКПП (без снятия КПП с автомобиля) DEU Gentra
  • ремонт 1 и 2 передачи ДЭУ Gentra
  • ремонт 3-й и 4-й передач ДЭУ Gentra
  • ремонт 5 передачи ДЭУ Gentra
  • купить коробку передач DEU Gentra
  • .
  • купить МКПП DEU Gentra
  • купить коробку передач DEU Gentra
  • .

Позвоните нам, чтобы выбрать время диагностики и ремонта МКПП в мастерской по ремонту коробок передач.Предварительная регистрация позволит найти наиболее удобное решение, мы всегда готовы пойти навстречу пожеланиям клиента.

В наших специализированных мастерских по ремонту коробок передач механических коробок передач DEU Gentra осуществляется качественный сервис, диагностика и ремонт всех типов коробок передач. Предлагаем честный сервис по ремонту. Ваше присутствие обязательно на всех этапах диагностики и ремонта КПП DEU Gentra; все работы и аксессуары согласованы. Межремонтный период трансмиссии от 0.От 5 до 1 рабочего дня (при наличии необходимых запчастей).

Работаем семь дней в неделю.

У нас круглосуточная линия консультаций по ремонту МКПП коробок передач (8 965 126 13 83) и доставке в ремонт на эвакуатор (8 926 167 15 40). Эвакуатор для ремонта МКПП предоставляется за отдельную плату (в пределах МКАД - 3000, за МКАД по договоренности).

Стоимость работ на КПП DEU Gentra - 10 000 рублей (входная и выходная диагностика, снятие и установка КПП, разборка и сборка, тест-драйв поездки выходного дня) + стоимость комплектующих.

Входная диагностика проводится при обязательном присутствии владельца автомобиля в течение 30-40 минут после снятия КПП с автомобиля (осмотр, разборка МКПП, промывка внутреннего корпуса КПП от металлической стружки, разборка валы).

Снятие коробки передач с автомобиля, разборка и устранение неисправностей происходит в день обращения в ремонт.

Гарантия на ремонт коробки передач МКПП DEU Gentra составляет от 1 до 12 месяцев или 60 000 км пробега (устанавливается индивидуально для каждого автомобиля - в зависимости от комплектующих при ремонте).

Фотоотчет разборки шестиступенчатой ​​механической коробки передач Daewoo Gentra

Пример схемы 6 ступенчатой ​​коробки передач МКПП DEU Gentra
коробка передач в сборе DEU Gentra

Входной вал КПП DEU Gentra

Вторичный вал КПП DEU Gentra

блок шестерен Daewoo Gentra

Блок переключения передач DEU Gentra

дифференциал КПП DEU Gentra

Кузов передний редуктор DEU Gentra

картер КПП задний DEU Gentra

Фотоотчет разборки в сборе механической коробки передач DEU Gentra

Garuda - Garba Rujukan Digital

AbstrakKesenian Tayub ди Lingkung Seni Mekar Pusaka Gentra Buana Desa Kosar II Kecamatan Cipeundeuy Kabupaten Subang memiliki ciri khas tersendiri, terletak pada iringan, gerakan, bentuk kostum, atau pun pertunjukannya. Ян melatarbelakangi peneliti karena Lingkung Seni Mekar Pusaka Gentra Buana memiliki perkembangan дан perubahan dari periode kepemimpinan yang satu ke periode berikutnya yang kemudian menjadi pola baku tersendiri pertunjukannya. Hal ini bertujuan Untuk mengetahui perubahan дан perkembangan янь dilakukan олех Lingkung Seni ini, sehingga dapat diketahui berbagai unsur yang berada didalamnya. Метод пенелитиан ян дигунакан адалах метод дескриптиф анализа dengan pendekatan kualitatif.Метод ini dilakukan Untuk melaporkan kejadian yang da dilapangan atau mendeskripsikan kejadian sebenarnya sesuai dengan fakta dilapangan дан kemudian data yang sudah terkumpul diolah melalui proses analysisis. bentuk pertunjukan Tayub ди Lingkung Seni ini terdiri дари segi structur pertunjukan янь дигунакан, Аданья пембука, Иси, дан penutup. Хингга саат иници кесениан Тайуб ди Лингкунг Сени Мекар Пусака Гентра Буана тетап биса мемпертаханкан эксистенсинья далам ачара ян ди селенггаракан олех пемеринтах дан масьяракат сеперти хаджатан.Kata kunci: Kesenian Tayub,  Mekar Pusaka Gentra Buana, Kosar II,    Subang Tayub Art in Bloom Art Lingkung Pusaka Buana Gentra Kosar Village II Район Cipeundeuy Subang имеет свои особенности, расположенные на аккомпанементе, движении, формах костюмов или даже показать. История исследователя как Lingkung Heritage Art Blooms Gentra Buana имеет развитие и смену руководства от одного периода к другому, что позже стало стандартным паттерном, характерным для индивидуальных выступлений.Он направлен на то, чтобы узнать об изменениях и прогрессе, достигнутом Art Lingkung, чтобы узнать его различные элементы. Используемый метод - описательный метод анализа с качественным подходом. Этот метод используется для сообщения об инциденте, который находится в поле, или описания фактических событий в соответствии с фактами в поле, а затем собранные данные обрабатываются в процессе анализа. Тайуб в форме перформанса. Лингкунг состоит из перформансов с точки зрения используемой структуры, начала, содержания и закрытия. До сих пор искусство тайуба в Art Blooms Lingkung Gentra Pusaka Buana может продолжать свое существование в мероприятии, организованном правительством и обществом как праздник. Ключевые слова: Art Tayub, Mekar Gentra Pusaka Buana, Kosar II, Subang

Авторские права © 2013

Валидация 46 локусов, связанных с признаками фертильности самок крупного рогатого скота | BMC Genomics

Популяция исследования

Это исследование было проведено с одобрения Институционального комитета по уходу и использованию животных в Университете штата Вашингтон (4295).Телки голштинской породы ( n = 3359) из коммерческого предприятия по выращиванию телок в Парме, штат Айдахо, были подвергнуты искусственному осеменению (AI) для определения HCR. Телки были выведены после наблюдаемой течки после достижения примерно 11–13-месячного возраста, минимальной высоты 129 см в холке и минимального веса 390 кг. Телки были выведены с помощью искусственного интеллекта со спермой 51 различных производителей голштинской породы. Беременность определялась путем ректальной пальпации матки через 35 дней после искусственного осеменения, а записи о состоянии здоровья DairyComp305 (Valley Agricultural Software, Туларе, Калифорния) использовались для исключения телок, которые впоследствии прервали теленка.После фенотипической оценки 3359 телок, 497 телок, зачатых с помощью первой службы искусственного интеллекта, 215 телок, зачатых после или после четвертой службы искусственного интеллекта, и 190 телок, которые так и не зачали, несмотря на по крайней мере 4 службы искусственного интеллекта, были отобраны для включения в настоящее исследование.

Фенотипы

Успешная беременность после первой службы искусственного интеллекта использовалась в качестве первого фенотипа. HCR до первого обслуживания (HCR1) сравнил 497 телок, которые были беременны после первого обслуживания, с 405 телками, которые не забеременели после первого обслуживания. Второй интересующий фенотип, который отражает количество раз, когда телка была выведена до наступления беременности (TBRD) со спермой от одного или нескольких производителей, сравнивает 497 телок, забеременевших после первой службы искусственного осеменения (код 1), с 215 телками. которые достигли беременности только после четвертой ( n = 208) и пятой ( n = 7) службы искусственного интеллекта (обозначены как 4 и 5, соответственно). Частота зачатия между производителями AI не была значимой ( P = 0,07), поэтому неспособность зачать ребенка не была связана с бесплодием служебного производителя.Ни в одной из служб искусственного интеллекта не использовалась сперма, отсортированная по полу, что могло повлиять на частоту зачатия. Кроме того, нетелей, которые не зачали во время первой службы, обычно перед отбором скрещивали с разными быками, что еще больше ограничивало возможность неплодородных телок из-за того, что их неоднократно скрещивали с быком с низкой фертильностью. Телки, достигшие успешной беременности в четвертой и пятой службах искусственного осеменения, остались в качестве замены, хотя они были менее желательными из-за дополнительных затрат, понесенных до их первой лактации.Примечательно, что 159 телок, которые не смогли забеременеть при четвертой попытке искусственного интеллекта, были забиты до пятой службы искусственного интеллекта. Поскольку в данном исследовании эти телки никогда не зачаты, они были исключены из анализа TBRD, но включены в анализ HCR1. Только 23 телки, которые не смогли зачать ребенка после четвертой попытки искусственного интеллекта, были выведены в пятый раз. Это сравнение первого оплодотворенного зачатия с телками, которым требовалось 4 или 5 услуг для поддержания беременности до 35 дня, было использовано для представления крайних фенотипических различий в фертильности телок и для увеличения статистической мощности.

Оценка статуса беременности на 35-й день после размножения измеряет результат нескольких физиологических процессов, включая овуляцию, оплодотворение, образование бластоцисты с ростом в удлиненный концептус, передачу сигналов распознавания беременности и развитие эмбриона, а также хориоаллантоисную плаценту. Следовательно, фенотипы HCR1 и TBRD представляют собой сложный фенотип, в котором многие факторы играют роль в том, что телка беременна или вскрывается на 35 день после размножения. Идентификация локусов, связанных с HCR1 и TBRD, и их функциональных отношений с этими специфическими факторами, поможет в дальнейшем понимании генетических механизмов, важных для установления беременности у голштинского молочного скота.

Выделение ДНК и генотипирование

Примерно 16 мл цельной крови было собрано в пробирки с ЭДТА посредством венепункции хвостовой вены. Затем ДНК экстрагировали из осадка лейкоцитов с использованием набора для экстракции ДНК Puregene (Джентра, Миннеаполис, Миннесота) в соответствии с инструкциями производителя. ДНК количественно определяли с помощью спектрофотометра Nanodrop 1000 (Thermo Fisher Scientific, Уилмингтон, Делавэр) и генотипировали с помощью чипа Illumina (Сан-Диего, Калифорния) BovineHD BeadChip в Neogen Laboratories (Линкольн, Северная Каролина).Illumina BovineHD BeadChip содержит 778 962 однонуклеотидных полиморфизма (SNP) со средним и медианным расстоянием между SNP 3,43 kb и 2,68 kb, соответственно [21].

Контроль качества

Животные были исключены из исследования, когда> 10% генотипов BovineHD BeadChip оказались неуспешными ( n = 49) или если были несоответствия в их племенных записях ( n = 14). В результате осталось 468 телок, зачатых от первого искусственного интеллекта, 203 телок, зачатых после четвертого искусственного интеллекта или после него, и 168 телок, которые так и не зачали.SNP удалялись, когда> 10% генотипов не удавалось ( n = 52 507), частота минорных аллелей была <1% ( n = 134 405) и / или если SNP не удавалось выполнить тестирование равновесия Харди-Вайнберга ( P ). <1 × 10 -25 , n = 497). После проверки качества для GWAA осталось 590 553 SNP.

Полногеномный ассоциативный анализ

Для этого исследования были выполнены два GWAA. Первые исследовали локусы, связанные с HCR1, а вторые исследовали локусы, связанные с TBRD.GWAA были выполнены с использованием эффективного подхода с ускорением ассоциаций смешанной модели с матрицей отношений (EMMAX) с использованием аддитивных, доминантных и рецессивных моделей, включенных в программное обеспечение SNP и Variation Suite (SVS) версии 9.1 (Golden Helix, Bozeman, MT) [ 22]. Аддитивная модель была разработана для выявления ассоциаций, которые зависят от значения аллелей, имеющих аддитивные эффекты; где наличие двух минорных аллелей (aa) в два раза выше вероятности влияния на фенотип (зачатие), чем отсутствие минорных аллелей (AA), и вдвое меньше, когда присутствует только один минорный аллель (Aa).В доминантной модели тест ассоциации заключался в том, был ли связан хотя бы один минорный (Aa или aa) аллель с зачатием по сравнению с гомозиготным генотипом (AA), у которого не было минорного аллеля. Рецессивная модель проверяла, была ли связь с зачатием, когда присутствовали два минорных аллеля (аа) по сравнению с наличием одного минорного аллеля (Аа) или отсутствием минорных аллелей (АА). Общая смешанная модель была описана как y = + Z u + ϵ, где y объясняет вектор наблюдаемых фенотипов n × 1, X был n × f матрица фиксированных эффектов ( f ), β был вектором f × 1, содержащим фиксированные коэффициенты эффекта, и Z был матрицей n × t , связывающей случайные эффекты ( t ) на фенотип, а и были случайным эффектом смешанной модели [23].Модель предполагает, что невязки независимы с идентичным распределением, так что Var ( u ) = σ g 2 K и ( ϵ ) = σ e 2 I и Var ( y ) = σ g 2 ZKZ 14 2 I . 2 \) было средовой (ошибочной) дисперсией [24]. SVS может потенциально переоценить наследуемость и стандартную ошибку при выполнении EMMAX, если размер популяции невелик. Учитывая эту возможность, второй анализ, AI-REML, также был проведен в SVS для оценки наследуемости в сочетании с геномным наилучшим линейным несмещенным прогнозом (GBLUP), который использует матрицу геномных отношений эффектов замещения аллелей по маркеру [25, 26] и алгоритм средней информации для оценки компонентов дисперсии [27, 28].Дополнительная документация по методам, применяемым в SVS, подробно описана по адресу: (http://doc.goldenhelix.com/SVS/latest/svsmanual/mixedModelMethods/overview.html) [22].

Идентификация локусов, связанных с HCR1 и TBRD, была основана на пороге для всего генома для нескорректированных значений P- P <5,0 × 10 -8 , как рекомендовано Международным консорциумом HapMap [29, 30]. Позиционные гены-кандидаты были идентифицированы в регионах размером 17 т.п.н., окружающих SNP, связанные с HCR и TBRD.Размер позиционной области-кандидата, окружающей ассоциированные SNP, был основан на среднем размере блока гаплотипа (17 т.п.н.) телок голштинской породы с использованием критериев, предложенных Gabriel et al. [31] и осуществляется в SVS. Расположение локусов было предоставлено на основе UMD 3.1 (ftp://ftp.cbcb.umd.edu/pub/data/Bos_taurus/) и ARS-UCD 1.2 (https://www.animalgenome.org/repository/cattle/UMC_bovine_coordinates/ ) для облегчения сравнения предыдущих исследований с координатами UMD 3.1 и недавно опубликованной сборки [32].

Подтверждение ассоциированных локусов необходимо от независимых популяций крупного рогатого скота для локусов, которые будут использоваться в геномной селекции или в функциональных исследованиях, чтобы выявить механизмы фертильности. Поэтому локусы, связанные с HCR1 и TBRD, сравнивали с 22 предыдущими исследованиями, в которых изучалась фертильность как молочного, так и мясного скота. В этих исследованиях изучались различные характеристики фертильности, в том числе: количество дней до первой родовспоможения, процент невозвращений и интервал между отелами [19, 33], успешность беременности на 28-й [34] или 42-й день [35], отел до первой постановки [36 ], уровень оплодотворения у телок и коров [37,38,39], а также послеродовой период анестезии [40]. Расположение локусов было предоставлено на основе UMD 3.1 (ftp://ftp.cbcb.umd.edu/pub/data/Bos_taurus/) и ARS-UCD 1.2 (https://www.animalgenome.org/repository/cattle/UMC_bovine_coordinates/ ). Было установлено, что локусы совпадают, когда ассоциированные SNP из двух разных популяций находились в неравновесном сцеплении (D ’> 0,7) [41].

Сетевой анализ

Для определения взаимодействия позиционных генов-кандидатов, идентифицированных в GWAA, Анализ путей изобретательности (IPA, Ingenuity® Systems, https: // www.ingenuity.com), и канонические пути были определены с использованием точного теста Фишера с поправкой на множественное тестирование Бенджамини-Хохберга ( P <0,01). Канонические пути идентифицируют генные сети, в которых присутствуют позиционные гены-кандидаты и взаимодействуют друг с другом. Главные и вышестоящие регуляторы были идентифицированы с использованием значения значимости, скорректированного на сетевое смещение ( P <0,01), которое удалило смещение для генов-концентраторов. Анализ вышестоящих регуляторов определяет молекулы, которые непосредственно регулируют гены.Анализ главных регуляторов идентифицирует молекулы, которые имеют косвенные отношения к позиционным генам-кандидатам через вышестоящие регуляторы. Из позиционных генов-кандидатов, идентифицированных в GWAA, 296 генов были сопоставлены с наборами данных генов человека, мыши или крысы, курируемыми IPA, и использовались для идентификации канонических путей, вышестоящих и главных регуляторов.

Результаты и обсуждение

Аддитивная модель GWAA идентифицировала 116 ассоциированных локусов ( P <5.0 × 10 -8 ) с HCR1, тогда как доминантная и рецессивная модели идентифицировали 187 и 28 локусов соответственно (рис. 1 и 2a; дополнительный файл 1: таблица S1). Все локусы, общие для аддитивной и доминантной моделей, за исключением девяти (рис. 2а), были более значимыми в доминантной модели, включая четыре локуса, которые имели эквивалентные значения P в обоих, предполагая, что эти доминантные локусы проявляли некоторые аддитивные эффекты. Один из локусов, расположенный на хромосоме Bos taurus (BTA) 4, был ассоциирован ( P <5.0 × 10 -8 ) с HCR1 во всех (аддитивных, доминантных и рецессивных) моделях (таблица 1).

Рис. 1

Аддитивные ( a ), доминантные ( b ) и рецессивные ( c ) графики Манхэттена для коэффициента зачатия первой службы. Однонуклеотидные полиморфизмы представлены одной точкой. Отрицательный логарифм 10 ( P -значения) ≥ 7,3 (черная линия) на оси Y предоставил доказательства ассоциации ( P <5,0 × 10 −8 ) [25, 26].Хромосомы крупного рогатого скота перечислены на оси абсцисс.

Рис. 2

Взаимоотношения локусов, ассоциированных в генотипических моделях и между фенотипами. Сравнение локусов, связанных с частотой зачатия телок при первом обслуживании (HCR1; панель a ), количеством услуг до зачатия (TBRD; панель b ) и между HCR1 и TBRD (панель c ) по всем трем (добавочная, доминантные и рецессивные) генотипические модели

Таблица 1 Пять основных локусов, связанных с частотой зачатия телок при первом обслуживании (HCR1)

Для TBRD GWAA аддитивная, доминантная и рецессивная модели идентифицировали 235, 362 и 69 связанных локусов ( P <5.0 × 10 - 8 ) с TBRD соответственно (рис. 2b и 3; дополнительный файл 1: таблица S2). Четыре локуса, которые имели сильные ассоциации в аддитивной модели (BTA1 на 88 МБ, BTA4 на 37 МБ, BTA5 на 62 МБ и BTA17 на 68 МБ), были связаны с TBRD во всех трех моделях (рис. 2b; таблица 2; дополнительный файл 1: Таблица S2).

Рис. 3

Аддитивные ( a ), доминантные ( b ) и рецессивные ( c ) графики Манхэттена для количества вязок, необходимых для успешной беременности.Однонуклеотидные полиморфизмы представлены одной точкой. Отрицательный логарифм 10 ( P -значения) ≥ 7,3 (черная линия) на оси Y предоставил доказательства ассоциации ( P <5,0 × 10 - 8 ) [24, 25]. Хромосомы крупного рогатого скота перечислены на оси x

Таблица 2 Лучшие пять локусов, связанных с частотой оплодотворения телок при повторных услугах искусственного осеменения (TBRD)

Локусы, связанные с HCR1 и TBRD, сравнивались, чтобы определить, являются ли локусы общими для обоих фенотипов (таблица 3; рис.2в). Когда пять лучших локусов, идентифицированных в HCR1 и TBRD, сравнивались в аддитивной и доминантной моделях, четыре локуса на BTA4, BTA10, BTA20 и BTA27 были общими (таблица 3). Кроме того, локус на BTA4 был общим для всех фенотипов и моделей (рис. 2c).

Таблица 3 Лучшие аддитивные и доминантные локусы по скорости зачатия при первом обслуживании и повторных услугах ИИ

Многие из SNP, связанных с HCR1 и TBRD, не демонстрировали многих близлежащих поддерживающих SNP или «деревьев», которые, как ожидается, часто будут сопровождать важные SNP определение ассоциированных локусов.Признаки с доминантными или рецессивными генными эффектами будут демонстрировать эти характеристики там, где отсутствуют окружающие значимые SNP. Когда ассоциированные SNP оценивались в трех моделях наследования, было обнаружено, что многие из локусов имеют более высокое значение в моделях доминантных или рецессивных генов, чем в модели аддитивных генов. Хотя это объясняет, почему в некоторых из этих регионов может наблюдаться нехватка поддерживающих SNP, дальнейшее исследование выявило еще один фактор, который, возможно, также повлиял на эту архитектуру.

Структурные варианты или варианты числа копий (CNV), включая делеции, дупликации, вставки, инверсии и транслокации хромосомных областей, также могут влиять на количество поддерживающих SNP, лежащих в основе обнаруженной ассоциации [42]. У крупного рогатого скота CNV составляют примерно от 2 до 7% генома [43]. Однако истинная частота CNV у крупного рогатого скота недостаточно изучена и может зависеть от породы, размера выборки, алгоритмов обнаружения CNV и платформ, используемых для генотипирования / секвенирования [43]. Чтобы изучить эту возможность, были исследованы связанные SNP, чтобы определить, находятся ли они в пределах границ CNV и могут ли определенные границы CNV потенциально объяснить, почему соседние SNP не были связаны с HCR1 или TBRD. Для этого в Ensembl (http://ensembl.org/) [44] выполнялся поиск SNP по местоположению, чтобы определить, находится ли какой-либо связанный SNP в CNV любого типа. Из 228 локусов HCR1 38 локусов (16,6%) присутствовали в одном или нескольких CNV, а 70 из 446 локусов TBRD (15.7%) были в пределах CNV (дополнительный файл 1: таблицы S1-S2). Если оценивались только локусы, которые были наиболее значимыми в аддитивной модели, 6 из 24 (25%) локусов HCR1 и 7 из 71 (9,8%) локуса TBRD были расположены в пределах CNV. Кроме того, SNP, которые находятся рядом с границей или краем CNV, также будут иметь такой же эффект, как и SNP в CNV. Следовательно, ограничение идентификации SNP в CNV, которые связаны с HCR1 и TBRD, представляет собой консервативную оценку локусов, на которые влияют CNV, и которым не хватает типичного количества поддерживающих SNP, лежащих в основе обнаруженной ассоциации.

Поскольку BovineHD BeadChip не был разработан для идентификации CNV, он не является хорошим инструментом для оценки ассоциации CNV с признаками [45]. Поэтому мы не проводили отдельный анализ CNV для этого исследования. Однако предыдущие исследования крупного рогатого скота показали, что CNV играют роль в фертильности. Например, исследование молочных пород скота Nordic Red выявило делецию 660 kb на BTA12, которая была связана с нарушением фертильности коров [46]. В то время как другое исследование McDaneld et al. (2014) [47] идентифицировали делецию длиной примерно 70 т.п.н. на BTA5, которая была связана со сниженной репродуктивной эффективностью во множественных популяциях Bos indicus .Идентификация многих значимых локусов внутри CNV в текущем исследовании подтверждает предположение, что CNV могут играть важную роль в фертильности самок крупного рогатого скота. Для полного выяснения локусов, связанных с HCR1 и TBRD, необходимы дополнительные анализы CNV среди разнообразных пород крупного рогатого скота.

Наконец, отсутствие поддерживающих SNP, окружающих ведущие SNP, связанные с HCR1 и TBRD, может указывать на то, что некоторые из этих ассоциаций являются ложноположительными. Локусы с наибольшим риском ложноположительного результата - это 9 аддитивных локусов, связанных с HCR1, и 18 аддитивных локусов (включая 2 QTL, которые были общими с HCR1), ассоциированные с TBRD, которые не присутствовали в CNV и которые не были обнаружены в быть связанным с фертильностью в предыдущем исследовании.Чтобы уменьшить вероятность сообщения о ложноположительных результатах, был установлен высокий порог значимости ( P <5 × 10 - 8 ) для ассоциации с HCR1 и TBRD. Чтобы определить, могут ли другие факторы способствовать отсутствию поддерживающих SNP, была исследована плотность и неравновесие по сцеплению SNP, окружающих каждый локус, и была оценена частота минорных аллелей (MAF) связанного SNP, чтобы определить, была ли она меньше 0,05 ( редкий). После исследования плотности SNP, окружающих 25 ассоциированных локусов, не было никаких доказательств отсутствия SNP, фланкирующих эти локусы.Редкий MAF (0,01

Из четырех наиболее значимых локусов, общих для HCR1 и TBRD в аддитивной и доминантной моделях, три имеют позиционные гены-кандидаты (Таблица 3). Эти три локуса и их позиционные гены-кандидаты следующие: микроРНК 383 ( MIR383 ) на BTA27, член 7 подсемейства M транзиторного рецепторного потенциального катионного канала ( TRPM7 ) на BTA10 и связанный с мембраной палец 11 кольцевого CH-типа ( MARCh21 ) на BTA20. Основной функциональной темой, идентифицированной среди позиционных генов-кандидатов, была пролиферация клеток, которая имеет решающее значение на ранних сроках беременности для роста фолликулов, формирования желтого тела, восприимчивости матки и развития эмбриона.Мутации, влияющие на пролиферацию, могут препятствовать распознаванию беременности и имплантации, что приводит к снижению фертильности.

MIR383, микроРНК, которая находится в интроне 1 большого дзета-саркогликана ( SGCZ) гена у людей, мышей и крыс [48]. МикроРНК представляют собой небольшие некодирующие РНК из 19-25 нуклеотидов, которые посттранскрипционно регулируют экспрессию генов посредством связывания 3'-нетранслируемых областей. У мышей MIR383 действует, ингибируя РНК-связывающий мотив фактора транскрипции RBMS1 , который взаимодействует с c-Myc , подавляя высвобождение эстрогена [48]. Mir383 также стимулирует экспрессию CYP19A1 , который является ферментом, ограничивающим скорость синтеза эстрогена [48]. У мышей Sgcz и Mir383 действуют вместе, чтобы влиять на синтез гормонов, восприимчивость эндометрия и рост эмбрионов [48]. Хотя существует мало исследований функции MIR383 у крупного рогатого скота, работа с другими видами подчеркивает, что мутация, затрагивающая MIR383 , может повлиять на успех беременности.

TRPM7 участвует во многих клеточных процессах и имеет высокое сродство к кальцию и магнию [49, 50].Кальций регулирует множество процессов, от подвижности клеток до пролиферации клеток, включая возобновление мейоза после оплодотворения [51]. Точно так же магний играет фундаментальную роль во время эмбрионального развития человека, поскольку его дефицит связан с дефектами роста и развития плода [52]. Генетическое удаление TRPM7 приводит к смерти мышей до 7,5 дня эмбриогенеза, что указывает на его роль в преимплантационном развитии через нарушение регуляции гомеостаза магния в ооцитах и ​​эмбрионах [53].Цинк - еще один ион, который использует каналы TRPM7 , который также участвует в фертильности и эмбриональном развитии. Цинк сильно регулирует созревание ооцитов [54], которое начинается с мейотического деления растущих ооцитов. Ооциты останавливаются на профазе I до тех пор, пока не произойдет овуляция, в это время мейоз продолжается до метафазы II, где он снова останавливается до оплодотворения [55]. После оплодотворения ооцит проходит через мейоз и начинает митотическое деление эмбриогенеза [55]. Исследования показали, что внутриклеточный дефицит цинка вызывает остановку мейоза вскоре после овуляции у млекопитающих [54, 56], что может привести к нежизнеспособным эмбрионам и неудаче имплантации.Следовательно, мутации, влияющие на способность оплодотворенного эмбриона успешно проходить мейоз, могут привести к потере беременности.

В отличие от MIR383 и TRPM7 , мало что известно о роли MARCh21, , особенно в женской фертильности. MARCh21 участвует в мужской фертильности благодаря своей роли сортировки белков в сперматидах и проявляет повышенную экспрессию в семенниках [57]. MARCh21 также экспрессируется в головном мозге и гипофизе и нацелен на CD4 для убиквитинирования.Метилирование MARCh21 было идентифицировано как плохой прогностический индикатор для мелкоклеточного рака легкого, но его роль в женской фертильности неизвестна [58].

Сетевой анализ выявил ( P <0,01) два канонических пути IPA, сигнальный путь рецептора, связанный с G-белком, и сигнальный путь, опосредованный цАМФ, которые были связаны с позиционными генами-кандидатами для HCR1 и TBRD (Таблица 4). Сигнальный путь рецептора, связанный с G-белком, включал 14 позиционных генов-кандидатов, из которых 10 были общими с сигнальным путем, опосредованным цАМФ. Всего в сигнальном пути, опосредованном цАМФ, присутствовало 12 позиционных генов-кандидатов.

Таблица 4 Анализ путей изобретательности канонические пути, связанные со скоростью оплодотворения телок (BH P <0,01)

Хотя не было выявлено никаких значимых регуляторов выше по течению, было идентифицировано 197 главных регуляторов ( P <0,01) (дополнительный файл 1 : Таблица S3). Главным регулятором, который был наиболее значимым ( P = 3 × 10 - 4 ), был фактор транскрипции E2F 3 ( E2F3 ), который подавляется во время периода имплантации в стромальные клетки матки человека [59] .Этот фактор транскрипции играет роль в пролиферации клеток, прогрессировании клеточного цикла, апоптозе и переходе клетки из фазы G1 и S [60, 61]. Это также было связано с задержкой внутриутробного развития и ограничением роста плода через его целевой ген miR-141 [62]. Фактор транскрипции E2F косвенно регулирует 87 позиционных генов-кандидатов, связанных с HCR1 и TBRD, включая общих позиционных кандидатов MIR383 и SGCZ (дополнительный файл 1: Таблица S3).Было 67 значимых ( P <0,01) главных регуляторов для позиционного гена кандидата MIR383 и 66 для SGCZ , но никакие главные регуляторы не были значимыми для MARCh21 или TRPM7. Большинство главных регуляторов для MIR383 и SGCZ были общими, поскольку только семь главных регуляторов были уникальными для MIR383 , а шесть главных регуляторов были уникальными для SGCZ (дополнительный файл 1: Таблица S4).

После сравнения локусов, идентифицированных в текущем исследовании, с 22 предыдущими GWAA, 46 геномных областей были проверены (таблица 5).Эти локусы были идентифицированы как внутри породы голштинская [19, 33, 35, 37, 38, 39], так и среди других пород, таких как помеси ангус [34], брахман [40], брангус [40], джерси [19] и тропическая композитная порода [40]. Идентификация областей генома в независимых популяциях и между породами предполагает, что эти области находятся рядом с причинной мутацией и имеют общую функцию, связанную с фертильностью крупного рогатого скота. В конечном итоге идентификация причинных мутаций, связанных с фертильностью, позволит предприятиям молочной и мясной промышленности более эффективно использовать геномный отбор для генетического улучшения без необходимости постоянно переоценивать валидность маркеров, которые находятся только в LD с причинными мутациями, и лучше разбираться в репродуктивном процессе.

Таблица 5 Подтвержденные локусы, связанные с фертильностью крупного рогатого скота

Используя матрицы отношений на основе маркеров (EMMAX), псевдонаследуемость была оценена как 0,64 для HCR1 и 0,76 для TBRD, тогда как оценки наследственности были несколько ниже при использовании AI-REML (т. Е. 0,56 для HCR1 и 0,74 для TBRD). Более того, оба метода дали оценки наследуемости, которые были намного выше, чем ранее сообщалось для признаков фертильности [5, 6, 10, 63,64,65,66,67]. Однако следует отметить, что использованный здесь дизайн исследования, который включал анализ генотипов телок из одной популяции, выбранных из хвостов наблюдаемых фенотипических распределений, приводит к смещению выборки.Эта систематическая ошибка выборки может привести к завышенным оценкам наследуемости, которые не будут заметны в большой случайно выбранной популяции. Однако набор телок из хвостов фенотипического распределения теоретически облегчает обнаружение локусов умеренного и большого эффекта с меньшим количеством выборок, что делает его привлекательным подходом к GWAA.

По сравнению с оценками наследуемости, приведенными здесь, эти оценки могут также увеличиваться, когда влияние окружающей среды минимизировано, а точность фенотипических измерений максимальна.В этом исследовании фенотипы были точно измерены и взяты образцы из одной популяции и места, где воздействие окружающей среды было сведено к минимуму. Ожидается, что более крупные исследования, в которых оценки наследственности были произведены путем отбора проб из многих популяций и мест, будут иметь большее влияние на окружающую среду, большие вариации в измерении фенотипов и гораздо меньшие оценки наследуемости (таблица 6) [5, 6, 10, 63,64 , 65,66,67]. Например, в предыдущем исследовании с использованием пороговой модели наследуемость HCR оценивалась как 0.01, на основе репродуктивных данных 362 512 телок голштинской породы в возрасте от 11 до 27 месяцев, выведенных AI в период с марта 2003 г. по август 2005 г. [64]. Трудно напрямую сравнить или согласовать эту оценку с результатами текущего исследования (т.е. 3300 телок в возрасте от 12 до 14 месяцев, выращенных в одном и том же учреждении в течение всего лишь нескольких месяцев). Кроме того, следует проявлять осторожность при сравнении оценок наследственности по признакам фертильности телок или коров, когда фенотипы, стратегии управления, статус фертильности производителей, используемых для разведения, и структура исследуемых популяций весьма неоднородны (Таблица 6).

Таблица 6 Оценки наследуемости признаков фертильности молочного скота во всем мире 1

Фенотипы фертильности, используемые для геномной селекции, разнообразны, и более стандартизованный фенотип для телок облегчил бы сравнение оценок наследуемости и локусов, связанных с фертильностью [54]. Как показано в Таблице 4, в настоящее время в молочной промышленности используется множество различных определений признаков фертильности, однако лишь немногие из них включают количество услуг, необходимых для достижения беременности.Уровень невозврата до 56 дней и интервал времени от первого осеменения до успешного осеменения являются двумя примерами показателей фертильности телок, когда количество услуг не учитывается. Различия в оценках наследственности, о которых сообщалось в этом исследовании, и в оценках, проведенных ранее, также частично могут быть связаны с различиями в измеренных фенотипах [63,64,65,66,67].

Предпосылки

Введение

Фокальный сегментарный гломерулосклероз (ФСГС) является наиболее частой причиной стероид-резистентного нефротического синдрома как у детей, так и у взрослых [1].Прогноз для нелеченых пациентов с ФСГС плохой, поскольку у 50–70% пациентов разовьется терминальная стадия почечной недостаточности (ТПН) [2].

Мутации в подоцине (NPHS2) и PLCE1 вызывают аутосомно-рецессивный FSGS, тогда как аутосомно-доминантный FSGS вызывается мутациями в WT1, CD2AP, ACTN4 и TRPC6 [3], [4], [5], [6], [7] ], [8], [9], [10]. Аутосомно-рецессивные формы проявляются в детстве, тогда как аутосомно-доминантные формы вызывают нефротический синдром (NS) у взрослых. Гены моногенных заболеваний NS кодируют белки, которые необходимы для развития нефронов и неповрежденной щелевой диафрагмы подоцитов [11].

Гетерозиготные мутации TRPC6 были недавно идентифицированы как вызывающие аутосомно-доминантный FSGS с поздним началом [9], [10], [12]. Ген TRPC6 расположен на длинном плече хромосомы 11 (11q22.1) и кодирует короткий переходный канонический потенциал рецептора 6 (TRPC6). TRPC6 принадлежит к семейству белков канала транзиторного рецепторного потенциала (TRP), разнообразной группе потенциалонезависимых катион-проницаемых каналов, которые экспрессируются во многих тканях, включая легкие, почки, мозг, мышцы, содержащие ткани и клетки крови, в которых они участвуют. множество различных сигнальных каскадов клеточного роста и механочувствительности [9], [13].Подсемейства TRPC (TRPC1-TRPC7) важны для увеличения внутриклеточной концентрации Ca 2+ в ответ на активацию рецепторов G-связанных белков и рецепторных тирозинкиназ [14]. TRPC6 является каналом, управляемым рецептором, и напрямую активируется диацилглицерином (DAG) в ответ на сигналы, опосредованные фосфолипазой C (PLC) [15]. В почках TRPC6 экспрессируется как в почечных канальцах, так и в клубочках, с преобладанием в подоцитах. TRPC6 является важным компонентом щелевой диафрагмы подоцитов, где он интегрирован в сигнальный комплекс, который взаимодействует с нефрином и подоцином [10].Недавнее исследование показало, что индукция экспрессии TRPC6 в культивируемых подоцитах вызывает потерю актиновых стрессовых волокон и протеинурию у мышей, тем самым подтверждая, что TRPC6 в подоцитах функционально связан с актиновым цитоскелетом [16]. Точная патофизиология, посредством которой нарушение регуляции притока Ca 2+ у пациентов с мутациями TRPC6 приводит к FSGS, остается неясной. К настоящему времени семь различных мутаций в TRPC6 были идентифицированы в семи разных семьях из разного этнического происхождения [9], [10], [12].У всех пациентов проявилось заболевание в возрасте от 18 до 57 лет. Четыре из этих семи мутаций (R895C, E897K, P112Q и Q889K) допускают значительно более высокие токи Ca 2+ по сравнению с током TRPC6 Ca 2+ дикого типа. Более того, индукция экспрессии белка TRPC6 дикого типа связана с повышенным содержанием клеточного кальция во время синдромов приобретенной протеинурии. Эти находки указывают на то, что большое количество TRPC6 каналов дикого типа в подоцитах вносит вклад в такую ​​же патофизиологию, как и присутствие мутировавших, чрезмерно активных каналов.Тот факт, что как гиперактивный мутировавший, так и высокая экспрессия TRPC6 дикого типа могут вызывать синдромы протеинурии с разным временем начала, предполагает, что уровень кальция, доступный в отростке стопы, является определяющим фактором активности заболевания. Сравнение средних потоков внутрь и наружу каналов и времени инактивации всех опубликованных мутаций показывает, что все мутации приводят к увеличению активности канала TRPC6 за счет одного из вышеуказанных механизмов, приток пика кальция M132T - это самый большой приток пика кальция, описанный до сих пор (Таблица 1).Результаты этой статьи подтверждают гипотезу зависимости реакции от дозы кальция, показывающей, что новая мутация человека с наибольшим притоком кальция и сильной задержкой активности каналов может привести к раннему развитию ФСГС.

10.1371 / journal.pone.0007771.t001 Таблица 1 Корреляция генотип-фенотип всех опубликованных мутаций.
Мутация Усредненная амплитуда входящего тока мутантного канала Среднее увеличение входящего тока мутантного канала по сравнению с каналом WT Увеличение потоков Ca2 + или приток мутантного канала по сравнению с wt-каналом Отложенная деактивация канала Активация по Возраст начала болезни (в годах) Номер ссылки
M132T −701 пА / пФ (−120 мВ) 6. 7 10 Да ** ГЧ 9–30 текущее исследование
P112Q −9 нА (100 мкМ UTP) 3 1,7 nd UTP 18–56 9
P112Q nd nd 1,7 nd Анг-2 18–56 9
R895C −230 (−100 мВ) 7.7 nd ГЧ 18–46 10
E897K -150 (-100 мВ) 5 nd ГЧ 24–35 10
N143S −300 пА / пФ (−120 мВ) 2,1 Нет ** 27–39 текущее исследование
S270T −43,1 пА / пФ −0. 6 * Да ** ГЧ 17–52 10, текущее исследование
K874X -112,3 пА / пФ 0,08 Да ** ГЧ 27–57 10, текущее исследование
Q889K nd nd 7,5 nd OAG 35–41 12

CCh = карбахол; UTP = уридин-5'-трифосфат; Ang-2 = ангиотензин II; nd = не сделано.

*

С270 ток был меньше, чем у TRPC6 wt. Соотношение входящих токов: N143s / WT = 2,1; K874X / WT = 0,08.

**

M132T не отключился в течение 100 с. В среднем WT и N143S инактивируются на 60% за 10–20 с; тогда как S270T и K874X инактивировались на 10–15% в течение 79–90 с.

Мы провели анализ мутаций TRPC6 в 21 семейном случае с FSGS, которые были совместимы с аутосомно-доминантным наследованием, и определили новую мутацию TRPC6 как причину FSGS. У одного пациента заболевание проявилось уже в 9 лет.Чтобы изучить влияние M132T на функцию кальциевых каналов, мы экспрессировали M132T дикого типа и недавно созданный двойной мутант M132T / N143S в клетках HM1 (клетки эмбриональной почки человека, стабильно трансфицированные мускариновым рецептором M1). Мутант M132T значительно увеличивал входящие и исходящие токи Ca 2+ TRPC6 по сравнению с токами TRPC6 дикого типа. В отличие от тока TRPC6 дикого типа, мутант M132T не демонстрировал инактивацию после достижения пикового уровня при активации, и наблюдалось только незначительное снижение входящего тока, что представляет собой новый вариант дисфункции TRPC6.

Результаты Характеристики пациентов

Мы выявили 52 человека с ФСГС из 21 семьи, в которых сегрегация болезни была совместима с аутосомно-доминантным типом. По крайней мере, у одного больного человека в каждой семье был подтвержден биопсия ФСГС. Мы идентифицировали 14 семей с двумя пострадавшими членами, пять семей с тремя пораженными членами, одну семью с четырьмя пораженными членами и одну семью с пятью пораженными членами (Таблица S1). Ни у одного пациента не было мутаций в NPHS2 и WT-1. Возраст начала заболевания задокументирован у 38 пациентов.Средний возраст начала заболевания составлял 17,5 лет (от 2 до 70 лет). Набор пациентов для этого исследования был во всем мире с преобладанием лиц из (Центральной) Европы. Клинические характеристики перечислены в таблице S1.

Анализ мутаций TRPC6

Анализ мутаций TRPC6 путем прямого секвенирования экзонов всех 13 экзонов был выполнен по крайней мере у одного пораженного индивидуума с подтвержденным биопсией FSGS из всех 21 выбранной семьи. В семье F505, семье турецкого происхождения с двумя поражениями, мы обнаружили новую мутацию TRPC6, которая отделилась от болезни (рис. 1A).Член семьи III-2 проявил заболевание в возрасте 30 лет и получил ФСГС, подтвержденный биопсией. У ее сына, IV-1, заболевание проявилось в возрасте 9 лет, а также ФСГС, подтвержденный биопсией. У обоих пациентов был стероид-резистентный нефротический синдром (SRNS) и терминальная стадия почечной недостаточности через 0,5 (III-2) и 9,5 (IV-1) лет после начала, соответственно.

10.1371 / journal.pone.0007771.g001 Рисунок 1 Сегрегация и эволюционная консервация M132T.

(A) Родословная семейства FSGS F505 с поражениями III-2 и IV-1 совместима с аутосомно-доминантным наследованием.Закрашенные символы обозначают людей, страдающих ФСГС. Возраст начала заболевания (годы) указан в скобках. (B) Мутация TRPC6 в F505. Изменения нуклеотидов и аминокислот для M132T приведены выше в виде следов последовательности. Нормальная контрольная (NC) последовательность показана под мутированной последовательностью. Рамка считывания обозначена подчеркиванием всех триплетов кодонов на хроматограмме. (C) Эволюционная консервация TRPC6 Met 132 высоко консервативен в ходе эволюции вплоть до Drosophila Melanogaster.

Мутация изменяет Т на С в экзоне 5 (c.495T> C), который заменяет метионин на триптофан (M132T) (рис. 1B). Эта аминокислота высококонсервативна в процессе эволюции даже у Drosophila Melanogaster (рис. 1C) и расположена во втором внутриклеточном анкириновом повторе белка TRPC6. Мутация отсутствовала у> 140 здоровых контрольных лиц.

Были обнаружены следующие безобидные варианты последовательностей, которые представляют известные однонуклеотидные полиморфизмы (SNP): P15S; SNP rs3802829 был обнаружен у семи пациентов A404V; SNP rs36111323 был обнаружен еще у семи пациентов.Все другие варианты последовательности, которые были обнаружены в этой когорте (p.N561N, p.Y705Y, p.F843F и p.Q904Q), не привели к замене аминокислот.

Электрофизиологический анализ мутантного TRPC6 и TRPC6 дикого типа

Чтобы оценить функциональное значение мутации M132T, ток TRPC6 регистрировали через 36–48 часов трансфекции по протоколу линейного изменения напряжения в диапазоне от -120 до +100 мВ. На рис. 2А показан ток TRPC6 дикого типа, вызванный 100 мкМ карбахола (CCh). Зависимые от времени изменения амплитуды тока (рис. 2В) показали, что TRPC6 быстро активировался и достигал пикового уровня после того, как клетку стимулировали 100 мкМ CCh.Затем ток TRPC6 снизился примерно до 50% от пикового уровня тока и поддерживался на постоянном уровне тока. Перед применением ССН ток не был активирован (рис. 2А). Интересно, что мутант M132T показал значительно увеличенную амплитуду тока (рис. 2C). Средние амплитуды входящего и наружного тока M132T были почти в 3 и 5 раз больше, чем у TRPC6 wt (Рисунок 3). Второе примечательное различие между M132T и TRPC6 дикого типа заключалось в том, что M132T не демонстрировал инактивацию, и наблюдалось лишь незначительное зависящее от времени снижение входящего тока (Рисунок 2D).Положение M132T близко к ранее описанной мутации N143S и встречается в том же анкириновом домене [10]. Чтобы проверить, достиг ли M132T предела функции усиления, мы создали двойной мутант TRPC6 M132T / N143S, чтобы изучить положительные аддитивные эффекты на кинетику канала. Сначала мы протестировали свойства только известного мутанта FSGS TRPC6-N143S. Как показано на рис. 2E – F, N143S демонстрировал такую ​​же быструю активацию и инактивацию, что и TRPC6 дикого типа. Однако пиковая амплитуда входящего тока N143S была больше, чем у TRPC6 wt.Пиковая амплитуда выходящего тока, а также длительные токи (после инактивации) N143S существенно не отличались от TRPC6 wt. Свойства двойного мутанта M132T / N143S привели к аналогичным характеристикам тока, чем у M132T (рис. 2G – H). Ток M132T / N143S быстро достиг пика при применении CCh, и наблюдалась очень небольшая зависящая от времени инактивация (рис. 2H). Усредненные амплитуды входящего и выходящего тока, а также соотношение входящего и выходящего тока TRPC6, N143S, M132T и M132T / N143S показаны на рисунке 3 (n = 10 для каждой группы).

10.1371 / journal.pone.0007771.g002 Рисунок 2 Усиление функции мутантов TRPC6 M132T и M132T / N143S.

A, C, E и G: Типичные токи, вызванные протоколом линейного изменения напряжения в диапазоне от -120 до +100 мВ в присутствии 100 мкМ карбахола (CCh) в TRPC6 (A), M132T (C), N143S ( E) и M132T / 143S (G). Перед стимуляцией 100 мкМ CCh активации не наблюдалось. B, D, F и H: Зависящие от времени изменения входящего тока, измеренного при -120 мВ, и внешнего тока, измеренного при +100 мВ, wt TRPC6 (B), M132T (D), N143S (F) и M132T / 143S (ЧАС). TRPC6 и мутанты активировались только после нанесения 100 мкМ CCH. На обеих панелях D и H применяли N-метил-D-глюкамин (NMDG) для подтверждения отсутствия тока утечки. Для панелей B и F не было существенной разницы в амплитуде поддерживаемого тока между TRPC6 wt и N143S.

10.1371 / journal.pone.0007771.g003 Рисунок 3 Усредненная текущая амплитуда TRPC6 wt и мутантов.

A: Амплитуда внешнего тока измерена при +100 мВ (среднее ± SEM, n = 10). Амплитуда внешнего тока M132T и M132T / N143S была значительно больше, чем у TRPC6 wt.B: Амплитуда входящего тока, измеренная при -120 мВ (среднее ± SEM, n = 10). Амплитуда входящего тока N143S, M132T и M132T / N143S была статистически больше, чем у TRPC6 wt. C: отношение амплитуды входящего / выходящего тока. Обратите внимание, что амплитуда тока wt TRPC6 и N143S была измерена на пике амплитуды входящего и выходящего тока (как показано на рисунке 2). (*: p <0,05, **: p <0,01, по сравнению с TRPC6 wt).

Поскольку TRPC6 является неселективным катионным каналом, мы далее сравнили внутреннюю амплитуду тока Ca 2+ мутантов и TRPC6 дикого типа.Эти эксперименты проводились в условиях, когда Ca 2+ был единственным пермеатным катионом во внешнем растворе. Как показано на рисунке 4A, входящие токи Ca 2+ M132T и M132T / N143S были значительно больше, чем токи TRPC6 и N143S wt. Меньшие амплитуды тока Ca 2+ N143S и TRPC6 wt согласуются с их переходной функцией активации, как показано на рис. 2B и 2F. Средний входящий кальциевый ток M132T и M132T / N143S был примерно в 10 раз больше, чем у TRPC6 и N143S дикого типа (рис. 4B).

10.1371 / journal.pone.0007771.g004 Рисунок 4 Увеличение тока Ca 2+ у мутантов N143S, M132T и M132T / N143S.

A: Входящий ток TRPC6 дикого типа и мутантов, измеренный при -120 мВ в присутствии 100 мкМ CCH. Уровень входящего тока был близок к уровню 0 пА в растворе NMDG и увеличивался после воздействия на клетку 10 мМ растворов кальция / NMDG. Обратите внимание на значительно большую амплитуду кальциевого тока M132T и M132T / N143S по сравнению с TRPC6 и M143S wt. B: Усредненная амплитуда тока TRPC6, N143S, M132T и M132T / N143S при -120 мВ (среднее значение ± стандартная ошибка среднего, n = 4-7).(**: p <0,01 по сравнению с TRPC6 wt).

Обсуждение

Это исследование представляет одну из крупнейших когорт семейств FSGS, совместимых с аутосомно-доминантным наследованием, которое было исследовано на мутации TRPC6. В одном из 21 семейства FSGS, которые были совместимы с аутосомно-доминантной сегрегацией и проверены на мутации, мы идентифицировали новую гетерозиготную мутацию, вызывающую заболевание в TRPC6, что привело к раннему началу FSGS у одного из двух пораженных людей. Мутированный ионный канал вызывает очень значительное увеличение входящих и исходящих токов и не показывает инактивацию канала.К настоящему времени идентифицировано только семь различных мутаций TRPC6 в семи семьях, все они приводят к позднему началу FSGS [9], [10], [12], тогда как мутация M132T приводит к FSGS у детей.

Мы смогли показать с помощью записи тока всей клетки, что входящие токи M132T по сравнению с токами дикого типа были почти в 7 раз увеличены после стимуляции карбахолом. Средняя амплитуда наружного и внутреннего тока была в 3–5 раз выше по сравнению с током дикого типа, а амплитуда входящего тока Ca 2+ мутанта M132T была почти в 10 раз больше, чем у мутанта дикого типа.Мы также наблюдали, что мутант M132T не демонстрировал инактивацию канала, в отличие от канала дикого типа, ток которого снизился до 50% от пикового уровня тока после достижения пикового уровня. Четыре из ранее описанных мутаций TRPC6 (P112Q, R895C, E897K и Q899K) также показали усиление функции пика активности канала, что привело к увеличению притока Ca 2+ и увеличению амплитуды тока при активации [9], [10], [12]. Мутанты S270T и K874Stop показали увеличенное время до инактивации канала и, таким образом, привели к усилению функции катионного канала TRPC6. (10) В этом исследовании мы напрямую сравнили разное время инактивации и средние токи внутреннего и внешнего каналов всех опубликованных мутаций, см. Таблицу 1. Интересно, что мутант M132T не показал никакой инактивации в течение 100 секунд, мутанты S270T и K874X показали небольшая инактивация 10–15% в течение 79–90 с. Таким образом, эти результаты показывают, что все мутации TRPC6, идентифицированные к настоящему времени, приводят к повышенной активности ионных каналов TRPC6 либо за счет увеличения амплитуды тока, либо за счет задержки инактивации каналов.

Как нарушение инактивации M132T, так и 10-кратное увеличение среднего входящего кальциевого тока M132T объясняют раннее начало SRNS у F505 IV-1. Наши данные подтверждают концепцию, что мутации, ведущие к более выраженному увеличению притока кальция, в данном случае как за счет прямого увеличения притока кальция, так и за счет нарушенной инактивации каналов, также вызывают более тяжелое или, возможно, более раннее начало заболевания. Как сообщалось ранее, пациенты с вызывающими заболевание мутациями TRPC6 проявлялись в возрасте от 18 до 57 лет (см. Таблицу 1), рассмотрение мутировавшего TRPC6 было отклонено для детей с почечной недостаточностью.Поскольку впервые показано, что мутация TRPC6 вызывает раннее начало FSGS, необходимо рассматривать мутированный TRPC6 как возможную причину почечной недостаточности у детей.

Мутация N143S, о которой ранее сообщили Reiser et al, расположена очень близко к M132T, в одном и том же анкириновом повторе. (10) Что касается их близкого расположения, мы ожидали, что кинетика каналов обоих мутантов будет сходной. Первоначально токи N143S были описаны как незначительно отличающиеся от пиковой активности канала TRPC6 дикого типа.(10) В этом исследовании выходной пиковый ток мутанта N143S снова существенно не отличался от тока WT, но вызвал значительное увеличение амплитуды входящего пикового тока (рис. 3B).

Поскольку M132T имеет такой сильный кальциевый ток и мутации N143S и M132T расположены в одном анкириновом домене, мы намеревались исследовать, будут ли две мутации на N-конце иметь возможный аддитивный эффект в отношении функции каналов. Поэтому мы протестировали эффект двойного мутанта M132T / N143S, выдвинув гипотезу об экспоненциальном увеличении притока кальция и времени до инактивации каналов.Однако текущие амплитуды двойного мутанта M132T / N143S были аналогичны мутанту M132T, но не показали большего увеличения амплитуды тока, чем только мутант M132T (рис. 3). Две мутации в одном домене не могут вызвать экспоненциальный аддитивный эффект или изменение кинетики канала и еще больше увеличить приток кальция.

M132T приводит к сравнительно более высокому току кальция TRPC6, чем все другие известные мутации, даже в этом случае необходимо тщательно интерпретировать эти данные, учитывая, что в отдельных опубликованных исследованиях использовались разные стимуляторы каналов TRPC6.Высокий кальциевый ток M132T в подоцитах может служить объяснением причины раннего начала болезни ФСГС у этих пациентов.

Концепция эффекта дозы кальция, определяющего время начала заболевания, также подтверждается экспериментами на животных, где было показано, что временная сверхэкспрессия TRPC6 дикого типа в клубочках мышей приводит к быстрому возникновению протеинурии и что повышенные уровни экспрессии TRPC6 обнаруживаются в различных приобретенные гломерулярные заболевания человека [16].В то время как идея количества поступающего в подоциты кальция как фактора, определяющего время, безусловно, привлекательна, необходимо учитывать другие элементы, способствующие возникновению болезни TRPC6. Например, было также показано, что мутант P112Q TRPC6 более высоко экспрессируется на клеточной поверхности, и предполагалось, что измененный субклеточный трафик может объяснять повышенную активность каналов [9], [17].

Доказательства того, что TRPC6 играет существенную роль в сигнальных путях щелевой диафрагмы, со временем стали надежными.Было показано взаимодействие с подоцином и нефрином в щелевой диафрагме [10], а также сообщалось о связывании с -актинином-1, -актинином-4 и кальциневрином [10], [18]. Возможно, что TRPC6-опосредованный приток кальция регулирует актиновый цитоскелет посредством путей с участием кальциневрина. Недавно было показано, что путь кальциневрин-синаптоподин может быть потенциальным медиатором протеинурии. Поскольку кальциневрин является кальций-чувствительной серин-треониновой фосфатазой, TRPC6-опосредованные изменения кальция являются отличным кандидатом для прямого воздействия на целостность цитоскелета подоцитов и, таким образом, на функцию гломерулярного барьера [19].Повышенный приток кальция через мутировавший TRPC6 в клетки может нарушать ответ цитоскелета на физиологические изменения, вызывая протеинурию [20]. Другим патофизиологическим объяснением протеинурии у пациентов с мутациями TRPC6 может быть дисфункция механочувствительности в щелевой диафрагме. Сообщалось, что многочисленные члены семейства TRP-каналов участвуют в механочувствительности, а измененная функция TRPC6-канала может влиять на восприятие подоцитами потока, растяжения или давления, тем самым, в свою очередь, влияя на реорганизацию актинового цитоскелета подоцитов в ответ на физиологические изменения [20] [21].Недавнее открытие, что подоцин посредством рекрутирования холестерина обеспечивает механочувствительные свойства ионным каналам, таким как TRPC6, дополняет представление о том, что щелевидная диафрагма подоцитов связывает информацию с отростками подоцитов [10, 22, 23]. Нарушение реорганизации цитоскелета можно представить как результат дефектной механочувствительности (например, из-за гиперактивного TRPC6), что, в свою очередь, приводит к повреждению подоцитов, потере подоцитов и, в конечном итоге, к ФСГС. В случае мутации M132T этот процесс будет усилен.

Какими бы ни были точные возможности, которые приводят к увеличению количества компартментализованного кальция в отростках подоцитов, M132T, безусловно, является одним из них, который вместе с другими механизмами требует от нас рассмотрения большого увеличения токов каналов TRPC6 как причинных факторов для раннего начала FSGS. Поэтому рекомендуется проводить скрининг уже детей, у которых сегрегация FSGS происходит по аутосомно-доминантному типу, на наличие мутаций в TRPC6.

Материалы и методы Набор пациентов и данных

В мировой когорте из 550 семей с детским или взрослым началом ФСГС мы выбрали 21 семью с подтвержденным биопсией ФСГС у пораженных лиц, наследование которых соответствовало аутосомно-доминантному типу.У пораженных людей мы выполнили анализ мутаций путем прямого секвенирования экзонов для всех 13 экзонов TRPC6. Все пациенты также были обследованы на наличие мутаций в NPHS2 и экзонах 8 и 9 WT1 (опухоль Вильмса-1), поскольку они являются частой причиной ФСГС [24].

Исследование на людях было одобрено Институциональным наблюдательным советом Мичиганского университета и Комитетом по этике Фрайбургского университета, Германия. По крайней мере, у одного пострадавшего человека в семье был подтвержденный биопсией ФСГС и нефротический синдром, диагностированный нефрологами в специализированных центрах на основе опубликованных критериев [25].Мы получили информированное согласие, подробную клиническую и родословную информацию с помощью стандартной анкеты, заполненной на сайте www.renalgenes.org [26].

Анализ мутаций

Геномную ДНК выделяли из образцов крови с использованием набора для очистки ДНК Puregene® (Gentra, Minneapolis, MN) в соответствии с рекомендациями производителя. Анализ мутаций путем прямого секвенирования экзонов проводили с использованием праймеров, фланкирующих экзоны. Праймеры экзона TRPC6 перечислены в таблице S2. Праймеры экзонов для NPHS2 и WT1 были опубликованы ранее [26].Для анализа последовательности использовали программное обеспечение SEQUENCHER TM (Gene Codes, Ann Arbor, MI). Опубликованная эталонная последовательность человеческого TRPC6 (NM_004621) была использована в качестве соответствующей последовательности гена дикого типа. Секвенирование обеих цепей было выполнено для обнаруженной мутации. Для новых мутаций их отсутствие было продемонстрировано более чем у 140 здоровых людей соответствующего этнического происхождения путем переваривания рестрикционными ферментами.

Сайт-направленный мутагенез плазмид TRPC6

Мы ввели мутацию M132T в полноразмерный клон кДНК TRPC6 человека путем сайт-направленного мутагенеза с использованием набора QuikChange Lightning Site Directed Mutagenesis Kit ™ (Stratagene) в соответствии с инструкциями производителя.Мутагенные олигонуклеотидные праймеры, содержащие желаемые мутации, были сконструированы для амплификации матрицы кДНК TRPC6. кДНК, кодирующие немеченый TRPC6 дикого типа человека, TRPC6 человека дикого типа с меткой FLAG, TRPC6 человека с меткой FLAG, несущие мутацию N143S [10], и кДНК, кодирующую помеченный FLAG доминантно-отрицательный мутант поры TRPC6 человека, все субклонированные в вектор pcDNA3 (Invitrogen) служил матрицами для сайт-направленного мутагенеза [27]. Чтобы подтвердить идентичность сайтов N143 / N143S и M132 / M132T, как матрицу, так и плазмиды с мутацией M132T секвенировали в четырех повторностях.

Электрофизиологический анализ мутантного TRPC6 и TRPC6 дикого типа. Клетки

HM1 (клетки эмбриональной почки человека, стабильно трансфицированные мускариновым рецептором M1) временно трансфицировали TRPC6 дикого типа (WT) или его мутантами [28]. Электрофизиологические записи проводили через 36–48 ч после трансфекции. Все эксперименты с патч-зажимом проводились при комнатной температуре (20-25 ° C). Токи целых клеток регистрировали с помощью усилителя Axopatch 200B. Патч-электроды были вытянуты из боросиликатного стекла и отполированы огнем до сопротивления ~ 2 МОм при заполнении внутренними растворами пипеток.Последовательное сопротивление (R s ) было скомпенсировано до 90% для уменьшения ошибок последовательного сопротивления до <5 мВ. Клетки, в которых R s было> 10 МОм, отбрасывали [29]. Для регистрации токов всей клетки стимулы напряжения длительностью 250 мс подавали с интервалами от 1 до 5 с с линейными изменениями напряжения от -120 до +100 мВ. Удерживающий потенциал составлял 0 мВ. Для обмена внеклеточных растворов использовалась быстрая перфузионная система, при этом полная замена раствора достигалась за 1–3 с [30]. Раствор внутренней пипетки для регистрации тока всей клетки содержит (в мМ) 145 Cs-метансульфонат, 10 NaCl, 2 Mg-ATP, 0.2 Na-GTP, 1 EGTA, 0,38 CaCl 2 и 10 буфера HEPES (pH 7,2, установленный с помощью CsOH). Концентрация свободного кальция в растворе для пипетки составляла 100 нМ, как рассчитано MaxChelator. Стандартный внеклеточный раствор Тирода для регистрации тока всей клетки содержит (мМ): 145 NaCl, 5 KCl, 2 CaCl 2 , 1 MgCl 2 , 10 HEPES и 10 глюкозы; pH доводили до 7,4 с помощью NaOH, а осмолярность доводили до ~ 300 мОсм. Раствор N-метил-D-глюкамина (NMDG) готовили с использованием (мМ) 145 NMDG-Cl, 10 HEPES и 10 глюкозы (pH 7.4). Для некоторых экспериментов 10 мМ Ca 2+ готовили в растворе NMDG. Концентрация NMDG была соответственно снижена для сохранения идентичной осмолярности.

Статистический анализ

Объединенные данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего. Статистические сравнения проводились с использованием одностороннего анализа дисперсии (ANOVA) и двустороннего t-критерия с поправкой Бонферрони; Р <0,05 был выбран для статистической значимости.

Оценка конкурентоспособности винных дрожжей Saccharomyces cerevisiae в экологически значимых средах с помощью секвенирования штрих-кода | G3: Гены | Геномы

Создание репрезентативного набора винных дрожжей со штрих-кодом

Подавляющее большинство штаммов дрожжей S.cerevisiae , которые считаются подходящими для промышленного производства вина, представлены одной большой кладой в пределах более крупной филогении видов S. cerevisiae (Borneman et al. 2016). Чтобы обеспечить коллекцию штаммов со штрих-кодом, которые широко представляли бы эту винную кладу S. cerevisiae , из более крупного, предварительно секвенированного набора штаммов, таких как что даже незначительные генетические клады будут представлены по крайней мере одним членом.Эти штаммы перечислены в File_S1-T1 и выделены красным на рисунке 1B.

Затем уникальный двудольный молекулярный штрих-код был вставлен в открытую рамку считывания HO в каждом из 94 исследуемых штаммов, что позволило однозначно измерить численность отдельных штаммов в смешанной популяции штаммов (рис. 1A). Две половины каждого штрих-кода первоначально были разделены геном устойчивости к G418 ( KanMX ), который впоследствии был удален посредством Cre-опосредованного иссечения.Эта реакция генерировала последний геномный элемент длиной 150 п.н., содержащий два штрих-кода по 12 п.н. (разделенных шрамом LoxP длиной 92 п.н.), фланкированный сайтами прайминга, совместимыми с секвенированием Illumina. Путем включения прайминговых сайтов Illumina в геном стало возможным генерировать ампликоны штрих-кода из каждого штамма в коллекции с одной и той же последовательностью праймера и в одной реакции ПЦР, что позволяет использовать ограниченные циклы амплификации и минимизировать возможность смещения ПЦР . Кроме того, элемент штрих-кода достаточно компактен, чтобы можно было включать как индексы, так и адаптеры проточной кюветы в праймеры для амплификации, что приводит к созданию готовых для секвенирования ампликонов за один этап.

Условия экстракции влияют на скорость обнаружения особей в смешанной популяции

В отличие от других коллекций штаммов со штрих-кодом, которые рассматривают влияние конкретных мутаций в пределах определенного генетического фона, коллекция штрих-кодов винных дрожжей состоит из гетерогенной коллекции генетических фонов дикого типа. Эти разные генетические фоны могут иметь значительное влияние на рост, но также и на эффективность протоколов экстракции ДНК, что может повлиять на возможность точного изучения численности с помощью штрих-кодов ДНК.Для более поздней оценки был создан объединенный пул из 87 штаммов со штрих-кодом путем смешивания отдельных аликвот жидких культур стационарной фазы каждого штамма винных дрожжей со штрих-кодом. Затем ДНК экстрагировали из замороженных аликвот этого пула и подвергали экстракции ДНК, ПЦР со штрих-кодом и высокопроизводительному секвенированию. Из 87 штаммов в пуле 82 можно было выделить из данных последовательности. Широкое распределение количества штрих-кодов наблюдалось после секвенирования ампликонов, полученных из пула, более чем в 22 раза от 1202 ± 359 до 26615 ± 6694 (среднее ± стандартное отклонение) (рис. 2A).В то время как концентрации клеток, рассчитанные по измерениям оптической плотности, охватывали только 2-кратный диапазон (расчетная плотность клеток = от 9,3 × 10 7 до 2,35 × 10 8 КОЕ / мл) для всех 82 штаммов. Фактически, штаммы, которые имели одинаковую оптическую плотность до добавления в пул (абс 600 нм = 4,9 ± 0,3), различались по количеству штрих-кода почти в 10 раз (от 2700 до 26600). Общие значения абсорбции культур перед объединением и логарифмически преобразованные подсчеты штрих-кода были обратно коррелированы (pearson r = -0.396, P = 0,00025). Это демонстрирует несоответствие между абсолютной численностью штаммов в пуле и количеством штрих-кодов. Такое отключение ограничивает использование подсчета штрих-кода для сравнения численности между штаммами.

Рисунок 2

Вариабельность и воспроизводимость обнаружения деформации. (A) Штамм-специфический счет штрих-кода из экстрактов объединенных замороженных культур культур (ось y, среднее ± стандартное отклонение, n = 3) по сравнению с поглощением, зарегистрированным перед объединением культур (ось x). (B) Количество штрих-кодов на штамм (среднее ± стандартное отклонение, n = 24) после роста в определенной среде (DM).Экстракции и производство ампликонов выполняли независимо, секвенирование каждого штрих-кода выполнялось за один цикл секвенирования.

Несколько факторов могут объяснить высокую дисперсию количества штрих-кодов для штаммов с аналогичными значениями оптической плотности. Штаммы разного размера могут давать разные значения оптической плотности, когда присутствует одинаковое количество клеток, и это может варьироваться в зависимости от стадии роста (Stevenson et al. 2016). Могут ли различия в соотношении оптическая плотность / концентрация клеток между штаммами объяснить разницу в количестве штрих-кода, было проверено путем оценки взаимосвязи для подмножества штаммов со средней оптической плотностью (абс. 600 нм = 4.9) в момент изготовления пула. Эти штаммы выращивали в течение ночи в YPD, измеряли их оптическую плотность и определяли концентрацию клеток с помощью гемоцитометрического подсчета (File_S2, рисунок S12). В диапазоне значений оптической плотности от 3,8 до 4,7 концентрация клеток изменялась в 1,6 раза (от 8,5 × 10 7 до 1,4 × 10 8 ). Следовательно, специфические для штаммов различия во взаимосвязи между поглощением и концентрацией клеток не могут объяснить 10-кратную дисперсию количества штрих-кодов, наблюдаемую для этой подгруппы штаммов.

С другой стороны, было показано, что связанная с полимеразой амплификация влияет как на длину, так и на содержание GC в библиотеках секвенирования (Dabney and Meyer 2012). ПЦР-амплификация из пула WYBC начинается с оснований самих штрих-кодов, однако мы не наблюдали обогащения штрих-кодов для содержания GC или конкретных терминальных оснований в ампликонах с большим или низким количеством. За исключением 2х12 оснований самих штрих-кодов, структура ампликона одинакова для каждого штамма дрожжей.Поэтому мы считаем это маловероятным источником вариации количества штрих-кодов. Наконец, отдельные штаммы могут в большей или меньшей степени поддаваться экстракции ДНК, на которую также может влиять стадия роста. Если штаммы различаются по эффективности экстракции ДНК, то вероятным источником описанной выше вариации является генетическая гетерогенность пула.

Несмотря на различия в количестве штрих-кодов для эквивалентно представленных штаммов, оценки специфических для штаммов ответов на стимулы окружающей среды возможны, если штамм-специфическая экстракция воспроизводима.Воспроизводимость обнаружения специфичного для штамма штрих-кода оценивалась путем анализа эксперимента, в котором 24 колбы со средой определенного состава, по составу репрезентативной для виноградного сока, были засеяны одинаковым объемом объединенного инокулята. Образцы были взяты через три дня роста, и проиндексированные ампликоны были секвенированы на одной проточной кювете. Нормализованное количество штрих-кода, специфичного для штамма, показано на рисунке 2В. Несмотря на различия в глубине последовательности между штаммами, подсчет штрих-кода, специфичного для штамма, был хорошо воспроизводимым в 24 независимых экстракциях с коэффициентом вариации log 2 -преобразованных штрих-кодов в диапазоне от 1.От 3 до 4,9%, показывая, что для всех штаммов техническая дисперсия составляет небольшую долю от среднего.

Широкое распределение количества сырых штрих-кодов и низкое абсолютное количество штрих-кодов значительного количества штаммов нежелательно, поскольку приводит к неэффективному использованию возможностей секвенирования; удвоение числа считываний в основном служит для увеличения глубины подсчета для штаммов с наибольшим числом отсчетов, в то время как динамический диапазон определений приспособленности к конкретному штамму сокращается для штаммов с наименьшим количеством отсчетов.Кроме того, если разница в количестве штрих-кодов является результатом различий в экстрагируемости ДНК, связанных со стадией роста или генетической гетерогенностью, то эти различия можно преодолеть путем пересмотра метода экстракции.

Модификации протокола экстракции ДНК были оценены в попытке облегчить распределение количества штрих-кодов, специфичных для больших штаммов. В этой работе был использован метод экстракции без колонки, использующий метод лизиса на основе ферментов. Было оценено влияние 2 концентраций фермента (в 3 и 6 раз превышающих рекомендованную концентрацию), влияние продолжительности инкубации фермента или концентрации фермента и продолжительности инкубации на распределение исходных подсчетов (рис. 3).Было показано, что представление штаммов в наборе данных зависит от метода выделения ДНК, использованного перед приготовлением ампликона. Однако затронуты были не только штаммы в нижнем процентиле распределения подсчетов, но и для некоторых штаммов с плохой репрезентативностью количество связанных с ними подсчетов либо не изменилось, либо ухудшилось из-за увеличения концентрации литиказы, используемой во время Извлечение ДНК. Эти результаты показывают, что, хотя изменения в методе выделения ДНК могут изменить количество штрих-кодов для определенных штрих-кодов в пуле, они систематически не смягчают широкое распределение количества штрих-кодов, специфичных для штаммов, наблюдаемое во всей коллекции штаммов со штрих-кодами.

Рисунок 3

Влияние условий экстракции ДНК на обнаружение штаммов. Оценивали три условия экстракции: A) 12 мкл фермента + 40 мин инкубации, B) 6 мкл фермента + 80 мин инкубации, C) 12 мкл фермента + 80 мин инкубации относительно стандартных условий экстракции (6 мкл фермента + 40 мин инкубации) и определено влияние на обнаружение деформации в последующем BarSeq. Пятна красного и зеленого цвета показывают штаммы, которые значительно отличаются от контрольных условий. D) Пригодность штаммов, выращенных в определенной среде, относительно штаммов, выращенных YPD, оценивали с использованием либо контрольной экстракции (6 мкл фермента + 40 мин инкубации), либо условий экстракции, используемых в C (12 мкл фермента + 80 мин инкубации).Все данные показывают среднее изменение в 2 раз из 3 независимых повторов (n = 3).

Хотя влияние метода экстракции на количество штрих-кодов, специфичных для штамма, в одной смешанной популяции было зависимым от штамма, было неясно, влияют ли эти различия на оценки пригодности штаммов, которые основаны на относительных пропорциях количества штрих-кодов в двух образцы. Поэтому различия в оценках приспособленности, зависящие от экстракции, оценивались путем сравнения роста смешанной популяции в определенной среде с ростом YPD при использовании двух разных режимов экстракции (рис. 3D).Эквивалентные оценки пригодности для конкретных штаммов были получены независимо от используемого метода экстракции, что позволяет предположить, что, хотя абсолютные систематические ошибки экстракции не могут быть преодолены, значения пригодности демонстрируют аналитическую надежность по сравнению с методом экстракции ДНК.

Пригодность штамма винных дрожжей в условиях, релевантных для вина

После того, как была установлена ​​надежность методологии профилирования пригодности, были инициированы серийные соревновательные эксперименты по пригодности в ряде энологически значимых условий (рис. 4).Влияние 38 уникальных композиционных условий на конкурентоспособность штаммов было изучено с использованием стратегии последовательного посева (рис. 1С). Представленные здесь попарные сравнения охватывают 2 серийных прививки (приблизительно 16 поколений, File_S2, рисунок S9). Оценка конкурентоспособной пригодности в стандартных условиях была достигнута путем сравнения количества штаммов после двух серийных посевов (рис. 1C, T3) с количеством штаммов после начального роста в эталонной среде (T1).

Рисунок 4

Пригодность к деформации (логарифм 2 кратных изменений), сгруппированные в соответствии с деформацией в условиях обработки (ось Y) и обработкой в ​​соответствии с характеристиками деформации (ось X).Значения пригодности к лечению показывают изменения во времени по сравнению с изменениями, наблюдаемыми в исходном состоянии. Конкретные лечебные факторы указаны на баллонной диаграмме под тепловой картой. Размер и заливка пятна соотносятся с разницей между обработкой и эталоном для любого данного композиционного фактора. Справа от графика указан проверенный диапазон факторов. Диапазон контраста SO 2 дан как рассчитанный молекулярный SO 2 . Подробные описания лечения представлены в File_S1-T5.Номера штаммов относятся к исходным штаммам, использованным для сбора штрих-кода. Идентификатор коллекции культур, идентификатор штамма со штрих-кодом и общее название указаны в File_S1-T1. Штаммы, отмеченные звездочкой, обозначают те, которые оценивались в экспериментах с одним инокулятом (рис. 5).

Попарное сравнение профилей пригодности в эталонных средах, представляющих 7 различных экспериментальных серий, показало высокую корреляцию между эталонными условиями (r> 0,7), за исключением L4 против L7 (r = 0,609) (File_S2, рисунок S10) .Стандартные условия были выбраны для моделирования белого сока с умеренной концентрацией сахара (200 г / л), достаточным количеством ассимилируемого дрожжами азота для поддержания устойчивого брожения (400 мгN / л), низкой концентрацией микроэлементов по сравнению с обычным соком Шардоне, без SO 2 и умеренный pH (3,5). В одном эксперименте (L7) сок Шардоне использовался в качестве контрольного состояния. Значительные различия в приспособленности между штаммами наблюдались во всех стандартных условиях для многих штаммов в этом исследовании (File_S2, рисунок S10).Четыре штамма показали особенно плохие результаты (AWRI1427, 1482 и 2913), показав значительно сниженную численность после двух циклов размножения не только в определенной среде, но и в соке Шардоне. Два из этих штаммов являются историческими изолятами винодельни, а два - коммерчески доступными винными дрожжами, рекомендованными для производства белого вина.

Пригодность штамма дрожжей оценивалась при различных условиях обработки. Путем сравнения изменений численности штаммов при обработке (рис. 1C, T3 и T1) относительно эталонных условий с течением времени можно было оценить профили реакции штаммов на вариации в составе среды.Различные контрасты и соответствующие оценки приспособленности к изменению кратности показаны в виде тепловой карты на рисунке 4. Полный анализ, на основе которого строится тепловая карта, представлен в File_S1-T7. Приведенные здесь данные охватывают 7 независимых экспериментов (серий) с контрастами, сделанными для контрольных условий в каждой партии.

Вариации параметров состава среды или сока были выбраны на основе ранее определенных диапазонов этих переменных в соке Chardonnay (Hagen et al. 2008; Schmidt et al. 2011) или условий, которым могут подвергаться винные дрожжи во время производства. Различия в способности ассимиляции азота были связаны с приспособленностью дрожжей (Ibstedt et al. 2015) и приспособляемостью к различным винным условиям (Brice et al. 2018), SO 2 - известный антимикробный препарат, в том числе против дрожжей (Divol ). et al. 2012), толерантность к меди широко варьируется в зависимости от винодельческих сортов (Brandolini et al. 2002; Cavazza et al. 2013), а ограничения тиамина в результате неконтролируемого роста организмов, отличных от S. cerevisiae , были связаны с плохими результатами ферментации (Bataillon et al. 1996). Нашей целью было понять реакцию широкого выбора винных дрожжей на эти различные условия, а также понять, взаимодействуют ли различные переменные состава, чтобы еще больше ограничить потенциал производительности отдельных штаммов винных дрожжей.Полный обзор различных экспериментальных переменных, контрастов и составов среды / сока, исследованных в этой работе, представлен в File_S1-T6.

Медь и сульфит:

Два условия, 10 мг / л меди и 15 мг / л свободного SO 2 (0,5 мг / л молекулярный), оказали сильное, но уникальное влияние на приспособленность штамма и сгруппировались независимо друг от друга и другие тестовые переменные. Эти два условия также были доминирующими при тестировании в сочетании с другими условиями.Толерантность к меди и сульфиту в некоторой степени исключают друг друга. Из 24 штаммов со значительно улучшенной пригодностью в концентрации 10 мг / л меди, 16 были значительно хуже в концентрации 15 мг / л свободной SO 2 (66%), а из 23 штаммов со значительно улучшенной пригодностью в концентрации 15 мг / л свободной SO 2 , 12 были значительно меньше подходят для высокого содержания меди (52%). Было обнаружено, что только 2 штамма значительно улучшили приспособленность как к 10 мг / л меди, так и к 15 мг / л свободного SO 2 .

Толерантность и чувствительность к меди оценивалась в трех независимых экспериментах, и хотя все обработки, содержащие повышенные концентрации меди, сгруппированы вместе, эффекты партии очевидны через формирование двух субкластеров в более крупном кластере обработки «с высоким содержанием меди». Все члены второго подкластера получены из экспериментов L1 и L2. Низкие показатели пригодности подмножества штаммов, по-видимому, определяют кластерное поведение этих обработок. Например, кластер штаммов, содержащий AWRI1729, AWRI1781, AWRI2874, AWRI1491 и AWRI1918, все имеют уменьшенное представление в HCu_L1 и HCu_L2, но не в HCu_L6.Базовая среда в экспериментах L1 и L2 имеет низкую концентрацию калия, но профиль характеристик деформации не изменяется добавлением калия (HCu.HK_L2). Однако более низкий pH в LpH.HCu_L2 привел к профилю, который сгруппировался с HCu_L6, облегчая пониженную представленность штаммов, упомянутых выше. В общем, эти эффекты партии не могут быть объяснены экспериментально определенными вариациями в составе среды, и источник наблюдаемых здесь эффектов партии еще предстоит решить.

Штаммы дрожжей были признаны чувствительными к меди или толерантными, если они показали значительное отклонение от эталонных условий по крайней мере в двух из трех контрастов «только медь». Было обнаружено, что двадцать четыре процента штаммов, оцениваемых в этом исследовании, чувствительны к меди (значительно сниженная средняя пригодность для контрастов, содержащих только медь). Такая высокая распространенность чувствительности к меди у коммерческих винных дрожжей была отмечена ранее (Cavazza et al. 2013), и из штаммов, демонстрирующих самую низкую пригодность к высокому содержанию меди, AWRI1537, как ранее было продемонстрировано, ингибируется энологически значимыми концентрациями меди (Ferreira et al. 2006). Было показано, что устойчивость дрожжей к меди опосредуется преимущественно металлотионеином Cup1 (Fogel and Welch 1982), причем увеличение числа копий объясняет 44,5% фенотипических вариаций толерантности к меди (Peter et al. 2018). Среди винных дрожжей существует значительное разнообразие числа копий в диапазоне от 0 до 14 копий на штамм (Steenwyk and Rokas, 2017), хотя было показано, что более высокое число копий возможно без значительных затрат на приспособленность, но также без большего повышения толерантности к меди (Thierry et al. 2016).

SO 2 чувствительность также была очевидна в аналогичной пропорции набора штаммов, при этом 32% штаммов показали снижение численности в среде, содержащей 15 мг / л свободного SO 2 (значительно сниженная средняя пригодность в SO 2 - только контрасты). В виноградном соке и вине SO 2 существует в нескольких формах, причем наиболее биологически ингибирующей является нейтральная летучая форма, известная как молекулярная SO 2 . Преобладание этой формы в виноградном соке зависит от pH, и его распространенность колеблется в 6 раз между pH 3.0 и pH 3,5 (Waterhouse et al. 2016). Условия, в которых рассчитанный молекулярный SO 2 является наивысшим, а не концентрации свободного или общего SO 2 , группируются вместе (рис. .HYAN_L7). Из шести штаммов, наиболее чувствительных к SO 2 , три были изолятами винодельни (AWRI228: Log 2 FC -8,3, AWRI1001: Log 2 FC = -4,9, AWRI735: Log 2 FC = -4.8), один был некоммерческим межвидовым гибридом (AWRI1504: Log 2 FC = -8,1) и два были коммерческими штаммами (AWRI2863: Log 2 FC -5,7, AWRI2078: Log 2 FC = -4,7) .

Из двух чувствительных к сульфиту коммерческих штаммов AWRI2078 ранее был связан с чувствительностью к SO 2 (Aranda et al. 2006), и ни один из них, как известно, не содержит локуса SSU1-R . Наиболее чувствительный штамм SO 2 в работе Aranda et al. (2006) не входил в группу, чувствительную к SO 2 в этом исследовании (AWRI1493). Толерантность к SO 2 у S. cerevisiae опосредована оттоком насосом Ssu1 (Park and Bakalinsky 2000), но в отличие от механизма, который вызывает толерантность к меди, толерантность к SO 2 у винных штаммов S. cerevisiae варьируется. является преимущественно результатом реципрокных хромосомных транслокаций между хромосомами VIII и XVI (Goto-Yamamoto et al. 1998; Pérez-Ortín et al. 2002), хотя недавно была идентифицирована другая транслокация (García-Ríos et al. 2019). Эти транслокации в целом приводят к тому, что кодирующие области SSU1 теперь управляются более высоко экспрессируемым промотором гена ECM34 , хотя существует значительная гетерогенность в точной структуре перемещенного промотора и, следовательно, в общей экспрессии SSU1 и последующая толерантность к SO 2 (Yuasa et al. 2004; 2005).Однако AWRI1493 (71B) не имеет этой транслокации, и вместо этого было показано, что SO 2 является индуктором SSU1 в 71B (Nardi et al. 2010), тогда как SSU1 , по-видимому, экспрессируется конститутивно. в штаммах, несущих транслокацию (Nardi et al. 2010). Таким образом, индукция SSU1 в ходе серийных прививок, вероятно, объясняет нейтральную оценку пригодности 71B (AWRI1493) в этой работе.

Азот:

При ферментации виноградного сока азот может быть основным ограничивающим питательным веществом, в диапазоне концентраций от менее 100 мг / л ассимилируемого дрожжами азота (YAN) до более 500 мг / л (Schmidt et al. 2011). Его концентрация в виноградном соке определяется как условиями виноградника, так и вмешательством винодела, и концентрация 150 мг / л считается минимальной, необходимой для успешного завершения ферментации (Bell and Henschke 2005). Относительный баланс аммиака и аминокислот, а также их абсолютные концентрации влияют на транскрипционную активность дрожжей (Godard et al. 2007) и рост (Gutiérrez et al. 2013), обеспечивая строительные блоки биомассы, которая является ключом к устойчивой ферментации. кинетика (Варела и др. 2004). Специфические для штаммов различия в потребности в азоте (Julien et al. 2000) и способности использования аминокислот (Gutiérrez et al. 2013) наблюдались ранее. Штаммы с более высокой потребностью в азоте способны поддерживать более высокие темпы роста (Gutiérrez et al. 2012). Gutiérrez et al. (2012) подсчитал, что штамм с самой высокой потребностью в азоте из четырех исследованных будет иметь наибольшее преимущество в пригодности при всех концентрациях азота выше 40 мгН / л, что позволяет предположить, что специфическая потребность штамма в азоте является движущей силой приспособленности.

Влияние азота на соревновательную физическую форму оценивалось двумя способами: либо путем сравнения численности штаммов в соке с добавлением азота (YAN 345) с соком без добавок (YAN 200, эталонные условия), либо путем сравнения численности штаммов в среде с низким содержанием азота. (YAN 150) до среды с высоким содержанием азота (YAN 400, стандартные условия). Незначительные изменения в физической форме наблюдались при оценке эффекта добавок сока с низким содержанием азота. Штаммы AWRI1082 (log 2 FC = 2.0), AWRI1910 (log 2 FC = 1,5) и AWRI1502 (log 2 FC = 1,2) показали более высокую пригодность при добавлении азота, увеличивая их представленность в условиях более высокого азота.

Более заметные различия в приспособленности наблюдались при переносе штаммов из условий с достаточным количеством азота в условия с дефицитом азота со штаммами AWRI1537 (log 2 FC = -5,5), AWRI2863 (log 2 FC = -4,5), AWRI2861 (log 2). FC = -4,3), AWRI1756 (лог 2 FC = -3.5), AWRI1781 (log 2 FC = -3,4), AWRI1483 (log 2 FC = -3,1) и AWRI2881 (log 2 FC = -3,0) - все они демонстрируют снижение пригодности в среде с низким содержанием азота. Сообщается, что два из самых низкоэффективных штаммов, AWRI1537 и AWRI2861, имеют низкую и высокую потребность в азоте соответственно (технический паспорт поставщика). Из лучших исполнителей с низким содержанием азота определены средние AWRI2260 (log 2 FC = 1,2), AWRI2880 (log 2 FC = 0,9) и AWRI1429 (log 2 FC = 0.9) имеют низкие или средние потребности в азоте. AWRI1537 незначительно улучшил свое представление в соке с добавлением азота, хотя исходный азотный статус сока (YAN = 200 мгN / л), хотя и не идеален, можно считать достаточным. Таким образом, в этом наборе данных мы находим мало поддержки идеи о том, что специфическая потребность штамма в азоте способствует повышению приспособляемости штаммов винных дрожжей S. cerevisiae .

Витамины:

Определенная среда, используемая в этой работе, содержит 9 витаминов (тиамин, рибофлавин, пироксидин, пантотенат, никотиновая кислота, мио-инозитол, биотин, фолат и 4-аминобензойная кислота).В отсутствие каких-либо витаминов (кроме мио-инозита) единственный штамм, AWRI1505, был способен существенно увеличить свое представительство в смешанной популяции (log 2 -кратное изменение = 7,3, File_S1-T7) по сравнению с контрольными условиями. AWRI1505 представляет собой межвидовой гибрид S. cerevisiae и S. uvarum (Borneman et al. 2016). S. uvarum исторически связан с владением биотином (Oura and Suomalainen, 1982), а AWRI1505 демонстрирует умеренное преимущество в пригодности в отсутствие только биотина (log 2 -кратное изменение = 2.9). Хотя в предыдущей работе было высказано предположение, что концентрация биотина менее 1 мкг / л может быть ограничивающей, особенно в условиях достаточного количества азота (Bohlscheid et al. 2007), в работе, представленной здесь, добавление 0,1 мкг / л биотина было достаточным для возврата дифференциальная приспособленность штамма (File_S1-T7), но не образование биомассы (File_S2, рисунок S4E), к эталонным условиям. Вместе эти данные показывают, что прототрофия биотина является лишь частичной движущей силой улучшения физической формы AWRI1505 в отсутствие витаминов.Неожиданно добавление только биотина в дозе 5 мкг / л к безвитаминному состоянию привело к дифференцированному профилю приспособленности штаммов, который сгруппировался с обработками медью 10 мг / л (рис. 4, L5_noPanto.noThia). Ранее было показано, что тиамин играет вспомогательную роль в поддержании внутриклеточного окислительно-восстановительного состояния (Wolak et al. 2014), а окисление фактора транскрипции Mac1 одновременно реагирует на внутриклеточные окислительно-восстановительные изменения и играет роль в восстановлении меди. зондирование (Dong et al. 2013). Кроме того, комплексы железо / сера, которые являются ключевыми внутриклеточными мишенями для меди, также чувствительны к реактивным формам кислорода (Vallières et al. 2017). Следовательно, отсутствие определенных витаминов может имитировать высокий профиль пригодности меди за счет окислительных явлений. Однако отсутствие тиамина или пантотената по отдельности не имитировало профиль пригодности с высокой концентрацией меди, предполагающий, что другие витамины или их комбинации приводят к профилю пригодности «с высоким содержанием меди».

В отличие от умеренного преимущества в фитнесе в отсутствие биотина, AWRI1505 показал большое преимущество в фитнесе в отсутствие пантотената (log 2 -кратное изменение = 7,6), что аналогично его преимуществу в условиях без витаминов. Только один другой штамм, AWRI228, показал такое большое преимущество в пригодности в отсутствие пантотената (log 2 -кратное изменение = 10,8), но этот штамм имел нейтральный профиль приспособленности в условиях без витаминов. В отличие от AWRI1505, AWRI228 не является межвидовым гибридом, а представляет собой исторический изолят S.cerevisiae , депонированный в коллекции культур AWRI в 1949 году. Было показано, что S. cerevisiae способен продуцировать пантотенат, опосредованный аминоксидазой Fms1 (White et al. 2001) и альдегиддегидрогеназами Ald2 и Ald3 (White ). et al. 2003), и были продемонстрированы штамм-зависимые различия в потребностях в пантотенате (Wang et al. 2003). Однако, несмотря на существование вариации последовательности в FMS1 , никакой связи между этими вариациями и приспособленностью к штамму в отсутствие пантотената выявлено не было.

В этой работе мы показываем, что требования к пантотенату различаются для широкого диапазона штаммов винных дрожжей. Энологически пантотенат взаимодействует с доступностью азота для стимулирования производства ароматических соединений в винных дрожжах (Bohlscheid et al. 2011), хотя и в концентрациях ниже, чем те, которые обычно содержатся в виноградном сусле (Hall et al. 1956; Hagen ). и др., , 2008 г.). Это говорит о том, что вариации штамма дрожжей в способности продуцировать пантотенат могут повлиять на результаты ферментации, помимо производительности.

Влияние других условий, таких как температура (12 °, 17 ° и 28 °), высокая концентрация сахара (280 г / л), низкий pH (pH 3,0) и доступность азота, были менее выражены, чем высокое содержание меди или SO. 2 концентраций.

Было показано, что осмотический стресс, связанный с высокой концентрацией сахара, вызывает зависящие от штамма изменения в лаг-фазе до 4 часов при 28 ° и до 15 часов при 16 ° (Ferreira et al. 2017). Такие штамм-специфические эффекты не были очевидны при определенных контрастах сред при концентрациях сахара 200 г / л и 280 г / л.Контрасты, проведенные для сока Шардоне и Пино Гри (200 г / л против , 280 г / л и 343 г / л соответственно), выявили два штамма, AWRI935 и 1427, которые, как наблюдалось, увеличивали свое количество в условиях высокого содержания сахара (log ). 2 -кратное изменение = 4,0 и 4,1). Эти штаммы были двумя из самых бедных в эталонных условиях (File_S2, рисунок S10), что снизило их представленность в смешанной популяции до 30 раз.

Аналогичным образом наблюдаются различия между ростом штаммов при pH 3.0 с pH 3,5, не выявили значительных специфических эффектов штамма ни в определенной среде, ни в виноградном соке, с добавлением калия или без него. Связанные с pH, специфичные для штамма препятствия как для скорости роста, так и для образования биомассы ранее наблюдались как в определенной среде, так и в виноградном соке (Kudo et al. 1998; Schmidt et al. 2011). Поэтому было удивительно, что не удалось увидеть большее изменение приспособленности, связанное с pH, в контексте конкурентного экспериментального формата.

Было интересно изучить, могут ли различные элементы композиции взаимодействовать, чтобы усилить или ослабить специфические для штаммов реакции, однако никаких взаимодействий обнаружено не было. Для комбинаций, содержащих медь, или SO 2 , профиль пригодности комбинированных обработок сгруппирован только с высоким содержанием меди или высоким содержанием SO 2 . Некоторые комбинации условий были чрезмерно суровыми, что приводило к существенному подавлению образования биомассы. Наиболее заметными из этих условий были отсутствие витаминов, pH 3.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *