8 лада: LADA Vesta с новым мотором 1,8 литра – уже у дилеров — Новости

Содержание

Разбираем новый 1,8-литровый двигатель ВАЗ-21179

Впервые АВТОВАЗ запускает в серию 1,8-литровый мотор, впервые внедряет изменяемые фазы газораспределения и впервые применяет селективную сборку на конвейере. Двигатель объемом 1,8 л (122 л.с.) внешне не сильно отличается от нынешних вазовских шестнадцатиклапанников. Но это новый мотор, причем собственной разработки. Старт производства — в феврале.

ГЦ

  • Дроссельная заслонка — без механического привода.
  • В головке блока цилиндров сделаны дополнительные масляные каналы к регулятору фаз. Облегченные клапаны — фирмы Mahle.
  • Катколлектор поставляет российская компания Экоальянс. Диаметр входных каналов увеличен до 39 мм. Датчик кислорода несет эмблему Bosch.
  • Коленчатый вал — с увеличенным радиусом кривошипа.
  • Рабочий объем цилиндров прирос благодаря большему ходу поршней.
  • Надежный водяной насос повышенной производительности закупают у корейской фирмы GMB.
  • Впервые на двигателе ВАЗ установлен импортный маслонасос GMB повышенной производительности.
  • Применен новый автомат натяжения зубчатого ремня — с двумя роликами, немецкой фирмы INA.
  • Облегченная шатунно-поршневая группа — производства Federal Мogul.
  • Топливная рампа — фирмы Continental. Форсунки — увеличенной производительности, факел распыла оптимизирован под рабочий процесс нового двигателя.
Двигатель объемом 1,8 л внешне не сильно отличается от нынешних вазовских шестнадцатиклапанников. Но это новый мотор, причем собственной разработки.

Основные параметры:

  • рабочий объем — 1774 см³
  • мощность — 122 л.с.
  • крутящий момент — 170 Н·м при 3750 об/мин.
Новый мотор предназначен для моделей Веста, XRAY и Ларгус. На блоке цилиндров есть дополнительная площадка для нанесения серийного номера. Ее хорошо видно при продольной установке силового агрегата в моторном отсеке. Поняли намек? Официальной информации пока нет, но нетрудно догадаться, что речь идет о Ниве. Блок цилиндров унифицирован с применяемым на нынешних 1,6‑литровых двигателях ВАЗ‑21126, —21127 и —21129. Та же высота и тот же диаметр цилиндров. Отличия — в дополнительных каналах системы смазки, обеспечивающих работу регулятора фаз, и дополнительных каналах системы охлаждения.

ГЦ1–9

Дроссельная заслонка — без механического привода. Мотор отвечает требованиям Евро‑5.

Дроссельная заслонка — без механического привода. Мотор отвечает требованиям Евро‑5.

Рабочий объем подняли путем увеличения хода поршня с 75,6 до 84,0 мм. Коленчатый вал — с увеличенным радиусом кривошипа и иными противовесами. Для снижения потерь на трение уменьшили с 47,8 до 43 мм диаметры шатунных шеек коленвала. Стали другими масляные каналы — так называемое сверление из шейки в шейку позволяет снизить себестоимость производства, а в масляных каналах остается меньше стружки и грязи. На торце вала нанесена метка классов коренных и шатунных шеек для точной подгонки вкладышей по диаметру, то есть для селективной сборки.

ГЦ1–8

В головке блока цилиндров сделаны дополнительные масляные каналы к регулятору фаз. Облегченные клапаны — фирмы Mahle.

В головке блока цилиндров сделаны дополнительные масляные каналы к регулятору фаз. Облегченные клапаны — фирмы Mahle.

Блок цилиндров и коленчатый вал производят на АВТОВАЗе. А вот облегченную шатунно-поршневую группу закупают у компании Federal Mogul — Восток (Тольятти). На юбку поршня нанесено графитовое покрытие, форма юбки откорректирована для увеличения пятна контакта. Кольца такие же, как на других моторах семейства, только маслосъемные имеют хромированное покрытие. Высота жарового пояса увеличена на 1,3 мм, и теперь так называемая компрессионная высота составляет 26,7 мм против 25,4 мм у моторов объемом 1,6 л. Плата за увеличение рабочего хода поршня при той же высоте блока — уменьшение длины шатуна с 133 до 128 мм. Нижняя головка шатуна выполнена по так называемой разрывной технологии — как и у нынешних 1,6‑литровых моторов.

ГЦ1–6

Коленчатый вал — с увеличенным радиусом кривошипа. Рабочий объем цилиндров прирос благодаря большему ходу поршней.

Коленчатый вал — с увеличенным радиусом кривошипа. Рабочий объем цилиндров прирос благодаря большему ходу поршней.

Регулировка фаз потребовала модернизации системы смазки. Установлены коренные вкладыши с маслораздающей канавкой переменного сечения — для снижения расхода масла. Впервые на вазовском моторе появился маслонасос зарубежного производства — южнокорейский GMB. Производительность отечественных насосов составляет 34–38 л/мин при оборотах двигателя 6000 об/мин, а GMB выдает 54–60 литров. Корпус насоса алюминиевый, а не чугунный. Сечение маслозаборника, разумеется, увеличено. Алюминиевый поддон картера двигателя имеет фланец для сопряжения с картером сцепления, что повышает жесткость силового агрегата. Объем масляного картера — 4,4 л против 3,2 л у двигателя 1.6.

Водяной насос тоже корейский, с добротными подшипником и уплотнениями, гарантирующими надежность. Он лучше серийных вазовских: помимо прочего выше производительность. Пластиковый модуль впуска делает тольяттинская фирма Мотор-Супер. Газодинамические характеристики впускного тракта оптимизированы под новый мотор. Развитое оребрение модуля позволило уменьшить шум. Система управления двигателем работает не с показаниями массового расхода воздуха, а рассчитывает параметры через температуру и давление. Поэтому в модуле впуска есть гнездо для соответствующего датчика.

ГЦ2

Головка блока цилиндров. Распределительные валы сделаны в Корее. Хорошо видны задающий диск и датчик фаз, позволяющие отслеживать положение впускного вала.

Головка блока цилиндров. Распределительные валы сделаны в Корее. Хорошо видны задающий диск и датчик фаз, позволяющие отслеживать положение впускного вала.

Головка блока цилиндров — отечественного производства. В литье есть дополнительные каналы, по которым масло поступает к регулятору фаз, а также гнёзда для соленоида управления регулятором и датчика фаз. На впускном распределительном валу фиксируют задающий диск, отслеживающий его положение. Значительно переработана водяная рубашка для лучшего охлаждения камеры сгорания. Кроме того, снизили сопротивление прокачиванию жидкости. Газовые каналы доработали для лучшего наполнения цилиндров и интенсификации вихревого движения топливовоздушного заряда.

Распределительные валы южнокорейского производства поставляет компания Toyota Tsusho. Они полые внутри, а кулачки изготовлены методом порошковой металлургии. Такой распределительный вал существенно легче прежнего, чугунного. Клапаны фирмы Mahle тоже облегченные, со стержнями диаметром 5 мм. Сухари, направляющие, маслосъемные колпачки — соответствующего размера. Цель облегчения — снижение инерционности системы, что дает возможность с бóльшим ускорением открывать клапан.

ГЦ2–2

Распределительные валы сделаны в Корее. Хорошо видны задающий диск и датчик фаз, позволяющие отслеживать положение впускного вала.

Распределительные валы сделаны в Корее. Хорошо видны задающий диск и датчик фаз, позволяющие отслеживать положение впускного вала.

На впускном распределительном валу установлен механизм регулирования фаз гидравлического типа. Его конструкция традиционна, а вот размеры — под наш мотор. Поставщик — немецкая фирма INA. Валы приводит зубчатый ремень производства компании Continental. По заверениям заводских специалистов, он будет служить 180 000 км.

Новый мотор весит 99,3 кг. При испытаниях на стенде он продемонстрировал высокую топливную экономичность. В некоторых режимах — и вовсе рекордсмен среди вазовских двигателей! Ресурс — 220 000 км, но при заботливом отношении проходит до 400 тысяч. Еще одна радость для будущих покупателей: мотор можно заправлять бензином АИ‑92. Конечно, на 95-м мощностные показатели будут выше, но тут уж выбирать владельцу — экономить или «отжигать».

ГЦ2–3

Регулятор фаз (INA) и соленоид управления регулятором.

Регулятор фаз (INA) и соленоид управления регулятором.

Похоже, сдвинулись не только фазы в механизме газораспределения, но и отношение к потребителю. Кстати, потенциал нового мотора не исчерпан. Перспектива — второй регулятор фаз, теперь уже на валу выпускных клапанов. И на этом, уверен, развитие этого двигателя не закончится.

Контактная информация автосалона Major LADA

Major LADA — официальный дилер LADA в Москве

Как проехать

Личный транспорт

Из области

Со стороны области при движении по Новорижскому шоссе разворот на Красногорск, далее примерно 2 км в сторону области.

Из центра

8 км по Новорижскому шоссе в сторону области.

Корпоративный автобус

С 1 июля 2019 года остановка маршрутного транспорта для клиентов будет осуществляться по адресу: м. Строгино, Строгинский бульвар д.9., выход из метро №3 напротив магазина «Пятерочка».

Как добраться на метро: Первый вагон из центра, из стеклянных дверей направо и сразу налево. Выйдя на улицу, идите 80 метров вдоль проезжей части к остановке «Такси».

От метро Строгино. Начало движения: 8:00. Конец движения: 21:25. Интервалы: 8:00, 8:55, затем каждые 30 мин.

От Новая Рига BMW. Начало движения: 8:25. Конец движения: 21:45. Интервалы: 8:25, 9:15, затем каждые 30 мин.

От Новая Рига Мajor-City. Начало движения: 8:30. Конец движения: 21:50. Интервалы: 8:30, 9:20, затем каждые 30 мин.

Возможны задержки в работе корпоративного транспорта в связи с дорожной ситуацией.

АА МЭЙДЖОР АВТО

деревня Михалково, дорога Балтия, дом 25 км ТСК АВТОС FORD, литер 10Б, этаж 1, пом1, каб 1

Салон:

  • телефон: +7 (495) 153-33-20
  • режим работы в будние дни:

    8:00 - 22:00
  • режим работы в субботу:

    8:00 - 22:00
  • режим работы в воскресенье:

    8:00 - 22:00
СТО:
  • телефон: +7 (495) 153-33-20
  • режим работы в будние дни:

    8:00 - 22:00
  • режим работы в субботу:

    8:00 - 22:00
  • режим работы в воскресенье:

    8:00 - 22:00

Реквизиты

Название фирмы   ООО «Красногорск Мэйджор»
ИНН 5024089078
Регистрационный номер 1075024006089

Сотрудники отдела корпоративного обслуживания

Иванов Павел

Персональный менеджер по корпоративным продажам

  +7 (495) 229-20-80 доб. 4525

[email protected]

 

Обратная связь

Стоимость ТО Лада Ларгус

Выберите модель автомобиля:

  • Largus K4M (1.6 16v)X
  • Largus K4M (1.6 16v) A/CX
  • Largus K7M 710 (1.6 8V)X
  • Largus K7M 710 (1.6 8V) A/CX

Укажите пробег:

Чтобы сделать на Лада Ларгус прохождение ТО гораздо дешевле без ущерба для авто и выданной на него гарантии, достаточно просто отказаться от услуг официального дилера и обратиться в специализированную СТО. К тому же ТО Ларгус у дилера включает себя только обязательный минимум работ, которых часто оказывается недостаточно для поддержания машины в полностью исправном техническом состоянии.

 

Мастерами сертифицированного сервиса выполняется именно тот перечень работ, который необходимо конкретному автомобилю: при формировании списка учитывается год выпуска и условия эксплуатации авто, а также тип установленного двигателя, дорожные и погодные условия в регионе присутствия машины — в Москве и области. Другими словами, сервис предлагает на Лада Ларгус ТО пройти не для формальности, и для действительного продления срока эксплуатации машины. При этом на Ларгус цена ТО в специализированном автосервисе позволяет проводить техобслуживание с существенной экономией для автовладельца.

Регламент ТО Лада Ларгус

Регулярное прохождение ТО Ларгус — это обязанность водителя, заботящегося о своём транспортном средстве. Кроме того, заводом-производителем установлена конкретная периодичность ТО Ларгус, нарушение которой приводит к снятию авто с заводской гарантии.

 

Есть обязательный и проводимый при каждом ТО Лада Ларгус перечень работ, включающий в себя:

  • замену масла вместе с масляным фильтром;
  • замена салонного фильтра и воздушного фильтра двигателя;
  • комплексная диагностика машины.

 

Официальный график ТО Лада Ларгус предписывает автовладельцам посещать сервис для техобслуживания каждые 15 тыс. км пробега или один год эксплуатации машины — всё зависит от того, какое условие наступит раньше.

Регламент ТО Лада Ларгус 8 клапанов

Для восьмиклапанной конфигурации Ларгус регламент ТО остаётся прежним: посещать автосервис необходимо каждые 15 тыс. километров пробега или один год эксплуатации. Но на этих типах двигателя немного смещена периодичность замены приводного ремня дополнительного оборудования ДВС: в зависимости от конфигурации, она составляет 60 или 120 тысяч километров пробега (4 или 8 лет эксплуатации соответственно).

Регламент ТО Лада Ларгус 16 клапанов

Версия машины с 16-клапанным мотором также обслуживания согласно общепринятому регламенту. ТО 1 Ларгус 16 клапанов обязано проводится при пробеге в 15 тыс. км или один год эксплуатации, через аналогичный интервал проводятся и последующие техобслуживания.

Ларгус 0 ТО

Нулевое ТО Ларгус проводится при пробеге 2000 километров или через 2 месяца после покупки машины в салоне. Это обслуживание необязательное, но рекомендовано специалистами. В ТО 0 Лада Ларгус входит осмотр и диагностика авто, по желанию клиента меняется масло вместе с фильтром.

Ларгус ТО 1

Первое ТО Лада Ларгус проводят после 15 тыс. км пробега или 12 месяцев эксплуатации с момента покупки машины. ТО 1 Лада Ларгус (ТО 15000) включает в себя стандартный минимум работ и обязательно к проведению.

 

Первое ТО Ларгус 16 клапанов и 8 клапанов проводится с аналогичным интервалом и включает в себя одинаковый список проводимых процедур.

Ларгус ТО 2

Ещё через 15 тыс. км или год после первого техобслуживания проводится ТО 2 Лада Ларгус, которое также обязательно к проведению. Помимо стандартных процедур, в проводимый при ТО 2 Лада Ларгус перечень работ дополнительно включена замена свечей.

 

Кроме того, стоимость ТО 2 Ларгус может быть увеличена ввиду необходимости балансировке колёс, проверяемой в рамках второго техобслуживания.

Ларгус ТО 3

Ещё спустя 15 тысяч километров или год эксплуатации после ТО 2 Ларгус Кросс производится третье техобслуживание.

 

В ТО 3 Лада Ларгус, помимо обязательных работ, включены процедуры по замене тормозной жидкости с обязательной прокачкой системы.

ТО 4 Ларгус

При ТО 60000 Ларгус, проводимом через аналогичный период после третьего техобслуживания, проводятся полностью повторяющие второе техническое обслуживание работы. Но на моделях с 8-клапанными ДВС с ГУР при ТО 4 Лада Ларгус производится замена приводных ремней дополнительного оборудования. Аналогичные работы осуществляются мастерами сервиса при проведении на Лада Ларгус ТО 8 (ТО 120000).

ТО 5 Ларгус

ТО 5 Лада Ларгус выполняется ещё через 15 тыс. километров пробега и полностью дублирует собой первое техническое обслуживание.

Ларгус ТО 6

При ТО 90000 Ларгус основные работы дополняются заменой свечей зажигания, тормозной жидкости и антифриза. Также в рамках ТО 6 Лада Ларгус осуществляется замена ремня дополнительного оборудования на двигателях 16V.

 

Спустя 15 тыс. км или год эксплуатации проводится ТО 105000 Ларгус (ТО 7), предусматривающее аналогичный первому техобслуживанию список процедур.

ТО Ларгус 8 клапанов

ТО Лада Ларгус 8 клапанов обязано проводится в соответствии с общим регламентом. При этом стоимость 1 ТО Лада Ларгус с 8-клапанным двигателем не отличается от цены техобслуживания моделей с ДВС 16V.

ТО Ларгус 16 клапанов

При проведении ТО Лада Ларгус 16 клапанов необходимо руководствоваться общим регламентом. Это касается как списка проводимых работ, так и периодичности посещения сервиса.

 

Уточнить, сколько стоит ТО Ларгус в комплектации с ДВС 16V, вы можете с помощью калькулятора техобслуживания на странице.

ТО Ларгус Кросс

На Лада Ларгус Фургон ТО проводится по такому же алгоритму, что и на версии Кросс. Другим словами, регламентное ТО Ларгус этой конфигурации проводится каждые 15000 км пробега или 12 месяцев эксплуатации.

Стоимость ТО Ларгус

Цена ТО Лада Ларгус в нашем сервисе на 40–60% ниже предлагаемой официальными дилерами стоимости техобслуживания. Это стало возможным благодаря уникальной услуге от нашей компании «Правильно ТО». Она не только включает в себя индивидуальный перечень проводимых работ, но и позволяет сэкономить за счёт сниженной стоимости используемых расходных материалов и запасных частей. При этом низкая стоимость ТО Лада Ларгус идеально сочетается с безупречным качеством проводимых работ.

 

Чтобы узнать, сколько стоит ТО Лада Ларгус в вашей комплектации, обратитесь к представителю нашего автосервиса любым удобным для вас способом.

ВАЗ-2108 (Lada Samara Fun). Год выпуска: 1991. Lada Samara Fun — доработанный в 1988 году ... | Аукционы

Аукцион №252. Автомобили

26 июля 2020 года

Аукцион завершён

Олдтаймеры и советский автомобильный винтаж

26 июля Аукционный дом «Литфонд» проведет аукцион олдтаймеров и винтажных автомобилей в автомузее «Моторы Октября». Ценителям советского автопрома предложат более 25 автомобилей — от недорогого Москвича-412 за 2 550$ до легендарной Чайки (ГАЗ-13) за 35 150$.

В отличие от ЗИМа, который официально находился в свободной продаже населению, «Чайка» никогда не была товаром народного потребления, даже не имела установленной розничной цены. Автомобили использовались в качестве персонального транспорта высшей номенклатуры (преимущественно — министров, первых секретарей обкомов), который выдавался как составная часть положенного «пакета» привилегий. В разное время Чайки были подарены Валентине Терешковой, Фиделю Кастро, Георгию Жукову, Михаилу Шолохову, Галине Улановой. Автомобиль Терешковой был единственной машиной, окрашенной в белый цвет.

Помимо этого, вашему вниманию предлагаются культовые советские автомобили по беспрецедентно низким стартовым ценам:

  • Москвич-2140 — 2 850$.
  • Москвич 412Э — 3 550$.
  • ЗАЗ-968 «Запорожец» — 4 250$.
  • ВАЗ 2103 «Жигули» — 4 950$.
  • ГАЗ 69А — 11 250$.
  • ГАЗ 22В «Волга» — 12 650$.
  • ГАЗ 24 «Волга» — 13 000$.

и многое другое.

В представленной коллекции есть бюджетный автомобиль и европейского производства — Volkswagen Typ 4 (VW 411) 1969 года всего за 9 900$. Данный автомобиль — один из немногих сохранившихся в оригинале представителей семейства Typ 4. По задумке руководства компании Volkswagen, Typ 4 должен был избавить фирму от имиджа производителя маленьких, дешёвых автомобильчиков типа «Жук». Рекламная кампания модели проходила под слоганом: «Таких Volkswagen ещё не бывало!». И это было правдой. 411-й стал первой моделью Volkswagen с несущим кузовом, четырьмя дверьми, гидроприводом сцепления, инновационным спортивным шасси с передней подвеской типа «Макферсон». Предлагаемый Вашему вниманию автомобиль был завезён в СССР ещё в 1970 году. Это была одна из двух машин Typ 411, которые прибыли новыми к нам в страну. Несмотря на долгую жизнь в России, автомобиль полностью сохранил свою оригинальность и хорошее техническое состояние.

Помимо вышеперечисленных ретро-автомобилей в коллекции представлены и другие не менее легендарные западные модели. Уточненные, в уникальном дизайне, с присущими тому времени чертами, они представляют собой произведения автомобильного искусства, вызывающие восхищение не только у любителей старинной классики. Коллекция разнообразна и уникальна, многие из автомобилей сейчас очень редки и представляют особую ценность для коллекционеров.

Приглашаем вас принять участие в аукционе «Олдтаймеры и советский автомобильный винтаж», который пройдет 26 июля в 15:00 в автомузее «Моторы Октября». Со всеми лотами можно ознакомиться на предаукционной выставке в музее «Моторы Октября» на заводе «Кристалл» с 6 по 26 июля по предварительной записи.

Прием заочных ставок до 12:00 26 июля 2020 года. Зарегистрироваться на онлайн-аукцион можно на сайте Аукционного дома «Литфонд» www.litfund.ru

Если вы являетесь владельцем классического раритетного автомобиля и хотите его быстро продать, мы с удовольствием вам поможем. Уточнить условия и другие интересующие вас вопросы вы можете по телефону +7 903 278-18-90 (Ксения). Обращайтесь!

20 стихов, которые вы любите больше всего: # 8 Fret Not

«Не бойтесь?» Правильно. Понял. Теперь пришло время для чего-то посложнее: «Не волнуйтесь».

По правде говоря, я беспокоюсь мирового уровня. Я беспокоюсь, что не закончу что-то вовремя. (О, вы знаете. Как сообщение в блоге.) Тогда я беспокоюсь, что это никому не понравится. Если им понравится , я боюсь, им не понравится следующий.

Были там? Там сейчас? Этот стих определенно для вас.

«Ни о чем не беспокойся, но в любой ситуации молитвой и прохождением, с благодарением излагай свои просьбы к Богу. Филиппийцам 4: 6

Да, мы знаем это. Слышал миллион раз. (Ладно, хоть сотня.)
«Не волнуйся. Молитесь-й. "

То, что мне нужно, - это слова, заключенные в этот стих, которые раскрывают секрет , как перестать беспокоиться.

Паула, одна из многих, кто выбрала этот стих, призналась: «Когда наш сын делал в жизни серьезные неразумные выборы, я вдыхал и выдыхал с этим стихом, чтобы не потерпеть неудачу в ожидании.”

Следуя ее хорошему примеру, давайте сделаем глубокий вдох и погрузимся.

«Не беспокойтесь…» Филиппийцам 4: 6

Читается как команда. «Не волнуйся» (AMP). «Никогда не волнуйся» (GW). У меня уже проблемы, потому что (большое удивление) я не люблю, когда мне говорят, что мне делать. Лучшие начальники, которые у меня когда-либо были, были теми, кто говорил мне, чего они хотят, но заставляли меня думать, что это моя идея.

Если это ты, расслабься.Бог редко просит нас что-либо сделать, не показывая нам , как , и не говоря почему, не говоря уже о том, что дает нам силу , , которую мы должны будем выполнить.

«… о чем угодно…» Филиппийцам 4: 6

Совершенно очевидно, что Бог не хочет, чтобы что-то оставалось в нашем списке «То, о чем нужно беспокоиться». «Ничто не должно вызывать у вас беспокойства» (НОКС), - говорит он. И это греческое слово médeis буквально означает «ни один».

Что в вашей жизни сейчас больше всего беспокоит? Та огромная вещь, которая давит на ваше сердце 24 часа в сутки, 7 дней в неделю? Бог говорит не беспокоиться об этом.

Право. Даже не в этом. Вау.

«… но…» Филиппийцам 4: 6

Звучит как бы негативно, но это просто говорит нам, какая альтернатива беспокойству, беспокойству и тревоге. «Вместо» (NET), «скорее» (CEB), «наоборот» (CJB) вот что происходит, когда мы следуем плану Бога, даже в разгар жизненных испытаний.

«… в любой ситуации…» Филиппийцам 4: 6

Каждое - одно из тех слов, которые невозможно обойти.Не , не , а не . «Все обстоятельства» (AMP), уверяет нас Господь. «Каждая потребность» (KNOX). Каким бы длинным ни был наш список забот, Бог уже здесь. Он «во всем» (GNV).

Блудный ребенок? Супруг-алкоголик? Пустой банковский счет? Страшный отчет от врача? Да, все эти ситуации. Тяжело, тяжело, тяжело, но не слишком тяжело для Бога.

Для Бога нет ничего слишком простого. Каждые и все говорят нам, что он тоже может справиться с мелочами.Сюзанна, которая также выбрала этот стих в качестве своего любимого, знает, что о чем бы мы ни беспокоились, «Бог хочет услышать об этом, каким бы мелким или тривиальным оно ни было».

«… молитвой и прошение…» Филиппийцам 4: 6

По-гречески proseuché означает интерактивная молитва. Не только разговаривать, но и слушать. Если вы можете найти одну минуту для молитвы, найдите еще одну минуту, чтобы дождаться ответа Господа. Только. Один. Минуту.

Второе слово, петиция, звучит как юридический термин: «Вот, подпишите это ходатайство.На самом деле это означает «искать, просить, умолять, умолять» (KNOX). Проще говоря, «просите и молитесь» (NIRV). Вместо того, чтобы волноваться и суетиться, «превратите свои заботы в молитвы» (MSG).

А вот и скрытый ключ, который освобождает нас.

«… с благодарением…» Филиппийцам 4: 6

Даже когда мы просим и молимся, мы уже благодарим Бога за то, что он выслушал и ответил. Мы также благодарим его за «все, что он сделал» (NLT) в прошлом, за все, что он делает сейчас, и за все, что он собирается делать в будущем.

Вера, возлюбленные. Вера позволяет нам молиться «с благодарным сердцем» (GNT).

Если вы ищете что-то значимое для публикации в Facebook или Twitter, это прекрасно резюмирует наш урок от Господа: «Ни о чем не беспокойтесь. Поговорите с Богом обо всем. Спасибо ему за то, что у вас есть. Спроси у него то, что тебе нужно ». (Филиппийцам 4: 6 WE)

«… передай свои просьбы Богу». Филиппийцам 4: 6

Это также переводится как «просить» (NCV) и «говорить» (NIRV), но глагол «присутствовать» помогает нам представить, что мы отдаем свои нужды Господу как дары.Если хотите, аккуратно упакованный в коробку и обернутый лентами.

Мы с тобой знаем, как это работает с подарками. Вы не можете забрать их обратно.

Какими бы уродливыми ни казались вам эти заботы, Бог с радостью заберет их из ваших рук. «Он хочет услышать ваши просьбы» (ГОЛОС), так что не стесняйтесь рассказывать ему все. «Сделайте свои желания известными Богу» (AMP). Да, «каждая деталь по вашему желанию» (PHILLIPS).

Ваши заботы для него не в тягость. Они не мешают. Это прекрасный дар веры, доверия и благодарности.

Это для Тебя, Господь. Спасибо, что взяли их.

Он одновременно раздает подарки и принимает просьбы. Вот , как и , почему мы не можем волноваться. Огромное облегчение, да?

В некоторых переводах этот стих заканчивается точкой с запятой или точкой с запятой, что означает, что впереди еще хорошие новости. Я включаю сюда эти утешительные слова, так что мы получаем счастливый конец: мир .

«Ни о чем не беспокойся, но в любой ситуации молитвой и прохождением, с благодарением излагай свои просьбы к Богу.И мир Божий, превосходящий всякое понимание, будет охранять ваши сердца и ваши умы во Христе Иисусе ». Филиппийцам 4: 6-7

Теперь ваша очередь

Вернуться к той огромной вещи, которая давит на ваше сердце 24/7. Что вам потребуется, чтобы упаковать эту ситуацию в подарочную упаковку и передать ее Богу, зная, что она в очень надежных руках? И как ваши сестры могут молиться за вас в процессе?

Чтобы поделиться своими мыслями, просто нажмите «20 стихов, которые вы любите больше всего» в верхней части электронного письма, и вы перейдете на мой блог на веб-сайте.Затем укажите свой ответ в разделе «Оставить комментарий» внизу. Благослови вас за минутку, чтобы добавить свой голос к разговору.

В следующий раз мы вернемся к Ветхому Завету и распакуем 7 стихов, которые вам нравятся. Эта красотка попала бы в мой собственный список 10 лучших. О, детка. Приготовься.

Твоя сестра, Лиз

В турне, на Facebook, в Twitter, на Pinterest, на Flickr

Набор для обнаружения IL-8 (человека) LANCE Ultra TR-FRET, 500 точек анализа

Набор для обнаружения человеческого IL-8 LANCE Ultra разработан для обнаружения и количественного определения человеческого интерлейкина 8 в средах для культивирования клеток с использованием гомогенного анализа TR-FRET (этапы без промывки и разделения).

Набор на 500 точек содержит достаточно реагентов для работы с 500 лунками в 384-луночном формате с использованием реакционного объема 20 мкл (15 мкл образца). Набор на 10 000 точек содержит достаточно реагентов для обработки 10 000 лунок в 384-луночном формате с использованием реакционного объема 20 мкл (15 мкл образца).

  • Этапы без промывки, без разделения
  • Технология TR-FRET
  • Чувствительное обнаружение
  • Высокая воспроизводимость
  • Более быстрое получение результатов
  • Простая автоматизация
  • 96-луночный, 384-луночный и 1536- форматы лунок

LANCE и LANCE (возбуждает хелатный лантаноид) Ultra - это наши TR-FRET (временное разрешение резонансного переноса энергии флуоресценции), гомогенные (без промывки) технологии.Одно представляющее интерес антитело метят донорным флуорофором (хелат LANCE Europium), а вторую молекулу метят акцепторным флуорофором (краситель U Light ). При возбуждении на длине волны 320 или 340 нм энергия может передаваться от донорного хелата европия к акцепторному флуорофору, если он достаточно близок для FRET (~ 10 нм). Это приводит к испусканию света с длиной волны 665 нм.

Интерлейкин 8 (IL8 или CXCL8), член семейства хемокинов ELR + CXC, представляет собой полипептид 8,4 кДа, который образует гомодимеры in vivo.IL8 секретируется несколькими типами клеток: фибробластами, моноцитами, макрофагами и эндотелиальными клетками, среди многих других, в ответ на воспалительные стимулы. Это хемоаттрактант и активатор нейтрофилов, направляя их из периферической крови к месту воспаления. Он также является мощным ангиогенным фактором, способствующим миграции и пролиферации эндотелия и эпителия при некоторых видах рака, и связан с метастазированием. Он передает сигналы через два специфических рецептора, связанных с G-белком, CXCR1 и CXCR2, имеющих ~ 77% идентичности.

Legator Ninja R 300-PRO 8-струнная электрогитара с веерным ладом, накладка на гриф из черного дерева - натуральный атласный Берл - 7+ струнных гитар

Наша миссия

Наша команда музыкантов объединяет дух местного гитарного магазина с удобством Интернета, создавая надежный и удобный способ покупки.

Наша цель в Music Store Live - революционизировать способ покупки оборудования в Интернете. Дело не только в видео и ноу-хау; это о человеке на другом конце провода.Если вы находитесь в Токио или Толедо, мы приглашаем вас ощутить реальность живого музыкального онлайн-магазина и помочь нам создать лучший из возможных покупательский опыт. Как вы увидите в видео ниже, мы такие же музыканты, как и вы. Мы стремимся предложить лучшее оборудование, лучший онлайн-опыт и лучший персонализированный сервис в отрасли. Мы приглашаем вас познакомиться с нашей командой, и мы будем рады возможности познакомиться и с вами!

На MusicStoreLive.com мы с гордостью предлагаем бесплатную обратную доставку и 30-дневную политику возврата в 48 смежных штатах для всех новых * товаров стоимостью более 30 долларов.Это часть нашей миссии - перенести магазин гитар в вашу гостиную. Эта политика позволяет вам без проблем получить свое оборудование и опробовать его на собственном оборудовании, чтобы убедиться, что оно действительно соответствует вашему стилю игры и звуку. Если это не сработает так, как вы надеялись, мы отправим вам предоплаченную этикетку для возврата и проведем обмен или вернем вам деньги, как только мы вернем товар в том же состоянии, в котором он был куплен. Это так просто.

Пожалуйста, подождите 2-4 рабочих дня с даты получения для обработки возврата.

  • Ваш заказ должен быть отправлен на адрес выставления счета, связанный с вашей кредитной картой, PayPal или другим способом оплаты (если альтернативный адрес доставки не был одобрен специалистом MSL Gear).
  • Если вы хотите, чтобы груз находился в центре транспортной компании, вы обязаны согласовать это непосредственно с транспортной компанией.
  • Косвенная подпись потребуется при доставке для всех транзакций на сумму более 250 долларов США. Если вы хотите потребовать подпись для транзакции на сумму менее 250 долларов, запросите ее при размещении заказа.
  • Мы не страхуем посылки стоимостью менее 3000 долларов США. Если вы хотите добавить страховку для доставки или возврата, запросите ее при запросе вашего заказа или в начале возврата.
  • Все возвраты подлежат технической проверке по прибытии. Любой инструмент, который возвращается с повреждением, износом (включая следы отмычки), отсутствующими или замененными деталями, отсутствующими защитными или упаковочными материалами, не подлежит возмещению в полном объеме.
  • * Б / у / Открытая коробка / Винтаж / Товары с распродажей имеют ту же политику возврата, за исключением трехдневного окна возврата.
  • Заказы, отправленные в пределах Калифорнии, будут облагаться государственным налогом с продаж в размере 7,25%.

В большинстве случаев мы отправляем товар в тот же день, если ваш заказ размещен до 12:00. EST с понедельника по пятницу!

Подробная информация о правилах возврата
Ваш прибор просто не делает это за вас? Мы понимаем и абсолютно хотим, чтобы вы были в восторге от любого оборудования, которое вы покупаете на MusicStoreLive.com. Если вы недовольны своим заказом, вы можете бесплатно вернуть его нам в течение 30 дней с момента доставки.

  • Клиенты за пределами континентальной части США должны сами оплатить обратную доставку и несут ответственность за все применимые налоги и сборы.
  • Политика возврата не распространяется на индивидуальные заказы или модификации (установка самовывозом и т. Д.).
  • Свяжитесь с MSL по адресу [email protected] или (866) 256-5725, чтобы начать процесс возврата. Вы можете запросить возврат средств, кредит магазина или обмен.
  • Мы отправим вам этикетку возврата по электронной почте.
  • Отправьте нам товар в оригинальной упаковке с прилагаемой этикеткой для возврата.
  • Клиент несет ответственность за возврат объекта в Music Store Live в его первоначальном состоянии.
  • Возврат или обмен будут произведены в течение 3 рабочих дней с момента получения нами возвращенного товара.
  • Все возвращаемые товары проходят технический осмотр и подлежат оплате за возврат, если товар не возвращается в исходном состоянии. Плата за пополнение запасов определяется MSL.

Рассрочка и финансирование

Layaways

  • Внесите невозмещаемый минимум 10% от покупной цены на все, что есть на складе
  • Свяжитесь с MSL по адресу info @ musicstorelive.com или (866) 256-5725 для внесения первоначального депозита.
  • Погасите в удобное для вас время в течение 30 дней.
  • Комиссия за отсрочку платежа в размере 100 долларов США за каждый дополнительный месяц в течение первых 30 дней (для большинства товаров).

Финансирование

8 способов сыграть аккорд Feared F на гитаре от очень простого до продвинутого

Аккорд фа мажор - очень популярный аккорд на гитаре, но он вызывает множество проблем у новичков.Некоторые гитаристы пытаются играть в большом полном такте, что приводит только к множеству гудящих нот, а некоторые играют только супер-мини-версию, которая при неправильной игре может звучать слабо и тонко.

Как вы можете видеть из (моей довольно хитрой) иллюстрации, аккорд F Major может быть чертовски разочаровывающим аккордом, который заставляет людей проклинать до небес или заставлять взрослых мужчин и женщин плакать от боли и разбивать свои гитары. в отчаянии.

Что ж, не бойтесь, товарищ гитарист.В этом посте я покажу вам, как играть аккорд фа мажор в прогрессивной манере, начиная с жестких версий, а затем разбивая их на более простые формы.

Я также покажу вам, как сыграть необычную инверсию аккорда, которая действительно может добавить классности вашей игре в определенных ситуациях.

Некоторое время назад я показал вам несколько способов сыграть сложный аккорд си минор на гитаре, а в последнее время - аккорд си-бемоль на гитаре, который также является сложным аккордом для игры. Аккорд F является более распространенным аккордом, так как он находится в тональности до мажор - одной из клавиш CAGED на гитаре.

Аккорд F также используется в других тональностях, и довольно часто, когда музыкант играет в тональности соль мажор, он заменяет уменьшенный аккорд F #, чтобы ввести аккорд фа мажор. Это делает F действительно важным.

Вот несколько песен, в которых используется аккорд F (в большинстве не используется каподастр, но в некоторых используется).

  • Джон Леннон - Представьте
  • Oasis - Не оглядывайтесь в гневе
  • Coldplay - Ученый
  • Дэвид Боуи - Space Oddity
  • Сценарий - Супергерои (capo 3)
  • The Jam - That’s Entertainment (глава 3)
  • Призыв - Куда бы вы ни пошли (capo 2)
  • Сэм Смит - Останься со мной
  • Животные - Дом восходящего солнца

Как играть аккорд F на гитаре

Форма 1 - (Большой ужасный F)

Это версия F, которую больше всего боятся новички, и я могу понять, почему.Это жесткий аккорд. Запретить все 6 струн сложно, особенно на первом ладу.

Чтобы добиться успеха в этой версии, вам нужно потратить время на улучшение качества вашего ствола. Это означает использование отличной техники и следование советам в этом посте по барре-аккордам.

Например, насколько он прямой, насколько он близко к ладу и насколько высоко он расположен, а затем добавляйте по одному пальцу за раз, чтобы постепенно завершить аккорд. К счастью, есть гораздо более простые способы сыграть F.

Форма 2 - (Ствол С-образной формы)

Это старый крепкий орешек для многих гитаристов. Здесь вы играете аккорд до мажор пальцами 2, 3 и 4 () и играете барре на трех верхних струнах указательным пальцем и помещаете этот палец на пятый лад).

Это определенно роскошная форма, которая подходит для гитаристов среднего уровня, но не идеальна для начинающих.

Почему?

Это потому, что он такой жесткий и не используется во многих песнях (самый известный пример - вступление к "Under the Bridge" Red Hot Chili Peppers).

Форма 3 - (Ствол формы A)

Наша следующая версия - это аккорд барре, основанный на форме аккорда ля мажор . Вы видите, как мы взяли аккорд ля мажор, превратили его в барре-аккорд и теперь играем его выше по грифу?

Мне нравится играть этот аккорд следующим образом. Проблема в том, что всю работу выполняет ваш безымянный палец, поэтому некоторым гитаристам может быть сложно играть.

Некоторые гитаристы предпочитают играть эту версию всеми четырьмя пальцами, как вы можете видеть в версии ниже.

Мне никогда не нравилась эта вторая версия, потому что она неуклюжая, и хотя у меня не самые толстые пальцы в мире (не то чтобы они были оправданием), когда я играю на 8-м ладу, мне трудно уместить пальцы 2, 3 и 4 в линию на одном ладу.

Каким бы способом вы ни играли в эту версию , она очень удобна. В основном потому, что это версия фа с более высоким тоном и, следовательно, предлагает несколько различных тональных опций для аккорда.

Форма 4 - (Слегка зачищенная спинка)

Здесь у нас есть та же версия, что и для формы 1, но на этот раз мы переместили палец так, что он ладит только две верхние струны (B и высокая E), в то время как пальцы 2, 3 и 4 по-прежнему ладят те же ноты. . Это полезная версия для практики при построении формы 1.

Форма 5 (настоятельно рекомендуется)

Эта версия очень похожа на версию выше, но на немного легче играть на для большинства гитаристов, и она звучит почти так же.

По этим причинам мои ученики предпочитают играть в этой форме. Единственный раз, когда вышеуказанная форма лучше, чем эта версия, - это когда вы выбираете и нуждаетесь в выборе ноты на высокой струне E (что не так часто, если честно).

При воспроизведении этой версии убедитесь, что указательный палец, который находится на струне B, отклонен назад, чтобы намеренно убить высокую струну E, чтобы она не звенела.

Наконечник Power

Переход с фа мажор на до мажор - очень распространенное явление в музыке, и с ним многие борются.

Самое замечательное в этой форме состоит в том, что переход на С и обратно тоже довольно прост.

При переходе с F на C просто оставьте безымянный и указательный пальцы на месте, поднимите мизинец и переместите средний палец к струне D.

Это плавное изменение, если вы попробуете это несколько раз.

Форма 6 (Mini Barre)

Наша следующая версия - это та, которую, как я вижу, обычно преподают, но она не так практична в реальном мире.

Технически это должно быть проще, чем большинство форм, но в реальном мире это старый сложный аккорд для игры, и он не звучит так хорошо, так как в аккорде нет настоящего сильного баса, в отличие от моей любимой формы 5 Я не большой поклонник этой формы, но она может сработать для вас.

Форма 7 - (отлично подходит для начинающих)

Это, вероятно, форма «перехода», с которой все начинают. Это потому, что он использует всего 3 пальца и вообще нет запрета.

Это хорошая форма для начала, но играть на ней бывает сложно, так как в аккорде всего 3 струны.

Следовательно, вы должны быть осторожны при игре, чтобы не играть на ненужных струнах. Я обычно использую его только при выборе песен, для которых требуются только эти струны.

Если вы знаете эту форму, я бы попробовал перейти к следующей форме 5, чтобы аккорд звучал сильнее.

Дополнительно Дополнительно

Форма 8 - (Стильная инверсия)

Наша последняя версия немного отличается.Это инверсия аккорда . Инверсия аккорда происходит, когда мы переворачиваем аккорд и в основном делаем басовой нотой любую другую ноту, кроме основного тона. (Я сделаю урок об этом в будущем).

Обожаю инверсии аккордов.

Это отличный способ добавить аккорду изысканности. Проблема в том, что они не очень хорошо звучат, когда на них играют, поэтому изучите эту форму и немного поиграйте в нее - они, как правило, звучат класснее и интереснее, когда выбираются медиатором или какими-нибудь классными рисунками пальцев.

Фа-мажорные аккордовые расширения

Есть много других способов сыграть аккорд фа мажор, и, конечно же, есть множество расширений аккордов, которые могут быть построены на основе аккорда фа мажор, например, фа мажор 9, F7, Fadd9, F sus4 и т. Д. далеко F Major 7. Наиболее распространенный способ играть в это в версии ниже.

Маленькое предупреждение

Будьте осторожны с этим аккордом фа мажор 7.Многие гитаристы играют его вместо аккорда фа мажор, но дело в том, что F Major 7 - это другой аккорд.

Хотя она очень, очень похожа на фа мажор, нота ми на открытой высокой струне ми придает аккорду другой летний или джазовый (в зависимости от контекста) привкус.

Следовательно, используйте эту F Major 7 с умом и, самое главное, поймите, что иногда она будет работать вместо обычной F, а иногда - нет. Не делать различий между ними - небольшая ловушка для многих новичков.

Некоторые из вышеперечисленных форм используют барре-аккорды. Теперь, если барре-аккорды для вас трудны на данном этапе, изучите более легкие версии и продвигайтесь до полных барр-аккордов. (Скоро я официально выпущу свой курс барре-аккордов, который поможет решить ваши проблемы с барре-аккордами).

Разучите аккорд F!

В качестве обзора, если вы новичок, начните с формы 7, а затем продвигайтесь вверх по списку, чтобы в конечном итоге вы могли сыграть их все.

Shape 2 - это роскошь, но я рекомендую вам попробовать, когда вы освоитесь с остальным.

Аккорд фа, вероятно, первый аккорд, который действительно беспокоит новичка, поэтому не торопитесь и попробуйте несколько из них. Найдите то, что лучше всего подходит для вас и что вам нравится без звука, а затем разучите одну из вышеперечисленных песен, используя это.

Кроме того, как только вы научитесь играть все эти аккорды, вы должны научиться переключаться между аккордами.

Чтобы получить дополнительную помощь по этому вопросу, ознакомьтесь с моей книгой или курсом, посвященным этой теме.

Когда вы научитесь играть на всех этих формах, это будет отличным признаком того, что ваша игра на гитаре значительно улучшится.

Не забудьте оставить комментарий и сообщить, какой у вас любимый способ играть в F, и не стесняйтесь делиться любыми советами для других читателей или задавать любые вопросы по этой теме.

Надеюсь, теперь вы увидели, что существует множество различных способов сыграть этот аккорд, и все они подходят для разных уровней мастерства.

(Посещено 285 981 раз, 2 878 посещений сегодня)

Как играть гитарный аккорд Cm7 | До минор 7

Посмотрите две версии Cm7 с аккордами барре и попробуйте их в песнях.

Аккорд Cm7 (иногда пишется как до минор 7) воплощает в себе выразительную мягкость при игре. Это может вызвать отрезвляющую страсть, тоску или торжественность. С другой стороны, он также может обеспечить четкое, яркое звучание для приподнятого фанка или поп-мелодии в сочетании с правильной последовательностью мажорных аккордов. Доказывая его универсальность, мягкий, искренний характер аккорда Cm7 делает его идеальным для любовных баллад или песен с подавленным чувством.

Давайте рассмотрим несколько способов сыграть этот аккорд и послушать, как он демонстрирует свой универсальный материал в нескольких разных песнях.

Игра на аккорде CM7

Аккорд Cm7 можно сыграть несколькими способами. Два наиболее распространенных способа игры на Cm7 включают использование паттерна барре-аккордов. Техника барре-аккорда заключается в том, чтобы указательным пальцем «упираться» в лад.

Cm7 в 8 позиции

Первая версия аккорда Cm7, которую мы сыграем, начинается на 8-м ладу. Играя дальше по грифу, мы получаем более яркий и высокий звук. Чтобы сыграть аккорд на восьмой позиции с перемычкой Cm7, начните с зажатия указательным пальцем всех шести струн восьмого лада.Затем поместите безымянный палец на 10-й лад струны A. Играйте на всех шести струнах.

  • - Указательный палец: 8-й лад низкой E (6-й) струны
  • - Указательный палец: 8-й лад D (4-й) струны
  • - Указательный палец: 8-й лад G (3-й) струны
  • - Указательный палец: 8-й лад струны си (2-й)
  • - Указательный палец: 8-й лад высокой E (1-й) струны
  • - Безымянный палец: 10-й лад струны A (5-я)



Играйте на всех шести струнах вниз от нижней струны ми ми.

Cm7 в 3-й позиции

Давайте посмотрим на вторую версию аккорда Cm7, которая предлагает более низкий, потенциально более меланхоличный звук. Эта другая версия Cm7 с барр-аккордами начинается на третьем ладу.

Чтобы сыграть на ней, начните с того, что указательным пальцем переместите 3-й лад, начиная с вашей струны A. Проведите указательным пальцем по пяти струнам. (Вы не будете играть на низкой струне ми ми.)

Затем поместите безымянный палец на пятый лад струны D. Наконец, добавьте средний палец к 4-му ладу струны B.Играйте на пяти струнах вниз, начиная со струны A и опуская нижнюю E.

  • - Указательный палец: 3-й лад пятой струны A
  • - Указательный палец: 3-й лад G (3-й) струны
  • - Указательный палец: 3-й лад высокой E (1-й) струны
  • - Безымянный палец: 5-й лад струны D (4-й)
  • - Средний палец: 4-й лад струны си (2-й)



Проиграйте пять струн вниз от струны A.

Какие ноты составляют аккорд Cm7?

Аккорд Cm7 состоит из квартета нот, как показано ниже:

C, Eb, G и Bb

Песни, в которых используется аккорд Cm7

Аккорд Cm7 может обеспечить прочную основу фанка в сочетании с правильной мажорной прогрессией. Жизнерадостная свадебная песня Kool and the Gang - «Celebration» - музыкальное доказательство этого идеального сочетания. Cm7 вступает в игру в предварительном припеве, обеспечивая низкий и медленный изгиб в прогрессии, прежде чем темп снова ускорится в ультра-запоминающемся припеве песни.

В соответствии с фанк-стилем, аккорд Cm7 сочетается с аккордом Dm7, чтобы придать классическому фанку Ripple «Я не знаю, что это такое, но это точно фанк» фирменное звучание. Эта песня переключается только между двумя второстепенными аккордами септаккорда, но ее паттерны бренчания с привкусом фанка показывают, насколько много вы можете сделать всего с двумя аккордами.(В песне нет слов, но зато много чувств и ритма, и она гарантированно поднимет вам настроение.)

От фанка до свинг-рока, аккорд Cm7 полностью раскрывается в блюзовом гимне 40-х годов «Jump Jive-N-Wail» оркестра Брайана Сетцера. Эта песня является отличным примером - отличным примером 12-тактного блюза, используемого в оптимистичной обстановке, с нотками винтажного рок-н-ролла.

И еще один пример фанк-стиля Cm7 появляется в фанк-хите BT Express «ou Got It, I Want It».Отключение звука ладовой рукой и сверхбыстрая игра на 16-й ноте демонстрируют универсальность этого аккорда, который составляет ритмическую основу как припева, так и куплета.

Если вы хотите научиться играть еще больше аккордов, взгляните на библиотеку аккордов Fender Play. А если вы еще не являетесь участником, подпишитесь на бесплатную пробную версию Fender Play.

Динамическая настройка FRET в биосенсоре зеленого флуоресцентного белка

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Кристаллическая структура Twitch-2B

Мы расшифровали структуру с разрешением 2.5 Å (таблица S1A). Асимметричный блок состоит из двух мономеров (рис. S1A). Они представляют идентичные конформации отдельных доменов [среднеквадратичные отклонения (RMSDs) ниже 0,2 Å] и несколько иную междоменную конформацию (RMSD 0,992 Å), но, по-видимому, не собираются как симметричный гомодимер. Их интерфейс (рис. S1B), покрывающий 630 Å 2 ( 11 ), на самом деле значительно меньше, чем интерфейс стабильного димера ( 12 ). Кроме того, данные малоуглового рентгеновского рассеяния (МУРР) показывают, что в растворе Twitch-2B является мономерным (рис.S2). Поэтому мы сфокусируем наше описание здесь на мономере A. Кристаллическая структура показывает расположение донора и акцептора относительно минимального кальций-связывающего домена TnC, а также структуру оптимизированных линкеров (рис. 1). Структура кальций-связывающего домена очень похожа на C-концевой глобулярный домен куриного TnC (RMSD 0,84 Å) ( 13 ), на структуру ЯМР, решенную ранее ( 8 ), и на структуру кальмодулина. (RMSD 1,08 Å) ( 14 ).Главные оси двух бочкообразных β-доменов флуоресцентного белка ориентированы почти под перпендикулярным углом друг к другу. Стволы β практически не контактируют друг с другом (рис. 2A) с очень маленькой общей границей раздела (150 Å 2 ). Интерфейсы минимального кальций-связывающего домена с mCerulean3 и cpVenus cd также относительно малы, охватывая только 257 и 351 Å 2 соответственно (см. Ниже). Взаимодействия в основном носят гидрофильный характер (рис. 2А).

Рис. 2 Структурные детали Twitch-2B.

( A ) Полярные взаимодействия между остатками минимального домена TnC, mCerulean3 и cpVenus cd показаны пунктирными линиями. Остатки показаны в виде палочек. ( B ) Полярные взаимодействия, опосредованные остатками (показаны в виде стержней) от линкеров между mCerulean3 и кальций-связывающим доменом (у лосося), а также взаимодействия между cpVenus cd и кальций-связывающим доменом (пурпурный) .( C ) Гидрофобные взаимодействия между остатками (показаны в виде стержней) линкеров между mCerulean3 и кальций-связывающим доменом (у лосося), а также линкером между cpVenus cd и кальций-связывающим доменом (пурпурный) с остатками (серым цветом) из ядра минимального домена TnC. ( D и E ) Крупный план области вокруг N532 Twitch-2B и мутанта N532F Twitch-2B (Twitch-6).

Линкер между mCerulean3 и кальций-связывающим доменом (V 232 ADA) образует спираль 3 10 , которая прочно удерживается на месте водородными связями основной цепи от V232 и S236 в mCerulean3 до E301 и E239 кальция. -связывающий домен (рис.2Б). Затем линкер между кальций-связывающим доменом и cpVenus cd (P 305 IYPEL) образует полтора α-спиральных витка (рис. 2, B и C), карбонилы основной цепи E309 и L310 образуют водород. связывается с боковой цепью R551 (рис. 2B) cpVenus cd . Боковая цепь E309 также образует водородную связь с Y152 mCerulean3, плотно связывая три домена вместе. Остатки I306, Y307 и L310 этой короткой спирали участвуют в сети гидрофобных контактов (рис.2С). Очевидно, что скрининг оптимальных линкеров ( 8 ) привел к последовательностям со спиральными элементами, очень хорошо интегрирующимися в структуру минимального домена TnC, в то время как эти линкеры удерживают на месте донорный и акцепторный домены в основном за счет полярных взаимодействий.

Расчет эффективности FRET на основе структуры

Структура предоставила важную информацию для расчетов FRET. Во-первых, расстояние между центрами масс флуорофоров составляет 3,65 нм (рис. 1B).Затем внутри структуры флуорофоры mCerulean3 и cpVenus cd выровнены в конфигурации «голова к голове». Таким образом, мы могли точно определить относительную ориентацию дипольных моментов флуорофоров (рис. 1C; см. Материалы и методы), которые доступны из расчетов теории функционала плотности ( 15 ). С помощью этой объединенной информации мы вычислили коэффициент ориентации κ 2 , равный 1,98 (уравнение 1; Материалы и методы), и расстояние Ферстера, R 0 , равное 6.9 нм для пары FRET mCerulean3 / cpVenus cd (уравнение 3; материалы и методы). С этими параметрами, используя уравнение Фёрстера, E = R06 / (R06 + r6), теоретическая эффективность FRET, E , Twitch-2B была определена как 0,98. Эффективность FRET, экспериментально определенная с помощью декухания донора, составляет 0,78 (рис. S3A), что значительно ниже, чем эффективность, полученная на основе кристаллической структуры.

Два мономера Twitch-2B в асимметричном блоке (рис. S1A) не только имеют очень похожую конформацию (RMSD основной цепи 0.992 Å), но и очень похожие контакты упаковки кристаллов (рис. S1C). Таким образом, мы заключаем, что ориентация доменов в мономере сама по себе не ограничивается кристаллической упаковкой, а в основном внутримономерными взаимодействиями, описанными выше (рис. 2А), и, скорее всего, выбрана из пула уже существующих конформаций в растворе. Поскольку междоменные интерфейсы в мономере Twitch-2B относительно малы (рис. 2A), высокая гибкость решения может быть причиной наблюдаемого снижения эффективности FRET.Чтобы исследовать эту гипотезу, мы затем обратили внимание на передовые методы ЯМР.

ЯМР-исследование динамики биосенсора

Чтобы получить представление о возможной динамике, мы использовали парамагнитный ЯМР ( 16 ) с образцом Twitch-2B, где два сайта связывания кальция TnC были загружены диспрозием (Dy). Анизотропная магнитная восприимчивость комплекса TnC-Dy 2 индуцирует парамагнитный тензор выравнивания, который может быть определен из структуры ( 17 ) (см. Материалы и методы).Мы использовали спектрометры на 900 МГц и 1,1 ГГц, поскольку тензор юстировки квадратично зависит от магнитного поля. Если данный флуоресцентный белок является жестким по отношению к TnC, то тензор выравнивания, который он испытывает, идентичен TnC. Если, однако, флуоресцентный белок является динамическим по отношению к TnC, то это движение уменьшит тензор выравнивания первого ( 16 , 18 ). Это позволяет количественно оценить динамику флуоресцентных белков по отношению к TnC. В то время как диполярные связи усредняются в изотропном растворе из-за случайного изотропного переворачивания, парамагнитно-индуцированные тензоры выравнивания приводят к анизотропному распределению ориентации TnC и, следовательно, прикрепленных зеленых флуоресцентных белков в растворе, что приводит к неполному усреднению диполярного муфты, позволяющие наблюдать остаточные диполярные связи (RDC). Мы определили RDC метильных групп парамагнитно выровненного Twitch-2B ( 19 ) (см. Материалы и методы).Наблюдаемый диапазон RDC достаточен для измерения размера тензора выравнивания ( 20 ), так что отнесение метильных групп не было необходимым.

Мы обнаружили, что диапазон значений RDC и, следовательно, тензор выравнивания, испытываемый флуоресцентными белками, в 10 раз меньше, чем рассчитанные по жесткой рентгеновской структуре (рис. 3; см. Материалы и методы). Таким образом, динамика должна быть причиной несоответствия между расчетной и экспериментальной эффективностями FRET.Кристаллическая структура может быть только частью динамического конформационного ансамбля в растворе.

Рис. 3 Гистограммы парамагнитных данных RDC.

Прогнозирование RDC метильных групп в двух доменах флуоресцентного белка и TnC с использованием рентгеновской структуры (выделено пурпурным цветом). Тензор выравнивания, индуцированный двумя ионами диспрозия, связанными с TnC, является результатом трансляции тензора, полученного из кальмодулина (см. Материалы и методы). Экспериментальные RDC от парамагнитного ЯМР Twitch-2B (зеленый) и Twitch-6 (пурпурный).Дальность действия уменьшается в 10 и 5 раз для Twitch-2B и Twitch-6 соответственно.

Конструирование мутанта на основе структуры с улучшенной эффективностью FRET

Предполагая структурную целостность отдельных доменов, мы предположили, что линкерные области являются стержнем этой динамики. На границах раздела между доменом TnC и донорным и акцепторным доменами преобладают полярные взаимодействия (рис. 2А). Мы предположили, что замена этих взаимодействий гидрофобными контактами сделает линкеры жесткими и увеличит экспериментальную эффективность FRET.С этой целью мы разработали мутацию N532F (рис. 2, D и E) на поверхности cpVenus cd , создавая новое взаимодействие с F249 кальций-связывающего домена (рис. 2D). Как и ожидалось, эта мутация вызвала существенное увеличение максимального изменения отношения FRET с 800 до 1100% in vitro (рис. S4). В кристаллической структуре этого мутанта (Twitch-6; таблица S2) боковая цепь F532 действительно связывается в гидрофобный карман, образованный боковыми цепями F249, Asp262 и Y338 (рис. 2E).В остальном структуры Twitch-6 и Twitch-2B очень похожи (RMSD 0,25 Å), что приводит к почти идентичной теоретической эффективности FRET (см. Дополнительные материалы). Благодаря этой конструкции экспериментальная эффективность FRET Twitch-6 увеличилась до 0,90, с 0,78 для Twitch-2B (рис. S3B), а диапазон RDC, измеренных с Twitch-6, удвоился по сравнению с Twitch-2B (рис. 3). . Это указывает на сужение интерфейса между доменом TnC и cpVenus cd , и, таким образом, снижение динамики между доменами является причиной увеличения FRET.

Конформационные ансамбли в решении

Определив динамику как причину снижения эффективности FRET Twitch-2B в решении, мы хотели получить представление о конформационном пространстве, возникающем в результате этой динамики. Для этой цели мы выбрали конформационные ансамбли, исследующие динамику скелета исключительно на динамических линкерных областях между доменами флуоресцентного белка и доменом TnC (см. Материалы и методы), оценивая более 1 миллиона шестичленных ансамблей против наблюдаемых RDC и эффективности FRET (Таблица 1, рис.4 и Материалы и методы). Среди всех возможных ансамблей мы выбрали тот, который лучше всего воспроизводит как экспериментальную эффективность FRET, так и диапазон RDC (Таблица 1). Этот ансамбль полностью объясняет, как гибкость неупорядоченных остатков линкерных областей приводит к наблюдаемому снижению эффективности FRET и диапазона RDC.

Таблица 1 Результаты выбора ансамбля. Рис. 4 Ансамбли белков Twitch, согласующиеся с измеренными эффективностями RDC и FRET.

Ансамбли для Twitch-2B (слева) и Twitch-6 (справа) содержат по шесть структур каждый, причем самые большие отклоняющиеся структуры показаны зеленым и красным.Состояния, которые не являются этими крайними конформациями, прозрачны.

Влияние на усовершенствованную конструкцию датчика FRET

Таким образом, мы получили кристаллическую структуру флуоресцентного биосенсора кальция Twitch-2B и вместе с динамикой линкеров, определенной с помощью парамагнитного ЯМР, мы количественно оценили эффективность FRET. Поскольку динамика ограничивала эффективность FRET, мы успешно сконструировали ригидифицированный мутант с увеличенным FRET. Таким образом, структурные и динамические характеристики ратиометрических датчиков FRET обеспечили принципы проектирования, которые могут быть применимы к другим системам, в которых эффекты FRET используются для восприятия сигналов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Клонирование, экспрессия и очистка Twitch-2B и Twitch-6

Конструкция Twitch-2B была описана ранее ( 8 ). Для настоящего исследования кодирующую последовательность трехдоменного слитого белка клонировали в модифицированный вектор pET16b, кодирующий слитый белок с N-концевой меткой His 7 и расщепляющей последовательностью, распознающей вирус травления табака (TEV). Мутант Twitch-2B N532F (Twitch-6) был создан с использованием набора для сайт-направленного мутагенеза QuikChange (Agilent).Экспрессионные конструкции pET16bTEV-Twitch-2B и pET16bTEV-Twitch-6 трансформировали в штамм Escherichia coli BL21 (DE3). Экспрессию белка проводили при 303 К индукцией 0,5 мМ изопропил-β-d-1-тиогалактопиранозидом. Клетки собирали через 7 часов после индукции. Меченный селенометионином белок Twitch-2B был сверхэкспрессирован в штамме B834 метионин-ауксотрофа E. coli в минимальной среде с добавлением (+) - l-селенометионина в соответствии с группой по экспрессии белка EMBL (Европейская лаборатория молекулярной биологии) (www. embl.de).

Осадок клеток из 1 литра встряхиваемой культуры ресуспендировали в 60 мл лизирующего буфера [20 мМ трис-HCl (pH 7,9), 300 мМ NaCl, 20 мМ имидазол, 0,5 мМ фенилметилсульфонилфторид с одной таблеткой полного количества ЭДТА- свободных ингибиторов (Roche) на 100 мл лизирующего буфера]. Клетки лизировали ультразвуком с последующим центрифугированием при 27000 g и 277 К. Из супернатанта рекомбинантный белок очищали с помощью аффинной хроматографии с иммобилизованным металлом на 3 мл агарозной смолы Ni-нитрилотриуксусной кислоты (NTA) (Qiagen).Метку слияния His 7 отщепляли протеазой TEV и удаляли инкубацией с 1 мл Ni-NTA агарозной смолы. Белок диализовали против 20 мМ трис (pH 7,0) и 150 мМ NaCl. После доведения концентрации сульфата аммония в растворе белка до 1 М белок дополнительно очищали с помощью хроматографии гидрофобного взаимодействия на колонке с фенилсефарозой (GE Healthcare) объемом 10 мл. Белок элюировали с этой колонки 50-мл градиентом от 1 до 0 М сульфата аммония.Фракции, содержащие белок, объединяли и концентрировали до объема 2,5 мл с помощью концентратора для ультрафильтрации с MWCO (пороговая молекулярная масса) 30 кДа (Vivascience). Наконец, белок очищали эксклюзионной хроматографией на гель-фильтрационной колонке HiLoad 26/60 Superdex 200 мкг. Фракции пика объединяли, диализовали против 20 мМ трис-HCl (pH 7,0), 100 мМ NaCl и 5 мМ CaCl 2 , и концентрацию белка доводили до 20 мг / мл.

Флуоресцентная спектроскопия

Для спектроскопии рекомбинантного Twitch-2B in vitro белок был очищен от E.coli с использованием смолы Ni-NTA, как описано ( 6 ). Спектроскопию выполняли на спектрофотометре Cary Eclipse (Varian). Донорское расщепление Twitch-2B проводили путем расщепления Twitch-2B в связанном с кальцием состоянии в течение ночи при комнатной температуре с химотрипсином (70 Ед / мл; Sigma-Aldrich) при записи FRET. Небольшое оставшееся излучение cpVenus cd после переваривания химотрипсина было выборочно фотообесцвечено (5 мин) с помощью массива из шести светодиодов Luxeon Lumiled с пиком на длине волны 530 нм, с общей рассеиваемой мощностью 14. 7 Вт и 870 люмен. Для защиты mCerulean3 от обесцвечивания использовали LP (длиннопроходный) фильтр с длиной волны 500 нм. Связанный с кальцием Twitch-6 был очень устойчив к расщеплению протеазой. Следовательно, EGTA (конечная концентрация, 5 мМ) добавляли во время переваривания химотрипсина, чтобы получить спектр деквенированного mCerulean3.

Кристаллизация, сбор данных и определение структуры

Кристаллы Twitch-2B и Twitch-6 были получены путем диффузионного смешивания паров 1 мкл раствора белка с 1 мкл раствора для лунок [0.2 M Na-формиат (pH 7,0), 5 мМ CaCl 2 и 18-20% полиэтиленгликоля 3350]. Кристаллы были подвергнуты криозащите, перенеся их в хорошо раствор с добавлением от 16 до 18% глицерина на 1 мин и быстро охладив, погрузив их в жидкий азот.

Сбор данных проводился в PXII, SLS, Швейцария, с использованием детектора PILATUS 6M (Dectris). Собственные данные собирали при 100 К на длине волны 1 Å. Данные по производному селенометионина были измерены при 0,98 Å. Все данные были обработаны с помощью программного обеспечения для детектора рентгеновских лучей (XDS) ( 21 ) и масштабированы с помощью SADABS (Bruker AXS).Определение пространственной группы и статистический анализ выполняли с использованием XPREP (Bruker AXS). Фазирование выполнялось с помощью AutoSol ( 22 ).

Первоначальная модель была построена с помощью AutoBuild и дважды уточнена с помощью phenix.refine ( 23 ) с промежуточным созданием модели вручную с помощью Coot ( 24 ). Окончательная модель была получена путем комбинированного ручного отслеживания (Coot) и уточнения с использованием Refmac5 ( 25 ). На графике Рамачандрана 96,69% ​​остатков располагались в предпочтительной области 2.72% в разрешенной области и 0,58% остатков были выбросами. Кристаллическая структура Twitch-6 была решена с помощью PHASER ( 26 ), используя PDB (Protein Data Bank) запись 6GEL в качестве модели поиска. Построение и уточнение модели выполнялись, как описано для Twitch-2B. Для этого мутанта 96,68% остатков попали в предпочтительную область графика Рамачандрана, 2,83% попали в разрешенную область и 0,49% были выбросами.

Расчеты FRET

Фактор ориентации κ 2 может быть извлечен из структурной информации следующим образом: κ2 = (cos θT - 3 cos θD cos θA) 2 (1) где θ T - угол между эмиссионным переходом диполь донора и диполь перехода поглощения акцептора; θ D и θ A - углы между этими диполями и вектором r , соединяющим донорный и акцепторный флуорофоры ( 27 ).Ориентация дипольных моментов перехода относительно вектора связи C O (ω) в градусах ωD = 73 ° ωA = 76 ° была взята из Ansbacher et al. ( 15 ), а угловые параметры были извлечены из кристаллографических координат в угловых единицах θT = 152,95 ° θD = 149,17 ° θA = 26,79 °

Подробные вычисления объяснены в файле данных S1. Интеграл перекрытия, J (λ), был рассчитан из экспериментальных спектров поглощения и излучения изолированных доменов cpVenus и mCerulean3 соответственно (рис.S5) со сценарием Python, включенным в качестве дополнительной информации. J (λ) был определен как 2,052 × 10 15 M −1 см −1 нм 4 , следующим образом: J (λ) = ∫0∞FD (λ) εA (λ) λ4dλ = ∫0∞FD (λ) εA (λ) λ4dλ∫0∞FD (λ) dλ (2) где F D (λ) - нормированная интенсивность флуоресценции донора в диапазоне длин волн от λ до λ + Δλ. ε A (λ) - коэффициент экстинкции акцептора при λ.

Расстояние Ферстера, R 0 , может быть вычислено из ранее полученных экспериментальных параметров R0 = 0.211 (κ2n − 4QDJ (λ)) 1/6 (3) где Q D (0,87) - квантовый выход донора в отсутствие акцептора ( 4 ) и n , (1,33) показатель преломления водной среды.

Наконец, эффективность передачи энергии, E , может быть рассчитана как отношение скорости передачи к общей скорости распада донора в присутствии акцептора E = R06R06 + r6 (4)

Следуя этой процедуре, эффективность FRET была определена как E = 0. 979, из кристаллографической структуры Twitch-2B. Эквивалентный расчет, выполненный со структурой мутанта Twitch-6, дает E = 0,983 (см. Файлы данных S1 и S2).

ЯМР-спектроскопия

Мы экспрессировали белки Twitch-2B и Twitch-6 в минимальной среде Toronto, приготовленной из 100% D 2 O и пердейтерированной d-глюкозы и дополненной предшественниками аминокислот α-кетомасляной кислотой (метил-13C , 3,3-D2) и α-кетоизовалериановой кислоты (3-метил-13C, 3,4,4,4-D4), тем самым селективно мечение атомами 13 C и 1 H только метильных групп остатки валина, лейцина и изолейцина, сохраняя при этом остальные атомы C как 12 C и протоны как 2 H ( 19 ).

Сначала изотропные спектры образцов получали в буфере А [20 мМ Mops (pH 7,0), 100 мМ NaCl и 5 мМ CaCl 2 в 100% D 2 O]. Затем белки диализовали против буфера B [20 мМ Mops (pH 7,0), 100 мМ NaCl и 10 мМ EDTA] с последующим диализом против буфера C [20 мМ Mops (pH 7,0) и 100 мМ NaCl] и, наконец, заменяли на буфер С, приготовленный на 100% D 2 O, содержащем три эквивалента диспрозия, перед измерениями ЯМР. Концентрация белка в образцах была примерно 0.5 мМ.

Образцы были протестированы с помощью экспериментов с метил-TROSY ( 19 , 28 ) (рис. S7) при 900 МГц и 1,1 ГГц, а связи J и J + RDC были определены с использованием J -модулированного Эксперимент с метил-TROSY ( 29 ), изображенный на рис. S6 в виде матриц 2048 × 128 комплексных точек данных с 96 переходными процессами на приращение ( t 1 ). Общие использованные задержки модуляции J были следующими: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 и 20 мс (рис.S8). ЯМР-эксперименты проводились с использованием 5-мм TCI (криозонда тройного резонанса с инверсным детектированием) на спектрометре 900 МГц и 3-мм криозонда TCI на спектрометре 1,1 ГГц, оба оснащены консолями NEO (Bruker). Интенсивности (максимальная амплитуда) сигналов были извлечены с помощью CARA (компьютерное определение резонанса) ( 30 ) в экспериментах с обработкой NMRPipe ( 31 ) и проанализированы с помощью скриптов Python (рис. S8), следуя Pederson et al. ( 29 ).

Вычисление парамагнитного тензора

Мы взяли парамагнитный тензор из комплекса кальмодулин-IQ, связанного с диспрозием, из ( 18 ) и рассчитали суммарный тензор дважды занятого кальцийсвязывающего домена TnC. Сайт связывания кальция 1 TnC перекрывается с сайтом связывания лантанидов кальмодулина (CaM N60D). Мы повернули матрицу выравнивания с сайта связывания кальция из CaM на второй сайт связывания кальция TnC и добавили его к тензору сайта связывания кальция 1, таким образом получив общий тензор TnC.Затем этот тензор использовался для расчета RDC из парамагнитных белков Twitch ACaM = (1,05 10−31−1,92 10−322,04 10−31−1,92 10−32−1,22 10−316,46 10−322,04 10−316,46 10−321,67 10−32 ) ATwitch = (1,46 10−318,39 10−323,46 10−318,39 10−32−1,06 10−312,26 10−323,46 10−312,26 10−32−3,92 10−32)

Тензоры даны в м 3 M −1 .

Генерация ансамбля

Сначала мы индивидуально смоделировали все возможные двугранные углы основной цепи (ϕ и ψ; выборка с шагом 60 °) линкерных остатков (от Arg 229 до Gln 231 для mCerulean3 и Met 311 до Gly 313 для cpVenus), что не привело к стерическому конфликту между одним из модифицированных доменов флуоресцентного белка и доменом TnC.Каждую из двух линкерных областей моделировали независимо. Из всех возможных комбинаций ϕ, ψ (117 649) вращение mCerulean3 дало 477 возможных конформаций, в то время как cpVenus допускало 84 конформации, обеспечивая в целом 40 086 возможных конформаций.

Во-вторых, мы случайным образом объединили возможные структуры для mCerulean-TnC и TnC-cpVenus в ансамбли из шести членов. Мы случайным образом отобрали 1 миллион шестичленных ансамблей из 40 068 возможных комбинаций ϕ, ψ линкеров между mCerulean и TnC и между TnC и cpVenus, чтобы гарантировать правильное исследование конформационного пространства Twitch.

В-третьих, мы рассчитали диапазон RDC (используя тензор, полученный, как описано выше) и FRET ансамблей и сравнили их с экспериментальными значениями, определив коэффициент качества ансамбля Qens = ∑i = 1i = 6 (RDCi − RDCeRDCe) 2+ (FRETi-FRETeFRETe) 2, где RDC i - диапазоны распределения, субиндекс e указывает экспериментальное значение, а i указывает значение из члена ансамбля. Такое значение добротности отличается от 0, если согласования предсказанных откликов RDC и FRET от ансамбля отклоняются от экспериментальных данных, и 0 в случае полного согласия.Наконец, ансамбли были отсортированы по их Q и , и был выбран самый низкий из них.

Измерения SAXS

Данные SAXS были собраны на канале BM29 Европейского центра синхротронного излучения (ESRF) в Гренобле, Франция, с использованием автоматического устройства смены образцов ( 32 ). Белок диализовали либо против буфера A [20 мМ Mops (pH 7,0), 100 мМ NaCl и 5 мМ CaCl 2 ] (связанное с кальцием состояние), либо против буфера B [20 мМ Mops (pH 7,0), 100 мМ NaCl и 10 мМ ЭДТА] (без кальция).Перед измерением белок центрифугировали для удаления более крупных частиц. Образцы измеряли при концентрациях 2,5, 10 и 20 мг / мл. Буфер для диализа использовали для коррекции эталонного буфера. Данные собирали при 293 К с использованием длины волны 0,995 Å и расстояния от образца до детектора 2,867 м. Загружали сто микролитров каждой концентрации образца, собирали и объединяли 10 кадров. Образцы постоянно подавались в кювету, чтобы минимизировать эффекты радиационного повреждения.Изображения детектора были объединены и преобразованы в одномерные кривые рассеяния, а вклады буфера в рассеяние были вычтены с использованием программного обеспечения BsxCuBE. Дальнейшая обработка данных выполнялась автоматически с использованием онлайн-конвейера EDNA ( 33 ) для оценки качества образца и эффектов радиационного повреждения. Агрегации белков или радиационного повреждения не наблюдалось.

Данные были дополнительно проанализированы с помощью программного пакета ATSAS ( 34 ). Вкратце, первичная обработка и анализ данных проводились с использованием программ PRIMUS ( 35 ) и GNOM ( 36 ).

Теоретическое рассеяние от кристаллической структуры было рассчитано с использованием программы CRYSOL ( 37 ) (рис. S2), а молекулярные массы рассчитаны с использованием образца бычьего сывороточного альбумина в качестве стандарта.

Благодарности: Мы благодарим персонал компании SLS, X10SA за поддержку при сборе рентгеновских данных и ESRF, BM29 за поддержку при сборе данных SAXS. Мы благодарим M. Paulat, C. Schwiegk и A. Moritz за техническую помощь в производстве белка и K.Оверкамп для масс-спектров электроспрея. С. благодарит T. Gruene и G. Sheldrick за советы по уточнению кристаллической структуры и структурному анализу. К.Г. и П.Т.-М. поблагодарить R. Kuemmerle (Bruker Biospin) за измерения ЯМР на частоте 1,1 ГГц. Финансирование: Эта работа была поддержана Обществом Макса Планка и DFG SFB 870 (O.G.). П.Т.-М. был поддержан докторской стипендией Гумбольдта. Вклад авторов: P.T.-M. выполнен ЯМР. П.Т.-М. и К.Г. разработал парамагнитный метод ЯМР.П.Т.-М. рассчитаны структурные ансамбли. П.Т.-М. и С. выполнены измерения SAXS. К.Г. рассчитал FRET по рентгеновским структурам. Т.Т. и О.Г. определили экспериментальные эффективности FRET. С. кристаллизовал Twitch-2B и Twitch-6 и решил кристаллические структуры. Рукопись написана всеми авторами. С. разработал проект. Конкурирующие интересы: Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов. Доступность данных и материалов: Структуры депонированы с кодом 6GEL для биосенсора Twitch-2B и 6GEZ для мутанта Twitch-2B N532F (Twitch-6).Все данные, необходимые для оценки выводов в статье, представлены в документе и / или дополнительных материалах. Дополнительные данные, относящиеся к этой статье, могут быть запрошены у авторов.

Harley Benton представляет новые модели с веерными ладами MultiScale

Приблизительное время чтения: 1 минута

Harley Benton MultiScale-8 NT QEB DLX · Источник: Харли Бентон

Сегодня Harley Benton запускает новую линейку доступных моделей MultiScale с веерными 7 и 8 струнами.Эти новые гитары имеют расширенный ассортимент и поставляются на заводе со звукоснимателями Roswell Humbucking.

MultiScale Madness

Если вы ищете многофункциональный прибор по разумной цене, то новая серия MultiScale от Harley Benton может быть именно тем, что вы ищете. Характеристики у всех моделей одинаковые, различаются они количеством струн. Основной материал корпуса - липа с причудливым видом стеганого кленового шпона , что придает ему нотку высокого класса. Это уже зарекомендовавшая себя комбинация многих компаний, включая Ibanez и EVH , поэтому приятно видеть ее в этих ценовых категориях. Гриф - прочный, состоящий из пяти частей клен / нато , 24 средних jumbo веерных лада на грифе jatoba .

Розуэлл загружен

Каждая модель поставляется с набором хамбакеров Roswell PFH7 с ферритовым магнитом хамбакеров, доступных как в 7-струнном, так и в 8-струнном вариантах.Они подключаются к одному регулятору громкости и тембра с трехпозиционным переключателем. Другое оборудование включает в себя блокирующие устройства WSC , гайку с черным графитом и монорельсовый мост . 7-струнные модели доступны в цветах Black Satin Burst или Trans Red , а 8-струнные модели доступны в отделке Black Satin Burst или Emerald Burst .

Если вам по душе многомасштабная гитара, то за свои деньги эти новые модели Harley Benton заслуживают серьезного внимания.

Дополнительная информация

автор Jef

Теги из этого поста

Новости GTR Харли Бентон липа ятоба Розуэлл Транс красный .

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *