Лада гранта характеристики: Технические характеристики новой Лада Гранта (Lada Granta) лифтбек 2020-2021 года

Содержание

Лада Гранта Кросс технические характеристики 2020-2021 г на Lada Granta Cross, официальный дилер, Москва

1.6 / 106 л.c.
5AMT / FWD

1.6 / 106 л.c.
5MT / FWD

1.6 / 90 л.c.
5MT / FWD

Двигатель

Код двигателя

Тип двигателя

Бензиновый

Бензиновый

Бензиновый

Система питания

Впрыск топлива с электронным управлением

Впрыск топлива с электронным управлением

Впрыск топлива с электронным управлением

Количество, расположение цилиндров

4, рядное

4, рядное

4, рядное

Рабочий объем

1596 см3

1596 см3

1596 см3

Максимальная мощность

90 л. с. (66 кВт) при 5000 об/мин

106 л.с. (78 кВт) при 5800 об/мин

106 л.с. (78 кВт) при 5800 об/мин

Максимальный крутящий момент

143 Н•м при 3800 об/мин

148 Н•м при 4200 об/мин

148 Н•м при 4200 об/мин

Рекомендуемое топливо

Бензин 95

Бензин 95

Бензин 95

Объем топливного бака

Динамические характеристики

Максимальная скорость

172 км/ч

178 км/ч

178 км/ч

Время разгона с 0-100 км/ч

Расход топлива на 100 км

Городской цикл

Загородный цикл

Смешанный цикл

Масса

Снаряженная масса

1125. ..1160 кг

1125...1160 кг

1125...1160 кг

Технически допустимая максимальная масса

1560 кг

1560 кг

1560 кг

Максимальная масса прицепа без тормозной системы

450 кг

450 кг

450 кг

Максимальная масса прицепа с тормозной системой

900 кг

900 кг

900 кг

Трансмиссия

Тип трансмиссии

Передаточное число главной передачи

Подвеска

Передняя подвеска

Независимая, типа Макферсон, пружинная, с газонаполненными телескопическими амортизаторами, со стабилизатором поперечной устойчивости

Независимая, типа Макферсон, пружинная, с газонаполненными телескопическими амортизаторами, со стабилизатором поперечной устойчивости

Независимая, типа Макферсон, пружинная, с газонаполненными телескопическими амортизаторами, со стабилизатором поперечной устойчивости

Задняя подвеска

Полузависимая, рычажная, пружинная, с газонаполненными телескопическими амортизаторами

Полузависимая, рычажная, пружинная, с газонаполненными телескопическими амортизаторами

Полузависимая, рычажная, пружинная, с газонаполненными телескопическими амортизаторами

Рулевое управление

Рулевой механизм

Шестерня-рейка

Шестерня-рейка

Шестерня-рейка

Кузов

Колесная формула

Ведущие колеса

Передние

Передние

Передние

Расположение двигателя

Переднее поперечное

Переднее поперечное

Переднее поперечное

Тип кузова

Универсал

Универсал

Универсал

Количество дверей

Количество мест

Длина

4148 мм

4148 мм

4148 мм

Ширина

1700 мм

1700 мм

1700 мм

Высота по рейлингам

1560 мм

1560 мм

1560 мм

Колесная база

2476 мм

2476 мм

2476 мм

Колея передних колес

1430 мм

1430 мм

1430 мм

Колея задних колес

1418 мм

1418 мм

1418 мм

Дорожный просвет при снаряженной массе

198 мм

198 мм

198 мм

Передний свес

824 мм

824 мм

824 мм

Задний свес

848 мм

848 мм

848 мм

Угол въезда

Угол съезда

Объем багажного отделения в пассажирском варианте

Объем багажного отделения в грузовом варианте

Шины

Размерность

195/55 R15 (85, H/V)

195/55 R15 (85, H/V)

195/55 R15 (85, H/V)

Технические характеристики Lada Granta Седан 2019 в старом кузове

Общая информация

Класс автомобиля

Количество дверей

Количество мест

Тип двигателя

Колёсная база

Ширина задней колеи

Ширина передней колеи

Объем багажника мин/макс, л

Объём топливного бака, л

Полная масса, кг

Снаряженная масса, кг

Количество передач

Коробка передач

Подвеска и тормоза

Задние тормоза

Передние тормоза

Тип задней подвески

Тип передней подвески

Эксплуатационные показатели

Максимальная скорость, км/ч

Марка топлива

Разгон до 100 км/ч, с

Расход топлива, л город

Расход топлива, л город/смешанный

Расход топлива, л город/трасса/смешанный

Расход топлива, л смешанный

Диаметр цилиндра и ход поршня, мм

Количество цилиндров

Максимальная мощность, л. с./кВт при об/мин

Максимальный крутящий момент, Н*м при об/мин

Объем двигателя, см³

Расположение двигателя

Расположение цилиндров

Степень сжатия

Тип двигателя

Название рейтинга

Оценка безопасности

Аккумуляторная батарея

Запас хода на электричестве, км

Лада Гранта характеристики — Lada Granta технические характеристики

Характеристики Лада Гранта весьма схожи с характеристиками Лады Калины. Это и не мудрено Lada Granta создавалась на основе Калины. Несмотря на то, что характеристики габаритов этих автомобилей разные, но расстояние от передних до задних колес совершенно одинаковое и составляет 2476. То есть салон Гранты такой же по размеру, как и у Калины. Хотя отделка самого салона Калины и Гранты различна. Кстати, характеристики Лада Гранта в кузове хетчбек уже известны. Напомним, эта версия отечественного автомобиля появится в продаже ближе к лету 2014 года.

Увеличение размеров Granta произошло за счет увеличенного размера багажника, кроме того конструкторы увеличили переднюю часть. В результате получился довольно тесный автомобиль, но с довольно большим багажником, большего от 4-ёх дверного бюджетного седана ждать не стоит. Общая длина Lada Granta составляет 4260 миллиметров.

Габариты, размеры и объемы Лада Гранта

  • Длина — 4 260 мм
  • Ширина — 1 700 мм
  • Высота — 1 500 мм
  • База, расстояние между передней и задней осью — 2 476 мм
  • Колея передних и задних колес — 1430 и 1414 мм соответственно
  • Объем багажника — 520 литров
  • Размер топливного бака — 50 литров

Дорожный просвет Lada Granta с механической коробкой составляет 16 сантиметров (160 мм), клиренс Лада Гранта с коробкой автомат меньше на 2 сантиметра и составляет 14 см (140 миллиметров). Сам производитель объясняет меньший дорожный просвет бюджетного седана с автоматом тем фактом, что масса двигателя в сочетании с АКПП больше.

Масса Лада Гранта составляет 1 160 килограмм, с полной загрузкой 1 560 кг. Производитель указывает, что автомобиль способен буксировать прицеп массой 450 килограмм без собственной системы торможения и 900 кг с тормозным механизмом.

Характеристики трансмиссии Lada Granta следующие. Автомобиль имеет только передний привод и два типа коробок передач, это механическая 5-ступенчатая коробка передач с передаточным числом главной пары 3,7. И автоматическая трансмиссия японского производителя Jatco с передаточным числом 4,1. 4-диапазонный автомат Лада Гранта делает автомобиль намного комфортнее, но за все надо платить, поэтому расход топлива с АКПП больше, а разгон до первой сотни дольше.

Характеристики двигателя Лада Гранта весьма интересная тема для разговора. Сразу скажем у Granta бензиновый мотор работающий на 95-ом бензине имеющий один объем 1,6 литра, точнее 1596 кубических сантиметров. Однако из-за того, что конструкция по сути этого одного двигателя различна, то и показатели расхода, разгона, мощности совершенно различны. Сегодня для Гранты предлагают 4 версии двигателя мощностью 82, 87, 98 и 106 лошадиных сил. Два мотора имеют 8 клапанов, еще два имеют 16-клапанный механизм. Четырехтактный, бензиновый силовой агрегат имеет распределенный впрыск с электронным управлением имеющий различные настройки. В общем двигатель для Гранты инжекторного типа. Современный инжектор, как на большинстве иномарок.

Самый слабый мотор ВАЗ 1,6 с 8 клапанами мощностью 82 лошади устанавливается на Ладу Гранту в минимальной комплектации «стандарт» характеристики этого двигателя следующие —

  • Мощность л.с/кВт — 82/60 при 5100 оборотах в минуту
  • Крутящий момент — 132 Нм при 3800 оборотах в минуту
  • Максимальная скорость — 165 километров в час
  • Разгон до первой сотни — 12,6 секунд
  • Расход топлива в смешанном цикле — 7,4 литра

Более мощный 8-клаппаник Granta объемом 1,6 литра выдает уже 87 лошадиных сил и устанавливается в комплектации «норма».

  • Мощность л.с/кВт — 87/64 при 5100 оборотах в минуту
  • Крутящий момент — 140 Нм при 3800 оборотах в минуту
  • Максимальная скорость — 167 километров в час
  • Разгон до первой сотни — 12,4 секунд
  • Расход топлива в смешанном цикле — 7,0 литра

Следующий 16-клапанный двигатель мощностью 98 лошадиных сил устанавливают в версиях «норма» и «люкс». Именно этот мотор сочетается с автоматической трансмиссией Гранты. С механической 5-ступенчатой КПП его тоже устанавливают.

  • Мощность л.с/кВт — 98/72 при 5600 оборотах в минуту
  • Крутящий момент — 145 Нм при 4000 оборотах в минуту
  • Максимальная скорость — 172 километров в час
  • Разгон до первой сотни — 11,4 секунд
  • Расход топлива в смешанном цикле — 6,8 литра

С коробкой автомат характеристики следующие

  • Мощность л.с/кВт — 98/72 при 5600 оборотах в минуту
  • Крутящий момент — 145 Нм при 4000 оборотах в минуту
  • Максимальная скорость — 168 километров в час
  • Разгон до первой сотни — 13,7 секунд
  • Расход топлива в смешанном цикле — 7,6 литра

И самый мощный двигатель Lada Granta имеющий так же 16 клапанов, но выдающий уже 106 лошадиных сил появился недавно и предлагается только в комплектации «люкс» и только с механической коробкой.

  • Мощность л.с/кВт — 106/78 при 5600 оборотах в минуту
  • Крутящий момент — 145 Нм при 4000 оборотах в минуту
  • Максимальная скорость — 177 километров в час
  • Разгон до первой сотни — 11,0 секунд
  • Расход топлива в смешанном цикле — 6,7 литра

Особо хотелось бы отметить показатель расхода топлива Лады Гранты, это очень субъективный фактор зависящий от множества факторов. Во первых, манера езды водителя может увеличить расход топлива, причем заметно. А факторы внешней среды, температуры, состояние дорожного покрытия или даже размера колес и тип покрышек, это все влияет на расход топлива.

Кстати, о колесах, размерах резины и покрышек, которая используется на Ладе Гранта. Колесные диски производитель предлагает как стальные 13 дюймов, так и литые 14 и 15 дюймов. Размер шин и дисков Granta следующий —

  • R13 175/70
  • R14 175/65
  • R14 185/60
  • R15 185/55

Флуоресцентный резонансный перенос энергии - Chemistry LibreTexts

Флуоресцентный резонансный перенос энергии (FRET) - это специальный метод измерения расстояния между двумя хромофорами, называемый парой донор-акцептор. Ограничение FRET состоит в том, что этот процесс переноса эффективен только тогда, когда расстояние между донорно-акцепторной парой меньше 10 нанометров. Однако FRET - это явление, сильно зависящее от расстояния, и поэтому он стал популярным инструментом для измерения динамической активности биологических молекул в наномасштабе.

Введение

FRET - это аббревиатура от Förster (Flourescence) Resonance Energy Transfer. Передача энергии по Фёрстеру - это явление, при котором возбужденный донор передает энергию (не электрон) акцепторной группе посредством безызлучательного процесса. Этот процесс сильно зависит от расстояния, что позволяет исследовать биологические структуры. Одним из распространенных приложений является простое измерение расстояния между двумя интересующими позициями на большой молекуле, обычно биологической макромолекуле, путем присоединения соответствующих донорно-акцепторных групп к большой молекуле.Если большая молекула включает только одного донора и одну акцепторную группу, расстояние между донором и акцептором можно легко измерить, если в этом процессе нет конформационных изменений. Кроме того, если молекула имеет огромное конформационное изменение, можно также измерить динамическую активность между двумя сайтами на этой макромолекуле, например, взаимодействия белков. Сегодня этот метод широко применяется во многих областях, таких как эксперименты с одной молекулой, молекулярные двигатели, биосенсоры и механические движения ДНК.FRET также называют «спектроскопической линейкой» из-за его внутреннего удобства.

Теоретический анализ был хорошо разработан Теодором Фёрстером. Этот механизм безызлучательного переноса схематически показан на рисунке \ (\ PageIndex {1} \). Донорная группа (D) возбуждается фотоном, а затем релаксирует в самое низкое возбужденное синглетное состояние, S 1 (по правилу Каша). Если акцепторная группа находится не слишком далеко, энергия, высвобождаемая, когда электрон возвращается в основное состояние (S 0 ), может одновременно возбуждать донорную группу.Этот безызлучательный процесс называется «резонансом». После возбуждения возбужденный акцептор излучает фотон и возвращается в основное состояние, если другие состояния тушения не существуют.

Рисунок \ (\ PageIndex {1} \): Принципиальная схема передачи энергии резонанса Фёрстера. (CC BY; LibreTexts)

Резонансный механизм связан с кулоновским взаимодействием между электронами. Таким образом, относительное расстояние кулоновского взаимодействия между парой донор-акцептор может быть больше, чем передача энергии электронного обмена, которая требует перекрытия волновых функций, а именно передачи энергии Декстера.Кулоновское взаимодействие требует только перекрытия спектра, что означает идентичность резонансной энергии. Рисунок \ (\ PageIndex {2} \) здесь должен дать представление о том, что такое резонансный механизм. (Обратите внимание, что зазор HOMO-LUMO не равен разности энергий между основным состоянием и нижним возбужденным состоянием молекулы.)

Рисунок \ (\ PageIndex {2} \): схематическая диаграмма кулоновских взаимодействий. (CC BY; LibreTexts)

Факторы, влияющие на FRET

Эффективность FRET (\ (E \)) - квантовый выход перехода с переносом энергии; я. 6} \ label {2} \]

, где \ (r \) - расстояние между донорными и акцепторными хромофорами, а \ (R_o \) - характерное расстояние (расстояние Ферстера или радиус Ферстера) с эффективностью переноса 50%.

Перекрытие спектра

Для повышения эффективности FRET группа доноров должна иметь хорошие способности поглощать фотоны и излучать фотоны. Это означает, что донорная группа должна иметь высокий коэффициент экстинкции и высокий квантовый выход. Наложение спектра излучения донора и спектра поглощения акцептора означает, что энергия, потерянная от возбужденного донора до основного состояния, может возбуждать акцепторную группу. Согласование энергии называется явлением резонанса. Таким образом, чем больше перекрытие спектров, тем лучше донор может передавать энергию акцептору.4 \, d \ lambda \ label {3} \]

, где \ (F_D (λ) \) - нормированный спектр излучения донора, \ (\ epsilon_ {A} \) стандарты для молярного коэффициента поглощения акцептора, а \ (λ \) - длина волны.

Рисунок \ (\ PageIndex {3} \): Схема спектрального перекрытия. (CC BY; LibreTexts)

Ориентация переходных диполей

На резонансный механизм передачи энергии также влияют ориентации диполя эмиссионного перехода донора и диполя поглощения акцептора.{-4} \ label {4} \]

Таблица \ (\ PageIndex {1} \): расстояния Ферстера различных донорно-акцепторных пар. Сокращения: BPE, B-фикоэритрин; CY5, карбоксиметилиндоцианин; Дансил, просто дансильная группа; EM, эозин малеимид; FITC, фторцеин-5-изотиоцианат; LY - желтый люцифер, ODR - октадецилродамин; TNP-ATP, тринитрофенил-ATP.
Донор Приемник

Расстояние Ферстера (\ (R_0 \), нм)

Нафталин Дансил 2.2
LY TNP-ATP 3,5
Дансил ODR 4,3
LY EM 5,3
FITC EM 6,0
BPE CY5 7.2

Заключение и ограничения FRET

FRET обеспечивает эффективный способ измерения расстояния между донорным и акцепторным хромофором. На эффективность передачи энергии сильно влияет соотношение \ (R \) и \ (R_0 \) из-за экспоненты 6. Таким образом, измеряя эффективность FRET, можно легко получить точное расстояние между донором и акцептором. При правильном выборе донора и акцептора этот эксперимент также можно провести in vivo .Однако FRET дает информацию только о расстояниях. Если происходит резкое конформационное изменение, такое как удлинение или изгиб, невозможно узнать точное движение донора и акцептора. Кроме того, прикрепление хромофоров к точным участкам макромолекулы также важно, как по количеству хромофоров, так и по положению макромолекулы, иначе FRET может создавать шумовые сигналы. (См. Вопрос 5)

Упражнение \ (\ PageIndex {1} \)

Нить F-актина состоит из мономеров G-актина.Прикрепив хоромофор донора (D) или акцептора (A) к мономеру G-актина и измерив эффективность передачи энергии, чтобы измерить среднее расстояние между мономерами G-актина в филаменте F-актина (при условии, что мономеры находятся в хорошем состоянии). расположены в последовательности DADADADA ....), и обнаруживается, что средняя эффективность передачи энергии составляет 23%. Если \ (R_0 \) составляет 4,5 нм, каково среднее расстояние между мономерами в нити?

Ответ

5.5 нм.

Упражнение \ (\ PageIndex {2} \)

На основании вопроса 1, если последовательность филаментов состоит из 8 мономеров в порядке DADADADA, сколько видов эффективности может быть обнаружено, если филамент не изгибается и \ (R_0 \) достаточно велик, чтобы увидеть все их?

Ответ

Будет обнаружено 4 вида эффективности.

Упражнение \ (\ PageIndex {3} \)

Пара cy3-дорнор и cy5-акцептор прикреплена к финалам последовательности ДНК.Если игнорировать ориентацию переходных диполей донора и акцептора, пожалуйста, постройте зависимость между отношением (\ (R / R_0 \)) и эффективностью передачи энергии.

Ответ

Пожалуйста, посетите веб-сайт профессора Тэкджип Ха. https://netfiles.uiuc.edu/tjha/www/newTechnique.html

Упражнение \ (\ PageIndex {4} \)

Воспользуйтесь примером из вопроса 3, а теперь рассмотрите ориентацию переходных диполей.Постройте зависимость между разделяющим расстоянием донорно-акцепторной пары и эффективностью передачи энергии. (Помните, что при удлинении ДНК путем добавления пар оснований ориентация донорных и акцепторных хромофоров изменится) (Вопросы 3 и 4 переработаны из статьи, в которой измерялась зависимость ориентации в процессе FRET с использованием спирали ДНК.

Ответ

См. PNAS, август 2008 г., 105 (32), 11176-11181, DOI: 10.1073 / пнас.0801707105

Упражнение \ (\ PageIndex {5} \)

Одна из самых сложных проблем в области ионных каналов - это наблюдение за тем, как канал работает in vivo и конформационным изменением канала, который встроен в клеточную мембрану. Если ученый хочет исследовать движение ворот ионного канала с помощью FRET, какие факторы следует учитывать? Например, как правильно привязать донор и акцептор к точным позициям затвора канала.

Ответ

Открытый вопрос. Пожалуйста, обратитесь к этой вводной статье об использовании FRET для исследования движений ионных каналов. Биофизический журнал, 2003 г., январь, 84 (1), 1-2, DOI: 10.1016 / S0006-3495 (03) 74827-9

Сноски

  1. PNAS, декабрь 2006 г., 103 (49), 18458-18463, DOI: 10.1073 / pnas.0605422103
  2. PNAS, ноябрь 2008 г., 105 (47), 18337-18342, DOI: 10.1073 / pnas.0800977105
  3. Nature Biotechnology 2003, 21, 1387-1395, DOI: 10.1038 / nbt896
  4. PNAS, октябрь 2009 г., 106 (42), 17741-17746, DOI: 10.1073 / pnas. 0

    7106
  5. Nature, 1997 августа, 388, 882-887
  6. PNAS, декабрь 2006 г., 103 (51) 19217-19218, DOI: 10.1073 / pnas.0609223103
  7. PNAS, август 1967 г., 58 (2), 719-26. DOI: 10.1073 / pnas.58.2.719
  8. Аналитическая биохимия, апрель 1994 г., 218 (1), 1-13, DOI: 10.1006 / abio.1994.1134
  9. Протоколы природы, 2006 г., август, 1, 911–919, DOI: 10.1038 / nprot.2006.122
  10. PNAS, август 2008 г., 105 (32), 11176-11181, DOI: 10.1073 / пнас.0801707105
  11. Биофизический журнал, 2003, январь, 84 (1), 1-2, DOI: 10.1016 / S0006-3495 (03) 74827-9

Характеристика спектрально разнообразного набора флуоресцентных белков как акцепторов FRET для mTurquoise2

  • 1.

    Чудаков, Д. М., Мац, М. В., Лукьянов, С. и Лукьянов, К. А. Флуоресцентные белки и их применение в визуализации живых клеток и тканей. Physiol Rev 90 , 1103–1163 (2010).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 2.

    Цзянь Р. Ю. Зеленый флуоресцентный. Белки 67 , 509–44 (1998).

    CAS Google ученый

  • 3.

    Мияваки А. и Ниино Ю. Молекулярные шпионы для биоимиджинга - флуоресцентные белковые зонды. Мол. Ячейка 58 , 632–643 (2015).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 4.

    Чудаков, Д. М., Лукьянов, С., Лукьянов, К. А. Флуоресцентные белки как инструментарий для визуализации in vivo . Trends Biotechnol 23 , 605–613 (2005).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 5.

    Gadella, T. W. J. Jr., Van der Krogt, G.N. & Bisseling, T. Микроскопия FRET на основе GFP в живых растительных клетках. Trends Plant Sci. 4 , 287–291 (1999).

    Артикул PubMed Google ученый

  • 6.

    Мияваки, А. Разработка зондов для клеточных функций с использованием флуоресцентных белков и резонансного переноса энергии флуоресценции. Annu. Rev. Biochem. 80 , 357–73 (2011).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 7.

    Поллок Б. А. и Хейм Р. Использование GFP в приложениях на основе FRET. Trends Cell Biol. 9 , 57–60 (1999).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 8.

    Поршень, Д. В. и Кремерс, Г. Дж. Флуоресцентный белок FRET: хорошее, плохое и уродливое. Trends Biochem. Sci. 32 , 407–14 (2007).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 9.

    Jares-Erijman, E. A. & Jovin, T. M. FRET imaging. Nat Biotechnol 21 , 1387–1395 (2003).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 10.

    Пьетрашевска-Богель, А.& Gadella, T. W. J. Jr. микроскопия FRET: от принципа к рутинной технологии в клеточной биологии. J. Microsc. 241 , 111–8 (2011).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 11.

    Ву, П. Г. и Бранд, Л. Резонансная передача энергии: методы и приложения. Анал. Biochem. 218 , 1–13 (1994).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 12.

    Хамерс, Д., ван В. Вейдер, Л., Борст, Дж. У. и Годхарт, Дж. Разработка биосенсоров FRET для систем млекопитающих и растений. Протоплазма 251 , 333–47 (2014).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 13.

    Mehta, S. & Zhang, J. Репортаж с мест: генетически кодируемые флуоресцентные репортеры раскрывают динамику передачи сигналов в живых биологических системах. Annu. Rev. Biochem. 80 , 375–401 (2011).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 14.

    Окумото, С., Джонс, А. и Фроммер, В. Б. Количественная визуализация с помощью флуоресцентных биосенсоров. Annu. Rev. Plant Biol. 63 , 663–706 (2012).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 15.

    Goedhart, J., Vermeer, J. E., Adjobo-Hermans, M. J., van Weeren, L. & Gadella, T. W. J. Jr. Чувствительное обнаружение гомодимеров p65 с использованием пар FRET на основе красного смещения и флуоресцентных белков. PLoS One 02 , e1011 (2007).

    ADS Статья Google ученый

  • 16.

    Ван дер Крогт, Г. Н. М., Огинк, Дж., Понсиоен, Б. и Ялинк, К. Сравнение донорно-акцепторных пар для генетически кодированных сенсоров FRET: применение к сенсору цАМФ Epac в качестве примера. PLoS One 3 , e1916 (2008).

    ADS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 17.

    Скотт Б. Л. и Хоппе А. Д. Оптимизация трио флуоресцентных белков для 3-сторонней визуализации FRET взаимодействий белков в живых клетках. Sci. Реп. 5 , 10270 (2015).

    ADS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 18.

    Кремерс, Дж. Дж., Годхарт, Дж., Ван Мюнстер, Э. Б. и Гаделла, Т. В. Дж. Мл. Циановые и желтые суперфлуоресцентные белки с улучшенной яркостью, сворачиванием белков и радиусом Фёрстера FRET. Биохимия 45 , 6570–80 (2006).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 19.

    Кубитт, А. Б., Вулленвебер, Л. А. и Хайм, Р. Понимание структурно-функциональных взаимосвязей в зеленом флуоресцентном белке Aequorea victoria. Methods Cell Biol. 58 , 19–30 (1998).

    Артикул Google ученый

  • 20.

    Симеринг, К. Р., Голбик, Р., Север, Р., Хазелофф, Дж. Мутации, которые подавляют термочувствительность зеленого флуоресцентного белка. Curr. Биол. 6 , 1653–1663 (1996).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 21.

    Фукуда, Х., Араи, М. и Куваджима, К. Сворачивание зеленого флуоресцентного белка и мутанта Cycle3. Биохимия 39 , 12025–12032 (2000).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 22.

    Паттерсон, Г. Х., Кнобель, С. М., Шариф, В. Д., Каин, С. Р. и Пистон, Д. В. Использование зеленого флуоресцентного белка и его мутантов в количественной флуоресцентной микроскопии. Biophys. J. 73 , 2782–90 (1997).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 23.

    Кормак Б.П., Вальдивиа Р. Х. и Фалькоу С. Оптимизированные для FACS мутанты зеленого флуоресцентного белка (GFP). Джин 173 , 33–38 (1996).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 24.

    Nagai, T. et al. . Вариант желтого флуоресцентного белка с быстрым и эффективным созреванием для клеточно-биологических применений. Нат. Biotechnol. 20 , 87–90 (2002).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 25.

    Вахтер Р. М., Уоткинс Дж. Л. и Ким Х. Механическое разнообразие приобретения красной флуоресценции GFP-подобными белками. Биохимия 49 , 7417–27 (2010).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 26.

    Мияваки, А., Щербакова, Д. М., Верхуша, В. В. Красные флуоресцентные белки: образование хромофоров и клеточные применения. Curr. Opin. Struct. Биол. 22 , 679–688 (2012).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 27.

    Грисбек, О., Бэрд, Г. С., Кэмпбелл, Р. Е., Захариас, Д. А., Циен, Р. Ю. Снижение чувствительности желтого флуоресцентного белка к окружающей среде. Механизм и приложения. J. Biol. Chem. 276 , 29188–94 (2001).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 28.

    Rekas, A., Alattia, J.-R., Nagai, T., Miyawaki, A. & Ikura, M. Кристаллическая структура венеры, желтый флуоресцентный белок с улучшенным созреванием и пониженной чувствительностью к окружающей среде. J. Biol. Chem. 277 , 50573–8 (2002).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 29.

    Верхуша В.В., Лукьянов К.А. Молекулярные свойства и применение флуоресцентных белков и хромопротеинов Anthozoa. Нат. Biotechnol. 22 , 289–96 (2004).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 30.

    Бэрд, Г. С., Захариас, Д. А. и Циен, Р. Ю. Биохимия, мутагенез и олигомеризация DsRed, красного флуоресцентного белка кораллов. Proc. Natl. Акад. Sci. США 97 , 11984–9 (2000).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 31.

    Захариас Д. А. Разделение липид-модифицированных мономерных GFP на мембранные микродомены живых клеток. Наука (80-.). 296 , 913–916 (2002).

    ADS CAS Статья Google ученый

  • 32.

    Винкенборг, Дж. Л., Эверс, Т. Х., Реулен, С. Ва, Мейер, Э. У. и Мерккс, М. Повышенная чувствительность датчиков протеазы на основе FRET путем изменения интерфейса димеризации GFP. Chembiochem 8 , 1119–21 (2007).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 33.

    Линденбург, Л. Х. и др. . Количественная оценка липкости: термодинамическая характеристика взаимодействий внутримолекулярных доменов для руководства при разработке датчиков резонансной передачи энергии Фёрстера. Биохимия 53 , 6370–81 (2014).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 34.

    Нгуен, А. В. и Догерти, П. С. Эволюционная оптимизация флуоресцентных белков для внутриклеточного FRET. Нат. Biotechnol. 23 , 355–60 (2005).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 35.

    Кэмпбелл Р. Э. и др. . Мономерный красный флуоресцентный белок. Proc. Natl. Акад. Sci. США 99 , 7877–82 (2002).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 36.

    Биндельс, Д. С. и др. . mScarlet: яркий мономерный красный флуоресцентный белок для визуализации клеток. Нат. Методы 14 , 53–56 (2016).

    Артикул PubMed Google ученый

  • 37.

    Pédelacq, J.-D., Cabantous, S., Tran, T., Terwilliger, T.C. & Waldo, G.S. Разработка и характеристика зеленого флуоресцентного белка суперпапки. Нат. Biotechnol. 24 , 79–88 (2006).

    Артикул PubMed Google ученый

  • 38.

    Costantini, L. M., Fossati, M., Francolini, M. & Snapp, E. L. Оценка тенденции флуоресцентных белков к олигомеризации в физиологических условиях. Трафик 13 , 643–649 (2012).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 39.

    Костантини, Л. М. и др. . Палитра флуоресцентных белков, оптимизированная для различных клеточных сред. Нат. Commun. 6 , 7670 (2015).

    Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

  • 40.

    Крэнфилл, П. Дж. и др. . Количественная оценка флуоресцентных белков. Нат. Методы 13 , 557–562 (2016).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 41.

    Ван Мюнстер, Э. Б., Кремерс, Г. Дж., Аджобо-Херманс, М. Дж. У. и Гаделла, Т. У. Дж. Младший. Измерение резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET) путем постепенного фотообесцвечивания акцепторов. J. Microsc. 218 , 253–262 (2005).

    MathSciNet Статья PubMed Google ученый

  • 42.

    Goedhart, J. et al. . Структурно-управляемая эволюция голубых флуоресцентных белков в направлении квантового выхода 93%. Нат. Commun. 3 , 751 (2012).

    Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

  • 43.

    Shaner, N.C. et al. . Повышение фотостабильности ярких мономерных оранжевых и красных флуоресцентных белков. Нат. Методы 5 , 545–551 (2008).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 44.

    Коди, К. В., Прашер, Д. К., Вестлер, В. М., Прендергаст, Ф. Г. и Уорд, В. В. Химическая структура гексапептидного хромофора зеленого флуоресцентного белка Aequorea. Биохимия 32 , 1212–1218 (1993).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 45.

    Swaminathan, R., Hoang, C.P., Verkman, A.S. Восстановление после фотообесцвечивания и распад анизотропии зеленого флуоресцентного белка GFP-S65T в растворе и клетках: вязкость цитоплазмы, измеренная с помощью трансляционной и вращательной диффузии зеленого флуоресцентного белка. Biophys. J. 72 , 1900-7 (1997).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 46.

    Cubitt, A.Б. и др. . Понимание, улучшение и использование зеленых флуоресцентных белков. Trends Biochem. Sci. 20 , 448–455 (1995).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 47.

    Гринбаум Л., Ротманн С. и Лави Р. Фотообесцвечивание зеленого флуоресцентного белка: модель повреждения белков эндогенным и экзогенным синглетным кислородом. Biol. Chem. 381 , 1251–1258 (2000).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 48.

    Нагай, Т., Ямада, С., Томинага, Т., Итикава, М. и Мияваки, А. Расширенный динамический диапазон флуоресцентных индикаторов для Са (2+) за счет циркулярно пермутированных желтых флуоресцентных белков. Proc. Natl. Акад. Sci. США 101 , 10554–9 (2004).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 49.

    Adjobo-Hermans, M. J. et al. . Визуализация в реальном времени активации гетеротримерного G-белка Gq в живых клетках. BMC Biol. 9 , 32 (2011).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 50.

    Klarenbeek, J., Goedhart, J., van Batenburg, A., Groenewald, D. & Jalink, K. Датчики FRET четвертого поколения на основе epac для cAMP обладают исключительной яркостью, фотостабильностью и динамическим диапазоном: характеристика специализированных датчиков для FLIM, для ратиометрии и с высоким сродством. PLoS One 10 , e0122513 (2015).

    Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

  • 51.

    Фриц Р. Д. и др. . Универсальный набор инструментов для создания чувствительных биосенсоров FRET для визуализации сигналов во времени и пространстве. Sci. Сигнал. 6 , RS12 (2013).

    Артикул PubMed Google ученый

  • 52.

    Komatsu, N. и др. . Разработка оптимизированной основы биосенсоров FRET для киназ и GTPases. Мол. Биол. Ячейка 22 , 4647–56 (2011).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 53.

    Шимозоно, С. & Мияваки, А. Разработка конструкций FRET с использованием CFP и YFP. Methods Cell Biol. 85 , 381–93 (2008).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 54.

    Peroza, E. A., Boumezbeur, A.-H. И Замбони, Н. Быстрая, рандомизированная разработка генетически кодируемых сенсоров FRET для малых молекул. Аналитик 140 , 4540–8 (2015).

    ADS CAS Статья PubMed Google ученый

  • 55.

    Шифферер М.И Грисбек, О. Динамический репортер FRET экспрессии генов, улучшенный функциональным скринингом. J. Am. Chem. Soc. 134 , 15185–15188 (2012).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 56.

    Ohta, Y. et al. . Нетривиальный эффект цветообмена пары донор / акцептор в разработке индикаторов на основе резонансного переноса энергии Фёрстера (FRET). ACS Chem. Биол. 11 , 1816–22 (2016).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 57.

    Goedhart, J., Hink, M. A. & Jalink, K. Введение в методы флуоресцентной визуализации, ориентированные на применение биосенсоров. Методы молекулярной биологии 1071 , 17–28 (2014).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 58.

    ван Унен, Дж. и др. . Количественный одноклеточный анализ сигнальных путей, активируемых непосредственно после подтипов гистаминовых рецепторов. Мол. Pharmacol. 90 , 162–176 (2016).

    Артикул PubMed Google ученый

  • 59.

    Богданов А.М. и др. . Включение и выключение фотоиндуцированного переноса электронов в флуоресцентных белках с помощью π-стекирования, связывания галогенидов и мутаций Tyr145. J. Am. Chem. Soc. 138 , 4807–17 (2016).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 60.

    Goedhart, J. et al. . Количественная совместная экспрессия белков на уровне отдельной клетки - применение к мультимерному датчику FRET. PLoS One 6 , e27321 (2011).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 61.

    Raspe, M. и др. . siFLIM: FLIM с одним изображением в частотной области предоставляет быстрые и эффективные по фотонам данные о сроке службы. Нат. Методы 13 , 501–4 (2016).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 62.

    Баджар Б. Т. и др. . Повышение яркости и фотостабильности зеленых и красных флуоресцентных белков для визуализации живых клеток и отчетов FRET. Sci. Реп. 6 , 20889 (2016).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 63.

    Shaner, N.C. et al. . Яркий мономерный зеленый флуоресцентный белок, полученный из Branchiostoma lanceolatum. Нат. Методы 10 , 407–409 (2013).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 64.

    Thestrup, T. et al. . Оптимизированные ратиометрические датчики кальция для функциональной визуализации in vivo нейронов и Т-лимфоцитов. Нат. Методы 11 , 175–82 (2014).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 65.

    Shaner, N.C. et al. . Улучшенные мономерные красные, оранжевые и желтые флуоресцентные белки, полученные из Discosoma sp. красный флуоресцентный белок. Нат. Biotechnol. 22 , 1567–1572 (2004).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 66.

    Shimozono, S. et al. . Конкатенация голубых и желтых флуоресцентных белков для эффективной резонансной передачи энергии. Биохимия 45 , 6267–6271 (2006).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 67.

    Оуян, М. и др. . Одновременная визуализация протуморигенных активностей Src и MT1-MMP с резонансным переносом энергии флуоресценции. Cancer Res. 70 , 2204–2212 (2010).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 68.

    Сан, Ю. и др. . Характеристика оранжевого акцепторного флуоресцентного белка для сенсибилизированной спектральной флуоресцентной резонансной микроскопии с переносом энергии с использованием лазера белого света. J. Biomed. Опт. 14 , 54009 (2009).

    Артикул Google ученый

  • 69.

    Цуцуи, Х., Карасава, С., Окамура, Ю. и Мияваки, А. Улучшение измерений мембранного напряжения с использованием FRET с новыми флуоресцентными белками. Нат. Методы 5 , 683–5 (2008).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 70.

    Муракоши, Х., Ли, С. Дж. И Ясуда, Р. Высокочувствительная и количественная визуализация FRET-FLIM отдельных дендритных шипов с использованием улучшенного безызлучательного YFP. Brain Cell Biol. 36 , 31–42 (2008).

    Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

  • 71.

    Щербо Д. и др. . Ярко-красные флуоресцентные метки для визуализации белков в живых тканях. Biochem.J. 418 , 567–574 (2009).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 72.

    Ким Дж. Х. и др. . Высокая эффективность расщепления пептида 2А, полученного из тешовируса-1 свиньи, в линиях клеток человека, рыбок данио и мышей. PLoS One 6 , 1–8 (2011).

    Google ученый

  • 73.

    Goedhart, J. & Gadella, T. W. J. Jr. Анализ отжига олигонуклеотидов с помощью электрофореза в агарозных гелях с использованием проводящей среды бората натрия. Анал. Biochem. 343 , 186–187 (2005).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 74.

    van Unen, J. et al. . Ограниченная плазматической мембраной активность RhoGEF достаточна для RhoA-опосредованной полимеризации актина. Sci. Реп. 5 , 14693 (2015).

    ADS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 75.

    Перц, О., Ходжсон, Л., Клемке, Р. Л., Хан, К. М. Пространственно-временная динамика активности RhoA в мигрирующих клетках. Природа 440 , 1069–72 (2006).

    ADS CAS Статья PubMed Google ученый

  • 76.

    Хортон, Р. М., Хант, Х. Д., Хо, С. Н., Пуллен, Дж. К. и Пиз, Л. Р. Разработка гибридных генов без использования рестрикционных ферментов: сплайсинг генов посредством перекрывающихся последовательностей удлинения; частота ошибок; экзон; интрон; мозаичный гибридный белок; гены гистосовместимости мышей. 77 , 61–68 (1989).

  • 77.

    Хекман, К. Л. и Пиз, Л. Р. Сплайсинг генов и мутагенез посредством ПЦР-управляемого удлинения перекрытия. Нат. Protoc. 2 , 924–32 (2007).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 78.

    Биндельс, Д. С. и др. . В Флуоресцентная спектроскопия и микроскопия: методы и протоколы (редакторы Энгельборгс, Ю. и Виссер, Дж. У. Г. А.) 371–417 (Humana Press, 2014). https://doi.org/10.1007/978-1-62703-649-8_16.

  • 79.

    Кремерс, Дж. Дж., Годхарт, Дж., Ван Ден Хевел, Д. Дж., Герритсен, Х. С. и Гаделла-младший, Т. В. Дж. Улучшенные зеленые и синие флуоресцентные белки для экспрессии в клетках бактерий и млекопитающих. Биохимия 46 , 3775–3783 (2007).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • 80.

    Ван Манстер, Э. Б. и Гаделла, Т. У. Дж. Мл. PhiFLIM: новый метод предотвращения наложения спектров в микроскопии с визуализацией времени жизни флуоресценции в частотной области. J. Microsc. 213 , 29–38 (2004).

    MathSciNet Статья PubMed Google ученый

  • 81.

    van Munster, E. B. и Gadella, T. W. Jr. Подавление артефактов, вызванных фотообесцвечиванием, в FLIM частотной области путем изменения порядка записи. Cytom. A 58 , 185–194 (2004).

    Артикул Google ученый

  • 82.

    Ван Манстер, Э. Б. и Гаделла, Т. У. Дж. Младший, флуоресцентная микроскопия с визуализацией на протяжении всей жизни (FLIM). Достижения в области биохимической инженерии / биотехнологии 95 , 143–175 (2005).

    Артикул PubMed Google ученый

  • 83.

    Vermeer, J. E. M., Van Munster, E. B., Vischer, N. O. & Gadella, T. W. J. Jr. Зондирование микродоменов плазматической мембраны в протопластах коровьего гороха с использованием липидированных GFP-слитых белков и многомодовой микроскопии FRET. J. Microsc. 214 , 190–200 (2004).

    MathSciNet CAS Статья PubMed Google ученый

  • 84.

    Wlodarczyk, J. et al. . Анализ сигналов FRET при наличии свободных доноров и акцепторов. Biophys. J. 94 , 986–1000 (2008).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 85.

    van Unen, J. et al. . Кинетика рекрутирования и аллостерической активации изоформ ARHGEF25 гетеротримерным G-белком Gαq. Sci. Реп. 6 , 36825 (2016).

    ADS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 86.

    Лам, А. Дж. и др. . Улучшение динамического диапазона FRET с помощью ярко-зеленых и красных флуоресцентных белков. Нат. Методы 9 , 1005–12 (2012).

    CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 87.

    Ganesan, S., Ameer-Beg, S. M., Ng, T. T. C., Vojnovic, B. & Wouters, F. S. Резонансный энергоакцепторный хромопротеин на основе темно-желтого флуоресцентного белка (YFP) (REACh) для резонансного переноса энергии Фёрстера с GFP. Proc. Natl. Акад. Sci. США 103 , 4089–94 (2006).

    ADS CAS Статья PubMed PubMed Central Google ученый

  • 88.

    Сакауэ-Савано, А. и др. . Визуализация пространственно-временной динамики развития многоклеточного клеточного цикла. Ячейка 132 , 487–498 (2008).

    CAS Статья PubMed Google ученый

  • Платформа нанозондов FRET на основе двухфотонной флуоресценции на основе наночастиц диоксида кремния для эффективного ратиометрического биоимиджинга внутриклеточного эндогенного аденозинтрифосфата

    Двухфотонная флуоресцентная визуализация - один из наиболее привлекательных методов визуализации для мониторинга важных биомолекул в биомедицинской области благодаря своим преимуществам низкого рассеяния света, большой глубины проникновения и подавления фотоповреждений / фототоксичности при возбуждении в ближнем инфракрасном диапазоне.Однако в реальной биологической визуализации органические двухфотонные флуоресцентные красители имеют недостатки, такие как высокая биологическая токсичность, и на их эффективность флуоресценции легко влияет сложная среда в организмах. В этом исследовании была разработана новая платформа нанозондов с двухфотонными наночастицами диоксида кремния, легированными красителем, для основанного на FRET ратиометрического биосенсинга и биоимиджинга, с эндогенным АТФ, выбранным в качестве мишени для обнаружения. Нанозонд состоит из трех компонентов: (1) двухфотонное ядро ​​наночастиц диоксида кремния, легированного красителем, которое служит донором энергии для FRET; (2) амино-модифицированные шпильки-праймеры с карбоксифлуоресцеином в качестве акцептора энергии для FRET; (3) аптамер, действующий как блок распознавания для реализации функции зондирования.Нанозонд показал логометрические флуоресцентные ответы для обнаружения АТФ с высокой чувствительностью и высокой селективностью in vivo . Более того, нанозонд показал удовлетворительную логометрическую двухфотонную флуоресцентную визуализацию эндогенного АТФ в живых клетках и тканях (глубина проникновения 190 нм). Эти результаты показали, что новые двухфотонные наночастицы кремнезема могут быть сконструированы путем легирования двухфотонного флуоресцентного красителя в наночастицы кремнезема, и они могут эффективно устранить недостатки двухфотонных флуоресцентных красителей.Эти превосходные характеристики указывают на то, что эта новая платформа для нанозондов станет очень ценным инструментом молекулярной визуализации, который можно будет широко использовать в биомедицинской области для скрининга лекарств, диагностики заболеваний и других связанных исследований.

    У вас есть доступ к этой статье

    Подождите, пока мы загрузим ваш контент... Что-то пошло не так. Попробуйте снова?

    Патенты и заявки на патенты и лады (класс 84 / 314R)

    Номер патента: 6069306

    Abstract: Настоящее изобретение относится к музыкальным инструментам, способам и устройствам для воспроизведения нот музыкальной шкалы с использованием реальных струн.В частности, оно относится к разделению ладами грифа или грифа струнного музыкального инструмента с ладами для получения желаемой музыкальной гаммы с определенным набором струн. Описан один вариант осуществления изобретения, в котором 12-тональная равномерно темперированная гамма точно воспроизводится на гитаре со стальными струнами, имеющими достаточную жесткость на изгиб, чтобы вызывать слышимые интонационные ошибки, присущие гитарам со стальными струнами предшествующего уровня техники. Согласно другому варианту осуществления изобретения, музыкальная гамма дополнительно темперируется для приближения к 12-тональной, равномерной шкале, при этом сводя к минимуму слышимые биения, возникающие при воспроизведении интервалов и аккордов из-за негармоничных частотных компонентов, присущих тонам, генерируемым вибрирующими гитарными струнами.Также объясняются способы изготовления в отношении намотанных струн и в отношении граничных условий.

    Тип: Грант

    Подано: 1 марта 1999 г.

    Дата патента: 30 мая 2000 г.

    Цессионарий: Gibson Guitar Corp.

    Изобретателей: Осман К. Исван, Джон С. Аллен

    Улучшенный вариант голубого флуоресцентного белка, полезный для FRET - Research Profiles в Медицинской школе Вашингтонского университета

    TY - JOUR

    T1 - Улучшенный вариант голубого флуоресцентного белка, полезный для FRET

    AU - Rizzo, Mark A.

    AU - Springer, Gerald H.

    AU - Granada, Butch

    AU - Piston, David W.

    N1 - Информация о финансировании: Благодарим А. Риццо за полезные предложения. Финансирование этой работы было предоставлено грантами Национального института здравоохранения США DK60275 (MAR), DK53434 и CA86283 (оба для DWP), грантом BBI-9871063 (DWP) Национального научного фонда США и бесплатными медицинскими услугами Министерства обороны США. Грант программы «Электронный лазер» F49620-01-1-0429 (DWP).

    PY - 2004/4

    Y1 - 2004/4

    N2 - Многие генетически закодированные биосенсоры используют резонансный перенос энергии Ферстера (FRET) между флуоресцентными белками для определения биохимических явлений в живых клетках.Чаще всего в качестве донорного флуорофора используется усиленный голубой флуоресцентный белок (ECFP) в сочетании с одним из нескольких вариантов желтого флуоресцентного белка (YFP) в качестве акцептора. ECFP используется, несмотря на несколько спектроскопических недостатков, а именно низкий квантовый выход, низкий коэффициент экстинкции и время жизни флуоресценции, которое лучше всего соответствует двойной экспоненте. Чтобы улучшить характеристики ECFP для измерений FRET, мы использовали подход сайт-направленного мутагенеза, чтобы преодолеть эти недостатки.Получившийся вариант, который мы назвали Cerulean (ECFP / S72A / Y145A / h248D), имеет значительно улучшенный квантовый выход, более высокий коэффициент экстинкции и время жизни флуоресценции, которое лучше всего соответствует одной экспоненте. Cerulean в 2,5 раза ярче, чем ECFP, и замена ECFP на Cerulean существенно улучшает отношение сигнал / шум датчика активации глюкокиназы на основе FRET.

    AB - Многие генетически закодированные биосенсоры используют резонансный перенос энергии Ферстера (FRET) между флуоресцентными белками для определения биохимических явлений в живых клетках.Чаще всего в качестве донорного флуорофора используется усиленный голубой флуоресцентный белок (ECFP) в сочетании с одним из нескольких вариантов желтого флуоресцентного белка (YFP) в качестве акцептора. ECFP используется, несмотря на несколько спектроскопических недостатков, а именно низкий квантовый выход, низкий коэффициент экстинкции и время жизни флуоресценции, которое лучше всего соответствует двойной экспоненте. Чтобы улучшить характеристики ECFP для измерений FRET, мы использовали подход сайт-направленного мутагенеза, чтобы преодолеть эти недостатки.Получившийся вариант, который мы назвали Cerulean (ECFP / S72A / Y145A / h248D), имеет значительно улучшенный квантовый выход, более высокий коэффициент экстинкции и время жизни флуоресценции, которое лучше всего соответствует одной экспоненте. Cerulean в 2,5 раза ярче, чем ECFP, и замена ECFP на Cerulean существенно улучшает отношение сигнал / шум датчика активации глюкокиназы на основе FRET.

    UR - http://www.scopus.com/inward/record.url?scp=1842424983&partnerID=8YFLogxK

    U2 - 10.1038 / nbt945

    DO - 10.1038 / nbt945

    M3 - Артикул

    C2 - 149

    AN - SCOPUS: 1842424983

    VL - 22

    SP - 445

    EP - 445

    EP - 445 JF - Nature Biotechnology

    SN - 1087-0156

    IS - 4

    ER -

    Беседа с основателями Black Fret - Underground Music Network Остина

    На недавнем мероприятии Austin Music People мы столкнулись с Black Основатели Fret Мэтт Отт и Колин Кендрик сразу же захотели узнать больше.

    Как вы бы описали Black Fret человеку на улице?

    В нашем сердце Black Fret - это социальное и взаимосвязанное сообщество любителей музыки, приверженных хорошей музыке, хорошим временам и устойчивому успеху местных музыкантов Остина. Вместе наши участники находят отличные группы, собираются, чтобы увидеть их на интимных шоу, и награждают их грантами, чтобы помочь им создавать и исполнять новую музыку. (Эрин Айви на вечеринке по случаю запуска Black Fret, январь 2013 г.)

    Почему так важна миссия Black Fret?

    В 2012 году музыкальная индустрия Остина стоила почти 1 доллар.Экономический двигатель за 7 миллиардов долларов. Он поддерживает более 18 000 рабочих мест **. Остин является домом для тысяч замечательных музыкантов. Тем не менее, многие музыканты борются за создание и распространение своего искусства. Существует заблуждение, что цифровая революция сделала создание музыки недорогим и легким делом. Несмотря на то, что технический прогресс сделал запись музыки более доступной для большего числа людей, создание «профессиональной» высококачественной музыки, а затем трата денег на гастроли, производство, распространение и продвижение этой музыки остается невероятно дорогим предложением.Гранты Black Fret имеют большое значение для успеха наших местных артистов и, надеюсь, уберегут Остина от опасности потерять талант, который делает нашу креативную экономику такой уникальной.

    Откуда взялось название?

    Именование - это всегда увлекательная задача. После создания Austin Music Foundation более десяти лет назад мы искали что-то более характерное. Мы хотели название, которое не походило бы на традиционную благотворительность, потому что мы им не являемся.Мы хотели что-то, что отражало бы нашу миссию по поддержке местной музыки. Мы хотели чего-то моложе, острее и немного тайного общества, которое соответствовало бы нашей модели ограниченного членства. Итак, мы начали мозговой штурм и исследования. В процессе обнаружил в Интернете малоизвестную ветку о поисках блэк-метала, который мог бы служить ладом на грифе гитары. Оказывается, нет металла, который мог бы выдержать вибрацию металл о металл и остаться черным. Так что на самом деле «черного лада» не существует.В этом смысле это своего рода единорог музыкального мира. Мы решили, что это хорошее место для жизни. Так родился Black Fret.

    Как мне стать участником Black Fret?

    Наш бизнес-план прост и проверен: найти 1333 человека, которые будут жертвовать 1500 долларов в год… собирая 2 000 000 долларов каждый год. После вычета налогов это может стоить вам менее 100 долларов в месяц (50 долларов, если у вас есть доступ к корпоративному матчу). Это позволяет нам создать благотворительную некоммерческую организацию, способную поддерживать более 50 художников каждый год.Эти гранты будут направлены лучшим из лучших из международно признанных музыкантов Остина, что позволит нам создать всемирно признанный бренд на основе Black Fret Artists, что позволит этим артистам создать собственный бренд за пределами Остина.

    В обмен на ежегодные взносы наши участники проходят ежегодный процесс обучения, слушания, просмотра и распространения лучших музыкантов Остина, что в конечном итоге приводит к голосованию по отбору артистов для получения грантов. Во время этого процесса участники будут участвовать в регулярных и удивительно интимных музыкальных мероприятиях, получая личное представление о музыкальной сцене Остина.Членский опыт в равной степени является покровителем искусств, инсайдером музыкальной индустрии, разведчиком талантов и связным Austinite.

    Если вы не хотите становиться участником или спонсором, самое простое и действенное, что можно сделать, чтобы помочь, - это рассказать об этом своим друзьям, семье, коллегам и любимым группам. Если вас пригласили на мероприятие, мы будем рады, если вы пригласите людей, которые заинтересованы и могут присоединиться. В конечном итоге, чем раньше мы наберем 1333 члена, тем скорее мы сможем полностью раскрыть свой потенциал.На нашем веб-сайте также указан уровень поддержки (ежегодные взносы в размере 300 долларов США), и любые пожертвования приветствуются. Наконец, нам нужно несколько избранных волонтеров на наших мероприятиях. Если вы хотите помочь, напишите нам по адресу [email protected]

    Для получения дополнительной информации о Black Fret, членстве и предстоящих событиях посетите BlackFret.org.

    ** Источник: БЕЛАЯ БУМАГА «СОСТОЯНИЕ МУЗЫКАЛЬНОЙ ИНДУСТРИИ ОСТИНА»; AUSTIN MUSIC PEOPLE, ФЕВРАЛЬ 2013

    Ручной датчик FRET-Aptamer для сельскохозяйственной безопасности

    Progress 05.01.06 - 31.12.07

    Выходы
    Во время фазы I, OpTech разработала и упорядочила 10 кандидаты в аптамеры к предположительно доступному (нейтрализующемуся антителами) и высококонсервативному пептиду из 14 аминокислот с поверхности вирусов ящура O-серотипа.OpTech продемонстрировал многообещающие данные FRET с использованием аптамеров PicofluorTM и поликлонального раунда 5, которые можно было проверить с помощью спектрофлуориметра. Однако конкурентные результаты FRET не были столь же надежными, когда для FRET использовались отдельные аптамеры с высоким и низким сродством. Эти результаты предполагают, что, хотя технология, похоже, работает, необходимы дальнейшие исследования и оптимизация для повышения чувствительности, специфичности и линейного динамического диапазона конкурентного анализа FRET-аптамеров для ящура.Одним из средств достижения этих целей может быть приготовление смеси аптамеров ящура с высоким и низким сродством, которые имитируют результаты FRET, полученные с поликлональными аптамерами. Если это удастся, анализы можно будет расширить для изучения FRET от других серотипов ящура. Многое было изучено о природе конкурентного подхода к тестированию FRET-аптамеров, патентуемого OpTech, в рамках этого проекта Фазы I. Трудности с секвенированием запутанных GC-богатых вторичных структур аптамеров были преодолены путем оптимизации протоколов клонирования и секвенирования.Кроме того, OpTech наблюдала доминирующую реакцию выключения FRET из поликлонального пула аптамеров 5 раунда, но отдельные аптамеры из этого пула деомстировали либо выключение, либо освещение по характеру FRET, а также различия в чувствительности и специфичности. Таким образом, окончательный анализ может состоять из смеси различных известных последовательностей аптамеров, выбранных для охвата определенного динамического диапазона концентраций аналита (вируса ящура) и исключения определенных известных мешающих видов. Конкурентный подход к анализу FRET-аптамеров действительно представляется возможным для полевого обнаружения различных аналитов в портативном формате (Picofluor) на основе результатов поликлонального анализа FRET-аптамеров.Однако последняя работа показывает, что, хотя В настоящее время OpTech имеет опыт в получении последовательностей ДНК-аптамеров, и для создания действительно чувствительной и специфической портативной системы анализа FRET-аптамеров потребуется гораздо больше возможностей для скрининга и оптимизации аптамеров.

    Воздействие
    Несмотря на то, что с 1929 года в США не было вспышек ящура (ящура), и вся Северная Америка считается свободной от ящура, вспышки ящура 2001 и 2007 годов в Великобритании и другие вспышки в Азии напоминают нам о необходимости проявлять бдительность при мониторинге ящура.К сожалению, не существует действительно надежных полевых тестов для всех серотипов ящура. Этот факт требует отправки образцов в Центр болезней животных острова Плам, где можно выделить и идентифицировать серотип ящура всего за 4 дня (информационный бюллетень USDA APHIS, январь 2002 г.). Тем не менее, даже при соблюдении карантинных процедур разрушительный афтовирус может распространяться как лесной пожар на большие расстояния и наносить значительный ущерб животноводческой отрасли США с оборотом 100 миллиардов долларов. Чтобы решить проблему очень быстрого полевого теста на ящур, Министерство сельского хозяйства США заключило с OpTech контракт SBIR фазы I на разработку гомогенного аптамера флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET) -ДНК (суррогатного антитела) (один шаг, «свет включен или выключен»). анализы, которые можно использовать для обнаружения Ящур в пластиковой кювете с коммерчески доступным портативным флуорометром с питанием от батареек (Picofluor от Turner Biosystems, Inc.).

    Публикации